Ⅰ.下图为三种质粒和一个含目的基因的片段的示意图。复制原点是质粒能正常复制的必需组成。图中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因。EcoRⅠ、PvuⅠ为相应的限制酶切割位点，括号内的数据是该切点与复制原点  的距离，单位为kb（1kb = 1000个碱基对长度）。请回答下列问题：

（2）该基因来自__________________（填“基因组文库”或“cDNA文库”）。

（3）翻译时与密码子发生碱基互补配对的是__________上的反密码子。

I.如表所示配方的培养基可筛选某种细菌，该细菌可以在该培养基上生长，进而形成菌落．回答下列问题：

（3）如果需要对该细菌进行计数，则应用______法接种．为了确定该细菌确实属于所要分离的细菌，需要在培养基中加入______指示剂。另一种接种细菌的常用方法是____________。该方法在操作时，每一次划线前都要进行灼烧，目的是________________________。

（1）转基因技术的核心步骤是______。为获得较多的目的基因可采用______技术进行扩增，该技术的原理是_______________。

（2）将植物体细胞用纤维素酶和果胶酶处理得到______，再将目的基因导入其中，最后通过______ 技术培养可得到相应的转基因幼苗。

（3）对大多数高等植物而言，与传统的细胞核转基因相比，叶绿体转基因更稳定，其遗传方式______  （填“遵循”或“不遵循”）孟德尔遗传定律，不会随______（填“花粉”或“卵细胞”）传给后代，从而保持了母本的遗传特性。

（4）来自原核生物中有重要价值的外源基因，无需改造和修饰就可在叶绿体中高效表达，原因是 _________________。

材料甲：我国目前临床使用的乙肝疫苗大多为基因工程疫苗，其有效成分是一种叫做乙肝表面抗原的蛋白质（S蛋白，对应的基因为S基因）。
材料乙：T₄溶菌酶在温度较高时易失去活性，科学家对编码T₄溶菌酶的基因进行改造，使其表达的T₄溶菌酶的第3位的异亮氨酸变为半胱氨酸，在该半胱氨酸与第97为的半胱氨酸之间形成了一个二硫键，提高了T₄溶菌酶的耐热性。

材料丙：兔甲和兔乙是同一物种的两个雌性个体，科学家将兔甲受精卵发育成的胚胎移植到兔乙的体内，成功产出兔甲的后代，证实了同一物种的胚胎可在不同个体的体内发育。

材料丁：研究性学习小组参观某市市郊建立的以沼气为中心，以保护生态环境为目标的“猪-沼-鱼-肥-果蔬”生态模式时绘出了如下模式图，请分析回答：

回答下列问题：

（1）材料甲属于基因工程的范畴。其中用___________处理S基因和运载体，并用DNA连接酶使之结合，这里的DNA片段两两结合的产物有___________种。
（2）材料乙属于_______________工程范畴。该工程是指以分子生物学相关理论为基础，通过基因修饰或基因合成，对___________进行改造，或制造一种新的蛋白质的技术。在该实例中，引起T₄溶菌酶空间结构改变的原因是组成该酶肽链的_____________序列发生了改变。
（3）材料丙属于胚胎工程的范畴。胚胎移植是指将获得的早期胚胎移植到同种的、_________相同的另一个雌性动物体内，使之继续发育成新个体的技术。胚胎移植之前，要对胚胎进行分割，应选择_____________期的进行分割。

（4）材料丁中，该生态系统最大的优点是_______________。该生态系统把很多单个生产系统通过优化组合有机地整合在一起，这体现了_____________原理。该生态系统的“基石”是______。沼气池中有产甲烷菌和不产甲烷菌等微生物，其生态学作用主要是_________________。

埃博拉病毒（EBOV）是一种能引起人类和灵长类动物发生埃博拉出血热（EBHF）的烈性病毒，利用相应的生物学技术制备出抗EBOV的单克隆抗体，可快速检测EBOV。请回答下列问题：

（1）方法一：给小鼠注射纯化的EBOV蛋白，一段时间后，从小鼠的________中获取浆细胞，将获得的浆细胞与小鼠的________细胞融合，再经过至少________次筛选、检测，最终可获得所需的杂交瘤细胞。

