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            • 1． 回答下列关于基因工程的问题．
              外源基因需要导入受体细胞才能实现其表达功能．下图示一种外源基因导入受体细胞的方法，请据图分析回答：

              （1）图所示的导入方法称为    ．在动物基因工程中，受体细胞通常采用    ．
              基因工程操作步骤中，需要从受体细胞群中筛选出已获得目的基因的细胞，下图①-③示一种筛选方法的过程．
              pBR322质粒含有两个抗性基因，分别是Amp（氨苄青霉素）抗性基因和Tet（四环素）抗性基因，其中在Tet抗性基因上有下列目的基因的插入位点（插入将导致Tet抗性基因功能性失活），请据图分析回答：

              （2）图中①过程所需的酶是    ．
              （3）经过①过程，pBR322质粒可能出现的两种结果A是    、    ．
              （4）②过程表示用含四环素（使细胞停止生长，但不致死）和环丝氨酸（使生长的细胞致死）的培养基中培养细菌甲，则培养结果C表示在培养基中可能存活的细菌包括    ．
              （5）若要进一步筛选出符合要求的受体细胞D，则③过程需要做的处理是（请参照过程②的方法）    ．
              基因工程中使用的Ⅱ型限制性核酸内切酶通常可以识别长度为4-8个核苷酸的特异序列．下列图示限制酶Sau3AⅠ对DNA片段切割的结果．

              （6）请据图分析，Sau3AⅠ的识别序列以及切割位点（用“↓”表示）是    ．
              下表列出了几种限制酶的识别序列及其切割位点，图1（含两个抗性基因的质粒）和图2（含目的基因的外源DNA）中箭头表示相关限制酶的酶切位点，请据图分析回答：
              限制酶XhoⅠBclⅠSalⅠBamHⅠXbaⅠ
              识别序列及酶切位点C↓TCGAGT↓GATCAG↓TCGACG↓GATCCT↓CTAGA

              （7）为了使目的基因和质粒实现定向连接和便于受体细胞的筛选，切割质粒的限制酶应选用    ，切割含目的基因的外源DNA的酶应选用    ．
              难度：较难
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            • 2． 质粒能成功转入植物细胞，并将质粒上的一部分外源DNA整合到植物的DNA中．如图表示利用质粒进行转化获得抗除草剂大豆的过程．请据图分析回答：

              （1）过程②将目的基因导入质粒后，需要借助    酶使质粒与目的基因的切口黏合．
              （2）过程③    （有/没有）进行碱基互补配对．
              （3）目的基因在大豆细胞中的表达包括    和    两个过程．
              （4）过程④得到试管苗的关键步骤是利用含有一定营养和植物激素的培养基诱导植物细胞进行    和    ．
              （5）为了检测通过④过程获得的幼苗是否具有抗除草剂的特性，可采用的方法是    ．
              难度：较难
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            • 3． （2016•金山区一模）苏云金杆菌（Bt）能产生具有杀虫能力的毒素蛋白．下图（一）是转Bt毒素蛋白基因植物的重组DNA形成过程示意图；下图（二）是毒素蛋白基因进入植物细胞后发生的二种生物大分子合成的过程，据图回答下列问题．
              （1）将图（一）①的DNA用HindⅢ、BamHⅠ完全酶切后，反应管中有    种DNA片段．过程②需要用到    酶．
              （2）假设图（一）中质粒原来BamHⅠ识别位点的碱基序列变为了另一种限制酶BclⅠ的碱基序列，现用BclⅠ和HindⅢ切割质粒，则该图（一）中①的DNA右侧还能选择BamHⅠ进行切割，并能获得所需重组质粒吗？    ，请说明理由    ．
              （3）若上述假设成立，并成功形成重组质粒，则重组质粒    
              A．既能被BamHⅠ也能被HindⅢ切开       B．能被BamHⅠ但不能被HindⅢ切开
              C．既不能被BamHⅠ也不能被HindⅢ切开   D．能被HindⅢ但不能被BamHⅠ切开
              （4）图（二）中α链是    ．不同组织细胞的相同DNA进行过程③时启用的起始点    （在“都相同”、“都不同”、“不完全相同”中选择），其原因是    ．
              难度：较难
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            • 4． 如图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线．图中tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉素抗性基因，BamHI、HindIII、Sma I直线所示为三种限制酶的酶切位点．据图回答：

              （1）图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用    限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因．筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含    的培养基上进行．能驱动人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控因子是图中的    ．过程①采用的操作方法通常是    ．
              （2）过程②代表的生物技术是    ．对早期胚胎进行切割，经过程②可获得多个新个体．目前最常见的是经分割产生的同卵    胎．
              （3）为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用    技术．
              （4）对代孕牛的要求是    ．
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            • 5． 科研人员采用转基因体细胞克隆技术获得转基因绵羊，以便通过乳腺生物反应器生产人凝血因子IX医用蛋白，其技术路线如图．

              （1）A为含目的基因的（基因）表达载体，其化学本质是    ．
              （2）过程①中用到的工具酶有    将A导入绵羊胎儿成纤维细胞中常用的方法是    ．
              （3）核移植的受体应选用    期卵母细胞．在核移植之前，必须先去掉受体卵母细胞的核，目的是    ．重组细胞能发育成绵羊，是因为细胞核中具有    ．
              （4）移植应选择胚胎发育到    阶段时进行；代孕母羊对移入子宫的重组胚胎基本上不发生    ，这为重组胚胎在代孕母羊体内的存活提供了可能．
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            • 6． 普通番茄细胞中含有多聚半乳糖醛酸酶基因，控制细胞产生多聚半乳糖醛酸酶，该酶能破坏细胞壁，使番茄软化，不耐贮藏．科学家将抗多聚半乳糖醛酸酶基因导入番茄细胞，培育出了抗软化、保鲜时间长的转基因番茄．如图为操作流程图，据图回答问题．

