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            • 1. 目前,精子载体法逐渐成为具有诱惑力的制备转基因动物方法之一,该方法以精子作为外源基因的载体,使精子携带外源基因进入卵细胞受精.如图表示利用该方法制备转基因鼠的基本流程.请据图回答:

              (1)精子载体法过程中外源基因能够整合到精子的    上是提高转化率的关键,因为受精时只有精子的    才能进入卵细胞中.
              (2)过程②采用的是    技术.
              (3)利用转基因动物分泌的乳汁来生产药物的    反应器是科学家用药用蛋白基因与    的启动子等调控组件重组在一起,然后导入哺乳动物的受精卵中,最终生长发育成转基因动物.
              (4)过程③需要在    (至少写出两点)等条件下进行.
            • 2. (2016•大兴区一模)近年来,癌症等疾病高发,严重影响着人类健康.
              (1)海兔素是从黑斑海兔体内分离获得的一种含溴倍半萜,有学者以人肺癌细胞系A549作为体外肿瘤模型,研究了海兔素与TRAIL(肿瘤凋亡诱导因子)对肿瘤细胞的作用.如图1.
              ①配置动物细胞培养液,同时加入胎牛    ,以满足细胞代谢所需的营养物质及调节因子.
              ②将A549置于适宜温度条件下培养.待细胞密度达到90%时,加入    ,将细胞分散至单细胞悬液.
              ③用一定浓度的海兔素、TRAIL处理上述细胞悬液后,采用流式细胞仪计数.
              实验中每个浓度的TRAIL处理下都设置了对照,其处理是    ,目的是    .根据结果可知,在不同条件组合的处理之下,随着处理浓度的增加,A549肿瘤细胞的存活率    ,这表明,海兔素能够    (填“增强”或“减弱”)TRAIL的抗肿瘤作用.
              (2)肿瘤细胞往往存在对TRAIL作用的抗性,其主要原因是肿瘤细胞内抗凋亡蛋白基因的高表达.为进一步研究海兔素对TRAIL抗肿瘤作用的机制,研究者又进行了相关实验.
              用凝胶电泳方法测定相关蛋白质的含量,结果见图2(β微管蛋白为对照).结果表明,海兔素可能抑制    ,从而减轻其对TRAIL的抗性.
              (3)综上所述,海兔素对于癌症的治疗有一定的效果,且这种作用与        呈现出相关性.
            • 3. (2016•菏泽一模)P53基因是正常细胞内重要的抑癌基因,研究表明P53基因突变可导致肝脏细胞癌变.科学家研究发现P53基因对体外培养的肝癌细胞生长有抑制作用,请回答下列问题:
              (1)切下新鲜的肝癌组织,在37℃下用    消化30~40分钟,用培养液制成细胞悬液在培养箱中培养,培养液是模拟了人体    的成分配制的,在培养基中加入一定量的抗生素,其目的是    
              (2)将P53基因经过一系列的处理并与脂质体混合,将混合物滴加至肝癌细胞上,轻轻混匀.最后筛选出含有P53基因的肝癌细胞.脂质体在这个操作中的作用是    
              (3)为证明P53基因有抑癌作用,需将两种细胞接入多孔板中,并从次日开始检测每孔的细胞总数,绘制成如图所示的生长曲线.请分析曲线    代表转入P53基因的肝癌细胞.
            • 4. 由于人突变细胞中含胸苷激酶(TK)而缺乏HGPRT酶,小鼠正常细胞中含HGPRT酶而缺乏TK,两种细胞均不能在HAT培养基中生长,但可在普通培养基中生长.利用上述两类细胞融合获得杂种细胞,在杂种细胞传代过程中,鼠的染色体被保留下来,人的染色体随机丢失,以至最后只剩一条或几条人染色体(如下图,图中数字代表保留的人染色体编号).科研人员运用这一方法确定了胸苷激酶基因所在的染色体.分析回答:

              (1)人、鼠细胞融合的原理是    .过程A常用化学诱导剂是    ,与植物原生质体融合过程相比特有的诱导方法是    
              (2)动物细胞培养过程中,人工合成的培养基需要加入一定量的    ,以满足细胞生长的需求.培养液中还要添加一定量的抗生素的目的是    ,培养箱中充入5%的CO2气体的主要作用是    
              (3)过程B用HAT培养基进行培养,目的是筛选出    
              (4)为了使人的全部染色体分别包含于各种不同的人鼠杂交细胞中,人鼠融合细胞应在    (填“HAT”或“普通”)培养基中传代培养.为检查杂种细胞中含有的人染色体数目和形态,最好选取    (时期)的杂种细胞进行观察.
              (5)若将某次实验获得的各种人鼠杂种细胞分别在HAT培养基中培养,一段时间后,发现在HAT培养基中只有A、B、C三种杂种细胞能够生长,检查杂种细胞中保留的人染色体情况如表(表中“+”表示有相应染色体,“-”表示无相应染色体):
              杂种细胞保留的人染色体
              2号3号5号9号12号17号21号
              A++++-+-
              B-+--++-
              C+-+-+++
              根据表中信息,可推测人细胞中胸苷激酶基因位于    号染色体上.
            • 5. “探究”是高中生物学习的重要内容,是以设计实验和进行实验为核心的实践活动.请回答下列问题:
              (1)探究酵母菌在氧气充足条件下不能进行酒精发酵的原因是氧气抑制了酵母菌的无氧呼吸,还是有氧呼吸产生的ATP抑制了酵母菌的无氧呼吸的实验:
              材料用具:锥形瓶、含酵母菌的培养液(试剂1)、酵母菌破碎后经离心处理得到的只含有酵母菌细胞质基质的上清液(试剂2)和只含有酵母菌细胞器的沉淀物(试剂3)、质量分数5%的葡萄糖溶液、ATP溶液、蒸馏水、橡皮管夹若干、其他常用器材和试剂.

              实验步骤:
              ①取锥形瓶等连接成如图1所示的装置三套,依次编号为A、B、C,设定A套为对照组.锥形瓶1中都加入等量的质量分数为10%的NaOH溶液,锥形瓶3中都加入等量的澄清的石灰水.
              ②A装置的锥形瓶2中加入    ;B装置的锥形瓶2中加入10mL试剂2、10mL质量分数5%的葡萄糖溶液、2mL ATP溶液; C装置的锥形瓶2中加入10mL试剂2、10mL质量分数5%的葡萄糖溶液、2mL蒸馏水.
              ③A、B、C三套装置均先持续通入氮气1min,除去锥形瓶中的氧气,再将A、B、C三套装置分别作如下处理:A套持续通入氮气,B套持续通入    ,C套持续通入    
              ④将三套装置放在相同且适宜条件下培养10h.
              ⑤观察    ,判断酵母菌是否进行无氧呼吸.
              (2)探究二氯二乙胺能否抑制癌细胞增殖的实验:
              材料用具:肝部长有肿瘤的小鼠,不同浓度的二氯二乙胺溶液,蒸馏水,生理盐水,含有全部营养物质的细胞培养液,显微镜,血球计数板,试管,吸管等.
              实验步骤:
              a.取洁净的培养皿一个,加入适量培养液,从小鼠肝部切取肿瘤组织,剪碎,并用胰蛋白酶处理,使其分散开来,置于培养皿中培养;
              b.取洁净的试管5支,加入等量培养液,编号1、2、3、4、5,并在1~4号试管中加入等量的不同浓度的二氯二乙胺溶液,5号试管中加入    
              c.从培养皿中吸取等量的培养液置于1~5号试管中,振荡后,在适宜条件下培养-段时间;
              d.从静置的5支试管中吸取适量的培养液置于血球计数板上,在显微镜下计数,记录数据.
              实验分析:
              ①该实验的实验组是    号试管.上述实验步骤d中测量到的数据是否准确,请判断并作出解释:    
              ②另有同学按照正确的方法进行实验,得到如下结果:
              根据以上实验结果,你能得出的结论有:二氯二乙胺能抑制癌细胞增殖,且在一定范围内,随二氯二乙胺浓度的增大,抑制作用    
            • 6. 屠呦呦教授因研究青蒿素获得诺贝尔生理学或医学奖,双氢青蒿素(DHA)是青蒿素的重要衍生物,能有效抗疟.研究发现,青蒿素对多种癌细胞有抑制作用,如果提升癌细胞内铁离子,然后引入青蒿素,则可选择性地将癌细胞杀灭.下面是相关试验操作.
              操作一:制作3组乳腺癌细胞和正常乳腺细胞混合物.
              操作二:第一组加入转铁蛋白的化合物;第二组加入一种水溶性DHA,第三组先加入转铁蛋白,再加入水溶性DHA.
              (1)癌症的发生是    的结果,在适宜条件下,癌细胞不受机体控制,能迅速增长和    
              (2)在制作乳腺癌细胞和正常乳腺细胞混合物时,需要用    将组织分散成许多单个细胞,培养液中通常需要加入    等成分.
              (3)要想使上述试验结果更加可信,还需要    .预期第    组的乳腺癌细胞被杀灭最多.
            • 7. 图1为动物的克隆研究过程,其中Ⅰ~Ⅶ代表有关过程,a~h代表有关结构或个体.

