图示方案为人们获得生物新品种的过程，请回答下列问题：

方案Ⅰ：抗冻蛋白基因烟草细胞―→抗冻烟草

方案Ⅱ：A基因免疫过的B细胞―→体外培养―→单克隆抗体

方案Ⅲ：人的生长激素基因牛的受精卵―→早期胚胎受体母牛―→转基因牛

(1)基因工程的核心步骤是________________。农杆菌转化法中，根据农杆菌的特点，如果将抗冻蛋白基因插入________上，通过农杆菌的转化作用，就可以使目的基因进入植物细胞，并将其插入植物细胞中________上。

(2)推测方案Ⅱ中A基因所起的作用是________，请写出该方案获得的细胞中遗传信息传递时所遵循的法则____________________________。

(3)方案Ⅲ中的转基因牛可以通过分泌乳汁来生产人的生长激素。这需要将人的生长激素基因与________的启动子等调控组件重组在一起。该方案中的早期胚胎在移植入受体母牛子宫之前，必须进行性别鉴定，一般是取处于________时期的________细胞进行检测。

回答下列（一）、（二）小题。

(一）某研究小组欲用苹果汁为原料，利用发酵瓶制作果酒和果醋，请分析回答：

(1)将苹果汁放入发酵瓶，要预留约________的空间。为得到酒精和糖含量较高的果酒，可在果汁中加入一定比例的______。若发酵瓶内持续无气泡产生，则需加入更多的_______，使发酵作用尽快发生。

(2)变酸的果酒表面有一层醋杆菌形成的菌膜，若要在该菌膜中筛选高表达量的醋杆菌菌株，可通过获得_______的方法来分离筛选。若要统计获得菌种的数目，则常采用_________法。对获得的优质醋杆菌菌种常用划线法接种在固体培养基______上低温保存。

(3)下图是果酒和果醋的发酵装置，关于果醋发酵叙述错误的是_______

A.发酵前，瓶内酒—冰混合物的pH需调至7.0

B.发酵过程中，充气口要适时适量充气

C.发酵过程中，排气口排出醋酸发酵产生的CO₂

D.发酵完成后，出料口的pH值不再减少

 (二）请回答杂交瘤技术和单克隆抗体制备的有关问题。

(1)杂交瘤技术制备单克隆抗体时，利用一定的物质，如生物诱  导剂_____作介导，使经免疫的小鼠脾细胞与________细胞融合，筛选出融合的细胞再进行细胞的______培养，获得纯系细胞，同时还要进行________检验，以保证获得的是所需的特定杂交瘤细胞。

(2)有关杂交瘤细胞体外培养的叙述，正确的是________

A.用固体培养基培养          B.用滋养层细胞支持生长

C.能进行传代培养            D.需要对细胞进行研磨破碎获得产物

(3)现在欲利用基因工程技术生产单克隆抗体，科研小组将与抗体形成有关的关键基因通过噬菌体导人到受体细胞，该技术的核心步骤是______________,噬菌体是这些关键基因的___________。

[选修3——现代生物科技专题]

随着科技发展，带来的环境污染，人类各种疾病也相应产生：

（1）HER2是一种跨膜糖蛋白，某些细胞表面的HER2约是正常细胞的10~100倍，导致细胞无限增殖，抑制细胞凋亡，细胞运动能力增强而容易扩散和转移。研究人员利用DNA重组技术，将编码人和鼠的抗体DNA片段使用______酶进行切割、使用________酶拼接后导入中国仓鼠卵巢细胞，生产具有生物活性的单克隆单抗进行癌症治疗。

（2）传统的化学治疗针对DNA合成和有丝分裂过程，杀灭增殖活跃的细胞，而靶向治疗针对导致肿瘤发生发展的基因与基因产物，阻断其功能。后者的主要优点是________。

（3）研究人员通过基因治疗是把正常基因导入病人的体内，使该基因的表达产物发挥功能，从而达到治疗疾病的目的，这是治疗遗传病的最有效手段。用于基因治疗的基因有三类，他们分别是 ：正常基因 、________________和_____________________  

（4）基因芯片是通过微加工技术，将数以万计、乃至百万计的___________________，有规律的排列固定在2cm²的硅片，玻片等支持物上，构成一个二维DNA探针阵列，与计算机的电子芯片十分相似所以被称为基因芯片

（5）改善环境就要实施生态工程建设，生态工程建设的目的就是遵循自然界物质循环的规律，充分发挥资源的生产潜力，防止环境污染，达到___________和_____________的同步发展；建设人工湿地有“1+1＞2”的效果，“1+1＞2”所体现的是________________原理；建立桑基鱼塘的目的是实现对能量的多级利用，提高能量的利用率，建立人工生态系统遵循的生态工程原理有_______________