              （1）实验中的目的基因是    ．
              （2）构建基因表达载体时必需的工具酶有    ．
              （3）图中步骤①→②使用的生物技术是    ．这种技术可保留番茄植株抗软化、保鲜时间长的优良性状，其原因是    ．
              （4）根据图中，转基因番茄细胞中的信息传递过程，分析转基因番茄抗软化的原因．    
              （5）若将得到的二倍体转基因番茄植株自交，F1中抗软化与不抗软化的植株数量比为3：1，则可推测目的基因整合到了    ．
              A．一对同源染色体的一条上         B．一对同源染色体的两条上
              C．两条非同源染色体上             D．一对同源染色体的非姐妹染色体上．
              难度：较难
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            • 7． GDNF是一种神经营养因子．对损伤的神经细胞具有营养和保护作用．研究人员构建了含GDNF基因的表达载体（如图1所示），并导入到大鼠神经干细胞中，用于干细胞基因治疗的研究．请回答：

              （1）完成图中A过程必需的工具是    ；该基因治疗的受体细胞为    ．
              （2）若要构建含GDNF基因的表达载体，则需选择图21中的    限制酶进行酶切．
              （3）限制酶XhoI和限制酶HpaI的识别序列及切割位点分别是-C↓AATTG-和-G↓AATTC-．如图2表示四种质粒，其中，箭头所指部位为酶的识别位点，质粒的阴影部分表示标记基因．适于作为图示GDNF基因运载体的是    ．

              （4）下列有关限制性核酸内切酶和质粒运载体的描述，错误的是    （多选）．
              A．限制性核酸内切酶能识别DNA、切割DNA任一序列
              B．限制性核酸内切酶的作用部位与RNA聚合酶的相同
              C．使用质粒运载体是为了避免目的基因被分解
              D．质粒运载体可能是从细菌或者病毒的DNA改造的
              （5）经酶切后的载体和GDNF基因进行连接，连接产物经筛选得到的载体主要有三种：单个载体自连、GDNF基因与载体正向连接、GDNF基因与载体反向连接（如图1所示）．为鉴定这3种连接方式，选择HpaI酶和BamHI酶对筛选的载体进行双酶切，若是正向连接的重组载体，其产生的酶切片段数为    个，反向连接的重组载体产生片段有    （多选）．
              1100bp  ②200bp  ③600bp   ④700bp  ⑤6000bp  ⑥6500bp．
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            • 8． 2009年10月，我国自主研发的转基因抗虫水稻“华恢1号”获得农业部颁发的安全证书．图1表示该抗虫水稻主要培育流程，据图回答：

              （1）④过程应用的主要生物技术是    ；该技术的过程主要包括    和    两个阶段，利用的基本原理是    ．
              （2）杀虫基因（crylA）是人们根据几种Bt毒蛋白的分子结构，设计并人工合成的，这属于    工程技术范畴．
              （3）组建理想的载体需要对天然的质粒进行改造．图2是天然土壤农杆菌Ti质粒结构示意图（示部分基因及部分限制性内切酶作用位点），据图2分析：
              ①人工改造时，要使抗虫基因表达，还应插入    ．
              ②人工改造时用限制酶Ⅱ处理，其目的是：第一，去除质粒上的    （基因），保证T-DNA进入水稻细胞后不会引起细胞的无限分裂和生长；第二，使质粒带有单一限制酶作用位点，有利于    ．第三，使质粒大小合适，可以提高转化效率等．
              ③若用限制酶Ⅰ分别切割改造过的理想质粒和带有抗虫基因的DNA分子，并构成重组Ti质粒．分别以含四环素和卡那霉素的培养基培养已成功导入抗虫基因的水稻胚细胞，观察到的细胞生长的现象是    ．
              （4）若限制酶Ⅱ切割DNA分子后形成的粘性末端为，则该酶识别的核苷酸序列是    ．
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            • 9． 如图是利用生物学技术制备单克隆抗体的两条途径模式简图．请据图回答相关问题．

              （1）经过程①依据的原理是    、    ，通常用    诱导融合；过程②至少需要    次筛选才能得到X细胞．
              （2）过程④所用的酶为    ．过程⑥常用    处理大肠杆菌．
              （3）结构甲为    ，结构甲组成的基本原件必须包括启动子、终止子、复制原点、    及    等．
              （4）利用上述技术也可以生产干扰素（糖蛋白），但是用大肠杆菌只能生产无糖干扰素，原因是    ．
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            • 10． 回答利用农杆菌转化法培育转基因植物的相关问题：

              （1）培育转基因植物过程的核心步骤是构建基因表达载体，其目的是使目的基因在受体细胞中    ，并且可以通过复制遗传给下一代，同时，使目的基因表达和发挥作用．
              （2）构建基因表达载体时，可利用DNA连接酶连接被限制酶切开的    键．
              （3）组成基因表达载体的单体是    ．基因表达载体中的启动子是    识别和结合的部位，这种结合完成后才能驱动目的基因通过    （填过程）合成mRNA．
              （4）用两种限制酶XbaI和SacI（两种酶切出的黏性末端不同）切割某DNA，获得含目的基因的片段．若利用该片段构建基因表达载体，应选用下图中的何种Ti质粒？    
              （5）将受体细胞培养成植株需要应用    技术，该技术的理论依据是    ．
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