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            • 1．
              在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。
              回答下列问题：
              （1）在实验室中，玻璃和金属材质的实验器具 ______ （填“可以”或“不可以”）放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。
              （2）牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点是 ______ 。
              （3）密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒，其原因是紫外线能 ______ 。在照射前，适量喷洒 ______ ，可强化消毒效果。
              （4）水厂供应的自来水通常是经过 ______ （填“氯气”“乙醇”或“高锰酸钾”）消毒的。
              （5）某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最可能的原因是 ______ 。
              难度：难
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            • 2． 多环芳烃菲在染料、杀虫剂等生产过程中被广泛使用，是土壤、河水中常见的污染物之一．如图表示科研人员从被石油污染的土壤中分离获得能降解多环芳烃菲的菌株Q的主要步骤．请回答：

              （1）步骤①～③的培养过程中，培养液中加入多环芳烃菲作为唯一碳源，目的是______．
              （2）步骤①～③的培养过程中，需将锥形瓶放在摇床上振荡，一方面使菌株与培养液充分接触，提高营养物质的利用率，另一方面能______．
              （3）步骤④用平板划线法纯化菌株Q过程中，在做第二次以及其后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开始划线，原因是______．
              采用固体平板培养细菌时要倒置培养的目的是______．
              （4）接种环通过灼烧来灭菌，完成步骤④中划线操作，共需灼烧接种环______次．
              （5）为了获得分解多环芳烃菲能力更强的菌株，研究人员又对菌种Q进行了诱变处理，得到突变株K，为了比较两种菌株降解多环芳烃菲的能力，设计了下列实验，请补全实验步骤：
              ①取9个锥形瓶均分成三组，编号为A、B、C．
              ②______．
              ③______．
              ④28℃恒温培养3天后，测定锥形瓶中多环芳烃菲的降解率．
              难度：难
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            • 3．
              据报道，某地空气样本中检测出A、B、C 3种抗生素的耐药性基因．只有存在于某种活菌中的耐药性基因才能感染人体．为研究此地空气中是否存在这些耐药性活菌，某研究小组做了以下实验，步骤如下．
              ①配置培养基并灭菌；
              ②制作无菌平板，并收集、培养空气中的活菌；
              ③对步骤②得到的活菌进行分离纯化；
              ④设置若干实验组和对照组，进行相关操作；
              ⑤将各组平板置于适宜温度的恒温箱中培养一段时间，观察菌落的生长情况．
              回答下列问题：
              （1）步骤①中的灭菌方法是 ______ ．
              （2）步骤③中接种的方法是 ______ ．
              （3）若步骤②中得到的菌落类型有5种，则步骤④中需要设计至少 ______ 个实验组，对实验组的操作是 ______ ．
              （4）若将所得菌落接种到含有 ______ 培养基中，形成的菌落呈 ______ 色，则表明可能存在大肠杆菌．从功能角度分析此培养基属于 ______ 培养基．
              难度：难
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            • 4．
              某些土壤细菌可将尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用．回答下列问题：
              （1）有些细菌能分解尿素，有些细菌则不能，原因是前者能产生 ______ ．能分解尿素的细菌不能以尿素的分解产物CO2作为碳源，原因是 ______ ．但可用葡萄糖作为碳源，进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是 ______ （打出两点即可）．
              （2）为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择 ______ （填“尿素”“NH4NO3”或“尿素+NH4NO3”）作为氮源，不选择其他两组的原因是 ______ ．
              （3）用来筛选分解尿素细菌的培养基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用有 ______ （答出两点即可）．
              难度：难
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            • 5．
              某实验小组对酸奶中乳酸菌的数量进行了测定，取6支灭菌的试管，分别加入9mL灭菌的生理盐水，标号为A1、A2、A3、A4、A5、A6，吸取1mL酸奶样液加入试管A1中并摇匀，然后另取一支吸管从A1中吸取1mL容液，加入A2中，依此类推，最后从试管A6中取0.1mL样液进行涂布计数，涂布三个平板，其菌落数分别为251、265、276个．请回答下列问题：
              （1）培养乳酸菌除了必要的营养物质外，还需在培养基中添加 ______ ．对培养皿灭菌的常用方法是 ______ ．
              （2）倒平板时培养基的温度不能太低，原因是 ______ ；待平板冷凝后，要将平板倒置，其目的是 ______ ．
              （3）该实验小组对乳酸菌接种所采用的方法是 ______ ．根据三个平板中菌落数，可推测原酸奶中乳酸菌的浓度为 ______ 个/mL．
              （4）为了使测量结果更加准确，该实验对照组的设置是 ______ ．
              难度：难
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            • 6．
              国家标准规定每毫升酸奶产品中乳酸菌菌数不得低于1×106．为了解某酸奶中的乳酸菌含量是否达到国家标准，某兴趣小组进行了如下实验，请回答下列问题：
              （1）制备培养基：培养基的碳源为 ______ （填“含碳无机物”或“含碳有机物”）．检测培养基灭菌是否合格的方法是 ______ ．
              （2）样品稀释：先将样品稀释10倍，可用无菌移液管吸取25mL酸奶样品加入盛有 ______ mL无菌水的三角瓶中，使样品与水充分混匀．然后进行系列稀释操作，得到稀释至106、107、108倍的样品．
              （3）培养与统计：吸取不同稀释度的样品各1mL，分别置于不同培养皿内，加入适宜温度的溶化状态的培养基，使之混合均匀，冷却成平板．每个稀释度做3个重复．在适宜条件下培养一段时间后，对平板的菌落数进行统计，结果如表：
              稀释度（倍） 106 107 108
              平板 1 2 3 1 2 3 1 2 3
              平板菌落数（个） 432 421 445 78 67 74 9 6 8
              为了保证结果准确，应选择上述稀释度为 ______ 倍的平板菌落数作为统计结果，计算出样品中每毫升乳酸菌数为 ______ ．
              （4）测定微生物的数量常采用稀释涂布平板法，其统计的数值往往比实际数目 ______ ，原因是 ______ ．
              难度：难
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            • 7．
              有人尝试制备始旋链霉菌（能生产普那霉素的一种原核放线菌）的原生质体，并利用其孢子和原生质体进行选育普那霉素高产菌株的实验．采用酶解法制备始旋链霉菌原生质体时，先要明确酶解时间与原生质体制备效果间的关联．探究步骤如下：
              第1步：取生长旺盛的始旋链霉菌菌丝，酶解后用一定量的缓冲液稀释后涂布在平板上，30℃培养7天后，统计菌落数．
              第2步：计算时间对原生质体制备和再生的影响，绘制成下图1所示曲线．
              请据图回答：