（2）方法二：科学家从细胞中分离出无限增殖基因（prG），可将prG基因导入能产生抗EBOV抗体的小鼠浆细胞中，导入prG基因的浆细胞具有________的特点。

（3）以上两种方法获得的杂交瘤细胞或带有prG基因的浆细胞，可在________的环境、营养、适宜的________和一定的气体环境等条件下进行体外培养，以便源源不断的产生抗EBOV的单克隆抗体。

（4）方法二中，若用PCR扩增方法获取目的基因，则需要用到________酶，该方法能够成功获取目的基因的前提是________，以便合成引物。

观察分析下图，该图示过程是(　　)

[生物—选修3：现代生物科技专题]

   基因工程技术已成为生物科学的核心技术，限制酶被誉为基因工程中的“分子手术刀”。下图中的SmaⅠ、EcoRⅠ、BamHⅠ、HindⅢ都是限制酶，图中的箭头表示几种限制酶的酶切位点。回答下列问题：

（1）基因工程的核心是构建________。用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒时，不能使用SmaⅠ切割，原因是________。重组质粒中抗生素抗性基因可作为标记基因，原因是________。

（2）将目的基因导入植物细胞时，采用最多的方法是________。目的基因进入受体细胞后的表达过程中，启动子需与________识别和结合，从而驱动转录过程。最终目的基因是否成功翻译成蛋白质，常用________的方法进行检测，若出现杂交带，表明目的基因已形成蛋白质产品。

[生物——选修3：现代生物科技专题]

在进行DNA亲子鉴定时，需大量的DNA，PCR技术（图示）可以使样品DNA扩增，在很短的时间内将DNA扩增几百万倍甚至几十亿倍，使实验室所需的遗传物质不再受限于活的生物体。基因工程也常用该技术扩增目的基因。

（1）进行DNA亲子鉴定时，首先需要用________将待测的样品DNA切成片段，然后用电泳的方法将这些片段分开，最后形成DNA指纹帮助确认身份。

（2）PCR技术的原理是________，甲过程所需要的条件是________，完成乙、丙过程需要反应体系提供________、________、________等物质。

（3）利用PCR技术扩增目的基因，要有一段________，以便合成a、b。若下图为第一轮循环产生的产物。请在下图e、f链上绘出以c链和d链为模板经PCR扩增的产物。

若继续循环，该DNA片段共经过________次循环后刚好能形成所需目的基因。该基因用于基因工程不能直接导入受体细胞，而是需要构建________，目的是________。

.线粒体是与细胞凋亡密切相关的细胞器．为研究蛋白B对家蚕细胞凋亡的影响，科研人员做了如下实验．
（1）细胞色素 c是线粒体内膜上的重要电子传递体，参与有氧呼吸第______阶段的生化反应．细胞受到凋亡信号的作用后，线粒体膜上的非特异性通道打开，引起线粒体膜的______性发生改变，线粒体膜两侧______的分布发生变化，导致线粒体膜电位下降或消失，使得细胞色素 c 释放出来，引发细胞凋亡．
（2）用生物碱H处理悬浮培养的家蚕细胞，处理不同时间后，用凝胶电泳方法测定细胞溶胶（细胞质基质）中细胞色素 c的含量，结果如图所示．


①由于细胞中微管蛋白的表达量______，在实验中可作为标准物质，以校准和消除由于细胞培养操作、细胞取样量和细胞色素 c的______等无关变量对实验结果的影响．
②据图分析，正常细胞的细胞溶胶中______检测到细胞色素 c，由______判断，随着生物碱H 处理时间延长，细胞色素 c逐渐释放到细胞溶胶中．
（3）为研究蛋白B的功能，科研人员构建蛋白B基因过量表达载体和蛋白B基因表达干扰载体，导人悬浮培养的家蚕细胞中，用______处理转基因家蚕细胞，检测到过量表达蛋白B的细胞溶胶中细胞色素 c的释放量减少，抑制蛋白B基因表达的细胞溶胶中细胞色素 c的释放量显著增加，推测蛋白B ______．