[生物—一选修l：生物技术实践]

 为了调查厦门自来水的质量情况，某研究小组对自来水水样中的细菌含量进行了测定，请回答下列问题：

 (I)在微生物的培养过程中，对培养基灭菌常用的方法是 。为防止冷凝水影Ⅱ向细菌的生长，需将培养皿     培养。

 (2)若小组采用平板划线法分离水样中的细菌，在培养基上共画了5个区域，则至少需要 次灼烧接种环。

(3)可通过滤膜法检测自来水中大肠杆菌的数量，将已知体积的水过滤后，将滤膜放在 培养基上培养。该培养基除了为大肠杆菌的生长繁殖提供水和碳源外，还应提供____等基本营养成分。

(4)某同学采用稀释涂布平板法统计菌落数目，菌落分布如图所示 推测该同学可能的操作失误是____。

[生物——选修1：生物技术实践]

生物兴趣小组试图探究牛和山羊的瘤胃中的微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能降解尿素的细菌（目的菌）。培养基成分如表所示，实验步骤如图所示。请分析回答问题：

（2）实验需要振荡培养，原因是                  。转为固体培养时，常采用              的方法接种，获得单菌落后继续筛选。

（3）在实验过程中：①培养基、培养皿；②玻棒、试管、锥形瓶、吸管；③瘤胃中液体．其中需要灭菌是    填序号）．

（4）分离分解尿素的细菌实验时，甲同学从培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落．甲同学实验结果差异的原因可能有       （填序号）①取样不同②培养基污染③操作失误④没有设置对照

（5）以尿素为唯一氮源的培养基培养“目的菌”后，加入指示剂后变红色，说明“目的菌”能分解尿素．理由是                                       。

[生物—选修1：生物技术实践]

牛、羊等反刍动物的瘤胃中生活的微生物中，有些是能够以尿素作为唯一氮源，研究人员欲从牛的瘤胃提取液中分离这些微生物。结合所学知识回答下列问题：

（1）从瘤胃提取液中分离能够分解利用尿素的微生物，应使用________的固体培养基，配制培养基需要的基本步骤依次为________、称量、溶化、________、倒平板。

（2）为了既能够接种，又能够初步计数，可采用________法进行菌液接种，接种过程中使用________作为接种工具。

（3）某同学为了统计样品中微生物的数目，他选用10^－4，10^－5、10^－6稀释液进行涂布，每种稀释液都设置了3个培养皿。然后选择________的平板进行计数，但是统计的菌落数往往比活菌的实际数目________，这是因为________。

[生物——选修1：生物技术实践]

请回答下列与微生物有关的问题。

（1）土壤中具有分解尿素的细菌，此类细菌能产生脲酶，该酶能将尿素分解成________。

（2）为从富含尿素的土壤中分离获得尿素分解茵的单菌落，某同学设计了甲、乙两种培养基（成分见下表）：

（注：“＋”表示有，“－”表示无）

培养基甲________（填“能”或“不能”）用于分离和鉴别尿素分解菌，原因是________；培养基乙________（填“能”或“不能”）用于分离和鉴别尿素分解菌，原因是________。

（3）如分别取0.1mL已稀释10²倍的水样分别涂布到四个琼脂固体培养基的表面进行培养，培养基记录到产生脲酶的细菌的菌落数分别为161、155、158、170，则每升原水样中该细菌数为________个。

（4）纯化细菌时使用的培养基一般用________法灭菌，________（填“可”或“不可”）用加入抗生素的方法防止杂菌感染。

（5）某小组采用平板划线法分离某样本的该细菌。在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是________。

（6）尿素分解菌在－20℃长期保存时，菌液中常需要加入一定量的________（填“石蜡”“蒸馏水”或“甘油”）。

[生物——选修1：生物技术实践]

已知尿素分解菌合成的脲酶能将尿素分解成氨。回答下列问题：

(1)从土壤中分离尿素分解菌时，首先要进行选择培养，该过程使用的培养基中要添加____________作为唯一氮源；制备上述培养基时，在倒平板之前要进行灭菌处理，常用的灭菌方法是____________；而对接种环等金属用具常用的灭菌方法则是____________。

(2)接种尿素分解菌后的培养基需要倒置培养，原因是____________。若采用稀释涂布平板法检测土壤样液中的尿素分解菌含量，在涂布接种前，应随机选取若干个灭菌后的空白平板先培养一段时间，这样做的目的是____________；然后，将1mL样液稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液，经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为56、58和60，据此可得出每升土壤样液中的活菌数为____________。