BAK基因是近年来发现的一种促凋亡基因，癌细胞内的BAK基因表达异常。将体外扩增的BAK基因导入癌细胞，有望成为癌症治疗的新途径。请分析回答：

(1)正常细胞生命历程包括________等过程，细胞凋亡是由________所决定的细胞自动结束生命的过程。

(2)癌变是在致癌因子的作用下，细胞内的________发生了突变而导致的。在癌变细胞内，BAK基因的表达水平明显________。

(3)实验小组为验证导入BAK基因在胃癌细胞中大量表达对胃癌细胞产生的影响，进行如下操作，并得到如图的结果，请补充完整实验步骤。

①用胰蛋白酶处理胃癌组织使之分散成单个细胞；

②将分散的单个细胞，等量分为甲、乙、丙三组，甲组细胞________，向乙组细胞中导入不携带BAK基因的载体，向丙组细胞导入________；

③在相同且适宜的条件下培养5d，统计各组活细胞数，并从分子水平上比较BAK蛋白的含量。

实验结果：丙组细胞数明显少于甲组和乙组，原因是________。

菊天牛是菊花的主要害虫之一。科研人员将抗虫基因转入菊花，培育出抗虫菊花。下图是获得转基因菊花的技术流程。请据图回答：

（注：卡那霉素抗性基因（kan^R）作为标记基因，菊花叶片对卡那霉素高度敏感）

（1）质粒是基因工程中最常用的载体，其化学本质是_        __，此外还可用                 作为载体。

（2）下图限制酶M和N切割产生的黏性末端是__ ____ ____ __，连接它们所需要的基本工具是__              ________。

（3）为了促进土壤农杆菌吸收重组质粒，可用__  _____处理，使其处于感受态。

（4）将愈伤组织转移到添加一定浓度植物激素、营养物质以及___________和  ________ 的固体培养基中，在适宜条件下进行培养，筛选转基因菊花。

（5）用PCR方法检测转基因菊花是否含有目的基因时，需根据抗虫基因（目的基因）两端的部分碱基序列设计特异引物，若其中一种引物共用了31个，则目的基因最多扩增了__  __次。

（6）将转基因菊花嫩茎及叶片与人工饲料以适当比例混合后饲喂菊天牛2龄幼虫，实验结果如下表所示。

请据表回答：

①对照组应饲喂等量的__                ________                __。

②据表分析，__               ____            __差异显著，说明转基因菊花对菊天牛2龄幼虫有较强的毒杀作用。

下面是一项“利用转基因番茄生产人胰岛素的方法”的专利摘要，请回答：

本发明利用转基因番茄作为生物反应器生产人胰岛素。所用的人胰岛素基因是依据植物偏爱密码子的原则来设计所含的密码子，通过人工合成若干DNA片段，拼接而成，并且在C端加上KDEL的内质网滞留序列，避免胰岛素在植物细胞中的降解。将该基因置于CaMV 35S启动子和果实专一性启动子2A12的驱动之下通过农杆菌介导的方法转入番茄中，在番茄的果实中表达人胰岛素。

  （1）此基因工程中的目的基因是________________________，将人工合成的DNA片段拼接在一起，所需要的酶有________________________________。

  （2）要想在体外获得大量该目的基因的片段，可以采用_________技术。

  （3）试分析在C端加上KDEL的内质网滞留序列，为什么可以避免胰岛素在植物细胞中的降解？_____________________________________________________。

  （4）用目的基因与农杆菌的Ti质粒结合构建表达载体，该表达载体的组成中不应含有的是_________（从下列选项中选择）。

①目的基因  ②CaMV 35S启动子 ③果实专一性启动子2A12  ④RNA引物 

⑤标记基因  ⑥T-DNA           ⑦RNA聚合酶基因片段     ⑧终止子

下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图一、图二中箭头表示相关限制酶的酶切位点。

A．DNA自我复制           B．DNA以其一条链为模板合成RNA

C．RNA自我复制           D．按照RNA上密码子的排列顺序合成蛋白质

（2）限制酶Sma和限制酶Xma作用的不同点是_________________________________。

（3）图二中的目的基因D需要同时使用Mse酶和Pst酶才能获取，而图一所示的质粒无相应的限制酶切位点。所以在用该质粒和目的基因构建重组质粒时，需要对质粒改造，构建新的限制酶切位点。试写出构建需要的限制酶切位点的过程（提供构建需要的所有条件）：

①首先用_______________酶处理质粒；

②然后用_______________酶处理质粒，使被切开的质粒末端连接上相应的脱氧核苷酸；

③再运用T₄DNA连接酶处理质粒，形成新的限制酶切位点，即可被_________酶识别。

（4）基因工程中的检测筛选是一个重要的步骤。下图表示运用影印培养法（使在一系列培养皿的相同位置上能出现相同菌落的一种接种培养方法）检测基因表达载体是否导入大肠杆菌。培养基除了含有细菌生长繁殖必需的成分外，培养基A和培养基B分别还含有________________________。从检测筛选的结果分析，含目的基因的是________（填编号）菌落中的细菌。

质粒是基因工程中最常用的运载体，质粒上有标记基因，如图所示，通过标记基因可推知外源基因插入的位置，插入位置不同，细菌在培养基上的生长情况也不同。下图表示外源基因的插入位置（插入点有a、b、c）。

Ⅰ.（1）质粒的基本组成单位是___________，在基因工程中作为_________。

（2）将细菌放在含有四环素、氨苄青霉素中培养，属于基因工程操作中的_________步骤。

（3）在插入外源基因过程中用到的工具酶有__________。

Ⅱ.设计实验探究外源基因插入的位置。

（1）步骤：

①将导入外源基因的细菌进行培养产生大量细菌。

②分组：将细菌平均分成两组并标号为1，2。

③培养：将第1组细菌放入含氨苄青霉素的培养基上培养，________________________。

④观察并记录结果。

（2）预测实验结果及结论：

若__________________________，则外源基因插入点是a；

若__________________________，则外源基因插入点是c；

若__________________________，则外源基因插入点是b