              （1）本实验所用的酶，不适用于制备 ______ 的原生质体．
              A．大肠杆菌细胞  B．番茄叶肉细胞 C．酵母菌
              （2）鉴定原生质体制备效果的常见方法是将部分原生质体放在 ______ （“等渗”、“高渗”或“低渗”）溶液中，观察其形态变化．而原生质体的计数统计常借助光学显微镜、盖玻片和 ______ 等光学仪器．
              （3）上述实验的第1步中，酶解后的稀释必须用缓冲液的原因是 ______ ，若未经稀释，直接涂布可能造成的结果是 ______ ．
              （4）根据上图1可见，随着酶解时间增加，原生质体的再生率变化趋势是 ______ ．结合酶解时间对原生质体制备率和再生率的影响，应当选择的最佳酶解时间约为 ______ min．
              （5）用紫外线分别处理始旋链霉菌孢子、原生质体后，统计各组菌株的普那霉素产量，结果如上图2．诱变后效果最好的是丙组，可能的原因是 ______ ．
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            • 8．
              为获得果胶酶高产菌株，科研人员进行了下列分离、筛选、鉴定工作．
              （1）为分离果胶酶产生菌，科研人员配制了下表所示成分的培养基，该表空白处的两种成分是 ______ ．制备的培养基常用 ______ 法进行灭菌．
              K2HPO4 MgSO4 NaNO3 FeSO4 琼脂
              0.1g 0.5g 3g 0.01g 2g 15g 加至1L
              （2）科研人员将采集的果园土壤放入无菌水中，震荡混匀，制成悬液．为获得较均匀分布的单菌落，还需要将悬液进行 ______ ，用 ______ 法接种于固体培养基上．接种后的培养基 ______ 状态放入培养箱．
              （3）选择单菌落数目适宜的培养基，加入一定浓度的刚果红溶液（果胶与刚果红结合后显红色），一段时间后洗去培养基表面的刚果红溶液，观察并比较菌落和 ______ 直径的比值，筛选果胶酶高产菌株．
              （4）将获得的菌株进行液体培养后，从培养液的 ______ （填“上清液”或“沉淀物”）获得粗提的果胶酶．将一定量的粗提果胶酶与适量果胶溶液混合，一定时间后测定吸光值来测定酶活性．进行吸光值测定时，需将 ______ 与等量果胶溶液混合，作为实验的对照．
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            • 9．
              回答下列有关生物技术实践的问题．
              （1）PCR的反应过程包括 ______ 三步．整个PCR反应过程中需要适宜的温度和酸碱度，前者由PCR仪自动控制，后者需靠 ______ 来维持．
              （2）培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了 ______ 和 ______ ．除此之外，培养基还必须含有基本成分是 ______ 和 ______ ．对培养基进行灭菌，应该采用的方法是 ______ ．
              （3）某同学尝试微生物接种的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图所示．该同学的接种方法是 ______ ；推测该同学接种时可能的操作失误是 ______ ．
              难度：难
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            • 10． 高温淀粉酶在大规模工业生产中有很大的实用性．研究者从热泉嗜热菌样品中筛选了高效产生高温淀粉酶的嗜热菌，其筛选过程如图所示：

              （1）进行①过程的目的是 ______ ，②过程所使用的接种方法是 ______ 法．
              （2）从用途上来说，Ⅰ号培养基属于 ______ 培养基，配制时仅以 ______ 作为唯一碳源；从物理状态上来说，Ⅱ号培养基属于固体培养基，配制时应加入 ______ 作为凝固剂．
              （3）Ⅰ、Ⅱ号培养基配制和灭菌时，灭菌与调节pH的先后顺序是 ______ ．一般对配制的培养基采用 ______ 法灭菌．
              （4）培养一段时间后，应从Ⅰ号培养基上挑出 ______ 的菌落，接种到Ⅱ号培养基上．
              难度：难
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