3.
紫杉醇具有独特的抗肿瘤作用。研究人员从红豆杉中发现了一种具有产紫杉醇能力的内生真菌。为探究制备红豆杉内生真菌原生质体的适宜pH和温度,进行了如下实验:
①培养菌株,离心收集菌丝体,并用渗透压稳定剂洗涤两次;
②将获得的菌丝体,分别置于不同pH或温度的培养液中,并加入适量酶液,震荡、摇匀后,每隔一段时间,取样、过滤、离心,用渗透压稳定剂洗涤两次后,收集纯化的原生质体。
③统计原生质体数量,结果如下。
分析回答:
(1)步骤②中,加酶液的目的是_______________________,洗涤时选用渗透压稳定剂的理由是______________________________________。
(2)结果表明,制备红豆杉内生真菌原生质体的适宜条件是__________、________、_______。
(3)检验原生质体再生能力,需要配制再生固体培养基,培养基灭菌常采用___________ 法,灭菌后需要冷却到_______℃左右才能用来倒平板。
(4)实验中将收集到的原生质体浓度为30×106个/mL培养液先稀释104倍,再各取0.1mL稀释液分别均匀涂布在3个再生固体培养基上培养。一段时间后,统计得到的菌落数分别为:27、21、24。则原生质体再生率(能再生的原生质体数占全体部原生质体的比例)约为________________。