[生物——选修3：现代生物科技专题]

   白菜、甘蓝均为二倍体，体细胞染色体数目分别为20、18。“白菜—甘蓝”是用细胞工程的方法培育出来的蔬菜新品种，它具有生长期短、耐热性强和易于储藏等优点。下图是“白菜—甘蓝”的杂交过程示意图，回答以下问题：

（1）为了得到原生质体需先用________和________来处理白菜细胞和甘蓝细胞；

（2）诱导原生质体融合的方法有多种，常用的物理方法是________，融合完成的标志是________。由杂种细胞得到白菜—甘蓝还需要经过组织培养技术，其中需要避光培养的步骤是________。

（3）上图通过植物体细胞杂交技术获得的“白菜—甘蓝”体细胞染色体数为_____；通常情况下，白菜和甘蓝有性杂交是不能成功的，原因是________，若对白菜和甘蓝采用杂交育种方法能成功的话，得到的后代应含________条染色体。

（4）植物体细胞杂交技术和传统杂交技术相比的优点是________。

【选修3】《现代生物科技专题》

（1）构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式——________和____________。若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择________(相同或不同)限制酶进行切割。

（2）利用大肠杆菌生产人胰岛素时，构建的表达载体含有人胰岛素基因及其启动子等，其中启动子的作用是：它是                       的位点，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需要的蛋白质。在用表达载体转化大肠杆菌时，常用________处理大肠杆菌，以利于表达载体进入；为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用标记的         基因片段作探针与mRNA杂交，该杂交技术称为________。为了检测胰岛素基因转录的mRNA是否翻译成人胰岛素，常用______________技术。

（3）如果要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的________中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的________上。

Ⅱ．请根据材料回答下列问题。

单克隆抗体在医疗、诊断等方面发挥着越来越重要的作用。英国科学家米尔斯坦和柯勒设计了一个用被免疫的B淋巴细胞制备单克隆抗体的实验，图示其实验流程，请回答。

（1）a是               ，b是                ①过程是                      ，②表示在              上进行培养。③过程包括了体外培养和                    。

（2）制备单克隆抗体时，选择B淋巴细胞的原因是                             。

（3）如何判断经过②后的细胞就是杂交细胞                                   。   

（4）诱导动、植物细胞融合常用的一种化学诱导剂是                    ，植物体细胞杂交之前还需用                          去除细胞壁，植物体细胞杂交技术在一定程度上解决了杂交育种的                               问题。

下图为细胞融合的简略过程示意图，请据图完成问题：

（1）若A、B是植物细胞，在细胞融合之前已用酶处理去掉了细胞壁，所用的酶可能是_________，由此生成的Ａ和Ｂ称为_________；A、B到细胞C的过程中，常用的物理方法有离心、振动、电激。融合完成的标志是________。

（２）若A、B是动物细胞，一般取自幼龄动物的器官、组织，然后用________使其分散开来；A、B到C的过程中，常用的不用于植物细胞工程的方法是用______________诱导细胞融合。对融合得到的D进行大规模培养时需要提供的气体环境为______________，其中CO2的作用是                                                            _。此外，培养液还应进行无菌处理，通常还要在培养液中添加一定量的抗生素，以防​                           。

（３）若Ａ为骨髓瘤细胞，Ｂ为经免疫的Ｂ淋巴细胞，那么Ｄ称为_________，这种细胞既能大量繁殖，又能产生_________。

（４）从A、B到细胞C的过程中，可形成__________种类型的细胞（仅考虑两个细胞间的融合）。若该过程用于单克隆抗体的制备，应筛选出符合要求的Ｄ，方法是用特定的__________培养基培养，为了大规模的生产单克隆抗体，还需对D进行第二次筛选，第二次筛选的目的是____________________。

（1）②过程依据的原理是________。

（2）一般在培养基上培养24～28小时后，大部分原生质体已再生出细胞壁。可以取样，通过________实验来鉴别细胞壁是否已经再生。

（3）请用文字和箭头表示出④、⑤过程的实验流程________。在此过程中需要加入生长素类和细胞分裂素类激素，前者的作用主要是用于________。

（4）若想制备人工种子，则需培养至________阶段，取出包裹上人工种皮,利用人工种子繁殖后代属于________。

据图回答下列问题：

(1)过程①所需的酶_____________________。

(2)过程②后，在显微镜下观察融合的活细胞中有供体的________存在，这一特征可作为初步筛选杂种细胞的标志。

(3)原生质体培养液中需要加入适宜浓度的甘露醇以保持一定的渗透压，其作用是________。原生质体经过________再生，进而分裂和脱分化形成愈伤组织。

(4)若分析再生植株的染色体变异类型，应剪取再生植株和________植株的根尖，通过________、________、染色和制片等过程制成装片，然后在显微镜下观察比较染色体的形态和数目。

(5)采用特异性引物对花椰菜和黑芥基因组DNA进行PCR扩增，得到两亲本的差异性条带，可用于杂种植株的鉴定。下图是用该引物对双亲及再生植株1—4进行PCR扩增的结果。据图判断，再生植株1—4中一定是杂种植株的有__________________。

(6)对杂种植株进行________接种实验，可筛选出具有高抗性的杂种植株。

下列关于生物育种的叙述，正确的是