铁皮石斛是一种名贵中药材，有生津养胃、降血糖和增强免疫力等作用，有效成分为石斛多糖、石斛碱等，温州雁荡山素有“中国铁皮石斛之乡”的美誉。请回答下列问题：

（1）用茎快速繁殖铁皮石斛时，给茎消毒时无须使用的是__________ （填“乙醇”，“无菌水”，“甘露醇”或“次氯酸钠”）。在细胞分裂素相对较多和生长素相对较少的培养基中培养茎的切段，待长出较多的_____________ ，将其进行______________ （处理）后再转入__________培养基中继续培养，直至长成幼苗，之后再后将苗移至草炭土或蛭石中进行___________，再转移至土中定植。

（2）研究发现，铁皮石斛的生长发育与其体内的内生菌密切相关。为进一步研究内生菌的作用，需要大量的内生菌进行相关实验。分离内生菌时采用的最简便的方法是________ 。

A．G6玻璃砂漏斗过滤法              B．血细胞计数法

C．划线分离法                       D．涂布分离法

    再将纯化的内生菌转移到液体培养基中进行_____________ 。

（3）研究发现，质量浓度为200mg /L的卡那霉素能有效抑制铁皮石斛细胞的增殖与分化。科学家欲利用卡那霉素，采用农杆菌转化法对现有铁皮石斛品种进行基因改良。在基因工程操作中，对于要导入受体细胞的_____________ 应同时带有目的基因和_____________ 基因，这样才能利用含有卡那霉素的培养基将成功导入目的基因的受体细胞筛选出来。

（4）鉴定铁皮石斛的品质，可通过苯酚—浓硫酸法测定石斛多糖的含量。其原理是石斛多糖水解成单糖并脱水生成糖醛衍生物后，与苯酚缩合产生橙黄色化合物，在490nm处测定光密度值，以不同浓度的葡萄糖溶液为标准溶液建立标准曲线，便可知道样品中石斛多糖的含量。

（5）为高效提取石斛多糖，可在提取液中加入_____________ ，以提高铁皮石斛的出汁率。

科学工作者将抗虫毒蛋白基因通过载体转入棉花细胞，获得了很好的抵抗棉铃虫的作用。在研制抗虫棉的过程中，利用标记基因，可以快速检查基因表达载体是否导入棉花细胞，然而，即使基因表达载体已经导入棉花细胞，也不能确定转基因过程已经取得成功。因此，在该项工程的最后阶段，需要做如下一系列检测：

（1）用放射性同位素标记的________________________________作探针，可以分别检测棉花细胞中是否有_____________________________________。

（2）向棉花细胞的匀浆中加入特定的________，可以检测棉花细胞中是否能够产生抗虫毒蛋白。

（3）除了上述分子水平的检测外，还需要做个体水平检测。其方法是____________________________________________________________。

（4）我国西北的一些地区年降雨量很小，只适宜种植少数的草本植物，但却被硬性规定种植转基因的抗虫棉，结果造成减产。这个案例主要违背了生态工程的________________原理。

（5）一般来说，生态工程的主要任务是对_________________________________进行修复，对造成环境污染和破坏的生产方式进行改善，并提高生态系统的生产力。

下图为吉林大学农学部奶牛繁育基地成功培育出的一头携带转入赖氨酸基因的克隆牛“织女”的大致过程，请据图回答问题:

北极比目鱼中有抗冻基因，下图是获取转基因抗冻番茄植株的过程示意图，请回答：

（1）利用过程①的方法构建的基因文库是________，除了从基因文库中获取目的基因以外，常用的获取目的基因的方法还有________和________。

（2）过程②中常需要使用限制酶和DNA连接酶，既能连接黏性末端又能连接平末端的DNA连接酶是_________________________。

（3）为使过程①获取的目的基因在番茄细胞中能够表达，在构建表达载体时，需要将目的基因插入_____________，并且需在目的基因的首端和尾端分别加入___________、__________。

（4）此题中将目的基因导入受体细胞的方法是_____________。

（5）要检测番茄的DNA上是否插入抗冻基因，应以_______________为探针，与番茄基因组DNA杂交；要确认抗冻基因是否在转基因番茄植株中正确表达，应通过_____________法检测转基因番茄植株中该基因的表达产物是否呈阳性。

兔肝细胞中的基因E编码代谢甲醛的酶，拟利用基因工程技术将基因E转入矮牵牛中，以提高矮牵牛对甲醛的代谢能力，请回答：

（1）从兔肝细胞中提取mRNA，在_________________酶的作用下形成互补DNA，然后以此DNA为模板扩增得到基因E。在相关酶的作用下，将基因E与Ti质粒连接在一起，形成_____________，再导入用氯化钙处理的_________，侵染矮牵牛叶片。将被侵染的叶片除菌后进行培养，最终得到转基因矮牵牛。其中培养过程正确的是______（A.叶片在含适宜浓度生长素的培养基上分化形成愈伤组织 B.愈伤组织在含细胞分裂素和生长素配比较高的培养基上形成芽  C.再生的芽在细胞分裂素含量较高的培养基上生根    D.愈伤组织在含适宜浓度植物生长调节剂的培养基上脱分化形成再生植株）。

（2）取转基因矮牵牛叶片，放入含MS液体培养基和适宜浓度甲醛且密封的试管中。将试管置于___________上，进行液体悬浮培养液。一段时间后测定培养基中甲醛的含量，以判断基因E是否在转基因矮牵牛中正常表达。培养过程中液体培养基的作用：一是提供营养；二是___________________________，从而使叶片保持正常的形态。

根据基因工程的有关知识，回答下列问题：

（1）cDNA文库属于     基因文库,其构建方法是：用某种生物发育的某个时期的       通过反转录产生cDNA片段,与        连接后储存在一个受体菌群中.

（2）切割DNA分子的工具是           ，它能使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的            断开，形成黏性末端或平末端。

（3）基因工程中所使用的DNA连接酶有两类。既可以“缝合”黏性末端，又可以“缝合”平末端的是       DNA连接酶。

（4）将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是           ；如果受体细胞是大肠杆菌,需要用          处理细胞,使之成为感受态细胞,才能吸收DNA分子.