              (1)Ⅰ→Ⅱ→Ⅲ→Ⅳ→Ⅵ过程证明了    
              (2)过程Ⅴ取出的细胞f是    ,它在功能上的特点是    
              (3)动物细胞培养基中为防止培养过程中的杂菌污染需要添加    
              (4)Ⅳ过程用的技术是    .若d为囊胚时期,可以取    对克隆早期胚胎进行性别鉴定.
              (5)若不考虑环境因素影响,克隆羊的性状全部像提供细胞核的绵羊吗?    .原因是    
            • 8. 为研究双氢青篙素(DHA)对人结肠癌HCT116细胞的作用,科研人员提出以下实验思路:
              (1)取HCT116细胞用胰酶消化后,再用含血清的培养液制成细胞悬液,分别接种于4块培养板(一种多孔的细胞培养器具)的培养孔内,置于CO2培养箱内培养12h.
              (2)取出培养板,吸弃培养孔内上清液后向每孔中加入含有不同浓度DHA的培养液(浓度分别为0、125、250、500nmol/L),每个浓度加3个培养孔,置于培养箱内培养.其它培养板也做相同处理.
              (3)分别于加药后12、24、48、72h后,各取一块培养板,采用MTT检测法测定各孔内培养液的光吸收值(OD值),计算抑制率[抑制率=(1-
              加药组OD
              对照组OD
              )×100%].
              (说明:MTT,即四唑氮蓝,它能被活细胞线粒体中一种与柠檬酸循环有关的酶还原成不溶于水的蓝紫色结晶,而死细胞中此酶无活性,不能产生蓝紫色结晶.故可经相关处理后测OD值反映细胞存活率和抑制率.)
              请回答:
              (1)实验目的是:    
              (2)请设计一张表格用于记录实验时所测得的数据,便于抑制率的计算.    
              (3)实验中需要控制的无关变量有    (至少写出两个).每个DHA浓度需加3个培养孔,是为了    
              (4)若最终的实验结果以坐标图呈现,则纵坐标应标识为    
            • 9. 研究人员利用成年鼠嗅粘膜制备的嗅鞘细胞,在添加不同血清浓度下培养并测量其细胞生长(增殖)情况,获得实验结果如图,请据图分析回答:

              (1)将获取的嗅粘膜加入0.25%酶液中,用剪刀充分剪碎,并用吸管吹吸多次,该操作的生物学意义是
                  ,以便制成嗅粘膜细胞悬液.该过程中,所使用酶液的主要成分是    
              (2)将获得的嗅粘膜细胞悬液及时离心,将分离获得的嗅粘膜细胞加入适量的培养液,摇匀后再离心获取嗅粘膜细胞,这样操作的意义主要是去除    ,以避免其对嗅粘膜细胞正常的生命活动造成影响.将获得的嗅粘膜细胞用特定培养基置于培养箱内培养.进行原代培养时,细胞增殖的方式是    
              (3)根据实验可知,当培养液中血清浓度为40%-80%时,随血清浓度升高,对细胞的生长的促进作用表现为    .据图推测,与40%的血清浓度培养条件相比,10%的血清浓度对细胞生长的促进作用可能表现为    
            • 10. 角膜缘干细胞能更新角膜上皮细胞,角膜上皮细胞对维持角膜的透明性至关重要.回答下列问题:
              (1)将角膜缘组织剪碎,加入    处理,可获得大量游离分散的细胞.细胞悬液在培养瓶中培养,当贴壁生长的细胞发生    现象时停止增殖.
              (2)通常角膜缘干细胞的培养控制在10代以内,原因是    
              (3)离体培养角膜缘干细胞时,一般需要在合成培养基中加入    等天然成分,培养时所需的气体主要有    
              (4)研究发现,细胞因子能够调控角膜缘干细胞分化.放线菌素D能通过阻碍RNA聚合酶的功能进而抑制细胞因子的调控,由此推断该抑制过程发生在    (选填“复制”、“转录”或“翻译”)水平.
              (5)研究还发现,皮肤干细胞可以诱导分化为角膜缘干细胞,这体现了皮肤干细胞具有    .临床上常用诱导干细胞定向分化的方法修补损伤或衰老的组织器官,从而解决了    问题.
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