(3)鉴别培养基中是否存在尿素分解菌时，可在培养基中加入____________指示剂；如果有尿素分解菌存在，则培养基中该菌落的周围会出现红色。

[生物——生物技术实践]

幽门螺杆菌是栖息在胃粘膜的革兰氏阴性螺旋状杆菌，具有强的脲酶（能降解尿素）活性，其代谢类型属于异养厌氧型（氧气浓度在5％～8％左右适合，完全无氧或空气环境中无法生存），这种细菌是慢性胃炎、甚至胃癌发生的元凶。

（1）为了对胃炎患者的胃粘膜提取物稀释样液中幽门螺杆菌进行分离，应将样品稀释液接种于以________为唯一氮源的固体选择培养基上，接种后的培养皿在________条件下，倒置于37℃的恒温培养箱中培养。

（2）分离培养幽门螺杆菌时必须进行无菌操作，包括培养基和各种器皿都必须是无菌的，培养基常用的灭菌方法有________。

（3）欲检测上述培养基中是否具有幽门螺杆菌这类细菌的存在，向培养基中添加酚红指示剂，培养基中菌落周围显示红色环带，即表明这类细菌的存在，这种检测过程的机理是________。

（4）采用液体培养基培养幽门螺杆菌，为了测定菌液中的菌体数量，一般采用________法将一定量的菌液接种到固体培养基上，统计________的数量来代表菌体数，这种检测方法测得的结果一般偏________（填“大”或“小”），原因是________。

（1）从生态系统的成分上看，大肠杆菌属于           。

（2）若根据用途划分，该培养基属于             （填“选择”或“鉴别”）培养基。若要用上述培养基来筛选出土壤中的尿素分解菌，培养基的营养成分必需怎样更改？                     ，并用        作为指示剂。

（3）在微生物培养的过程中，为防止杂菌污染，需要对培养基和培养皿进行       ；操作者的双手需要进行清洗和           。

（4）图1和图2是培养某细菌的结果图，其对应的接种方法分别是：           和             ，这两种方法接种后培养基上都可以得到由单个细胞繁殖所形成的           。图1所用的接种方法可用来对活菌进行计数。此外，测定微生物数目的另一种方法是             。

回答下列问题：

(1)对土壤中分解尿素的微生物的分离过程如下：

第一步：土壤取样。取土样用的工具和盛土样的信封等在使用前都需要________(填“消毒”或“灭菌”)。

第二步：样品稀释。通常分离不同种类的微生物要采用不同的稀释度，原因是________。

第三步：微生物的培养与观察。将一定稀释度的样品接种在以尿素为唯一氮源的培养基上，并在适宜的条件下培养。分解尿素的微生物能在该培养基上生长繁殖，而________则不能生长繁殖。(注：实验中所用的培养基经检测符合要求，且均在无菌条件下操作)

(2)若对土壤悬液进行梯度稀释时，未经振荡而直接取上层悬液进行梯度稀释，用稀释倍数为10⁴的样液涂布到平板上进行培养和计数，统计出的菌落数往往比正确操作统计出的菌落数________。

(3)对土壤中分解尿素的微生物作进一步的鉴定

若要对上述初步筛选出的分解尿素的微生物作进一步的鉴定，需在上表培养基配方中添加的物质是________、________。若分离得到的是尿素分解菌，则培养基中pH升高使酚红指示剂变为红色，pH升高的原因是________。

(4)分解尿素的微生物在生态系统中的作用是________。

35 近年来，由于食品安全、环境污染等问题的加重，胃癌的发病率不断增加。常见的切除、化疗、放疗等治疗手段对病人的身体副作用较大，而“生物导弹”(借助单克隆抗体的导向作用，能将药物定向带到癌细胞所在位置)的定向治疗为胃癌患者带来了福音。下图是“生物导弹”——抗人体胃癌的单克隆抗体的制各过程。

回答下列问题：

(1)幽门螺旋杆菌的感染与胃癌的发生密切相关，幽门螺旋杆菌从细胞结构上与人体细胞相比，最显著的特点是________。

(2)从免疫学的角度分析，图中实验小鼠注射的甲是________，从小鼠的________(免疫器官)中可获得相应的B淋巴细胞。

(3)诱导细胞融合形成细胞乙的原理是________。若只考虑细胞的两两融合，理论上乙有________种类型，符合要求细胞的特点是________。

(4)丙需进行克隆化培养和专一抗体检测，经多次筛选后可获得数量较多的能分泌所需抗体的丁，细胞丁可在体外条件下大规模培养，也可以注射到小鼠________内进行体内培养，从而获得大量的单克隆抗体。该抗胃癌单克隆抗体与从动物血清中分离的抗体相比，最主要的优点是________。