图示方案为人们获得生物新品种的过程，请回答下列问题：

方案Ⅰ：抗冻蛋白基因烟草细胞―→抗冻烟草

方案Ⅱ：A基因免疫过的B细胞―→体外培养―→单克隆抗体

方案Ⅲ：人的生长激素基因牛的受精卵―→早期胚胎受体母牛―→转基因牛

(1)基因工程的核心步骤是________________。农杆菌转化法中，根据农杆菌的特点，如果将抗冻蛋白基因插入________上，通过农杆菌的转化作用，就可以使目的基因进入植物细胞，并将其插入植物细胞中________上。

(2)推测方案Ⅱ中A基因所起的作用是________，请写出该方案获得的细胞中遗传信息传递时所遵循的法则____________________________。

(3)方案Ⅲ中的转基因牛可以通过分泌乳汁来生产人的生长激素。这需要将人的生长激素基因与________的启动子等调控组件重组在一起。该方案中的早期胚胎在移植入受体母牛子宫之前，必须进行性别鉴定，一般是取处于________时期的________细胞进行检测。

回答下列（一）、（二）小题。

(一）某研究小组欲用苹果汁为原料，利用发酵瓶制作果酒和果醋，请分析回答：

(1)将苹果汁放入发酵瓶，要预留约________的空间。为得到酒精和糖含量较高的果酒，可在果汁中加入一定比例的______。若发酵瓶内持续无气泡产生，则需加入更多的_______，使发酵作用尽快发生。

(2)变酸的果酒表面有一层醋杆菌形成的菌膜，若要在该菌膜中筛选高表达量的醋杆菌菌株，可通过获得_______的方法来分离筛选。若要统计获得菌种的数目，则常采用_________法。对获得的优质醋杆菌菌种常用划线法接种在固体培养基______上低温保存。

(3)下图是果酒和果醋的发酵装置，关于果醋发酵叙述错误的是_______

A.发酵前，瓶内酒—冰混合物的pH需调至7.0

B.发酵过程中，充气口要适时适量充气

C.发酵过程中，排气口排出醋酸发酵产生的CO₂

D.发酵完成后，出料口的pH值不再减少

 (二）请回答杂交瘤技术和单克隆抗体制备的有关问题。

(1)杂交瘤技术制备单克隆抗体时，利用一定的物质，如生物诱  导剂_____作介导，使经免疫的小鼠脾细胞与________细胞融合，筛选出融合的细胞再进行细胞的______培养，获得纯系细胞，同时还要进行________检验，以保证获得的是所需的特定杂交瘤细胞。

(2)有关杂交瘤细胞体外培养的叙述，正确的是________

A.用固体培养基培养          B.用滋养层细胞支持生长

C.能进行传代培养            D.需要对细胞进行研磨破碎获得产物

(3)现在欲利用基因工程技术生产单克隆抗体，科研小组将与抗体形成有关的关键基因通过噬菌体导人到受体细胞，该技术的核心步骤是______________,噬菌体是这些关键基因的___________。

下图为单克隆抗体制备流程示意图。

(1)单克隆抗体制备技术的基础是 ____________________________。

(2)细胞融合是随机的过程，在HAT培养基中培养，目的是______________________。在细胞培养过程中，培养液中需要添加无机盐，但要注意无机盐的____________________ ，以保证生命活动的正常进行。    

(3)为选育出能产生高特异性抗体的细胞，要将从HAT培养基上筛选出的细胞稀释到7～10个细胞／ml，每孔滴入0.1ml细胞稀释液，其目的是_______________ 。

(4)若用¹⁵N标记的氨基酸培养能产生单克隆抗体的细胞，放射性物质在细胞结构中出现的先后顺序是____________________________________________________。

回答下列有关现代生物科技的问题：

(1)糖尿病在现代社会中的发病率越来越高，主要是由于患者胰岛B细胞受损，胰岛素分泌不足引起的。对此，某同学根据所学知识提出了用转基因动物生产胰岛素治疗方法。基本程序：①获取目的基因→②基因表达载体的构建→③将目的基因导入受体细胞→④目的基因的检测与鉴定。其中①和②的操作中需要相同的工具酶是________________，该酶的作用是__________________，暴露出相同的黏性末端。利用PCR技术扩增目的基因的过程中，目的基因受热形成单链并与引物结合，在________酶的作用下延伸形成DNA。

(2)蛋白质工程的基本途径是：预期蛋白质功能→设计预期的蛋白质结构→推测应有氨基酸的序列→找到相对应的________序列。

(3)单克隆抗体的制备过程中，经人工诱导后，骨髓瘤细胞和产生免疫反应的B淋巴细胞融合。由于可能产生多种融合细胞，因此还需对融合细胞进行________________。

(4)．分析有关基因表达的资料，回答问题。

取同种生物的不同类型细胞，检测其基因表达，结果如图1。

               图1                                                 图2

a.现欲研究基因1和基因7连接后形成的新基因的功能，导入质粒前，用限制酶切割的正确位置是__________。

b.图2是表达新基因用的质粒的示意图，若要将新基因插入到质粒上的A处，则切割基因时可用的限制酶是________。

A. HindⅢ           B. EcoRⅠ          C. EcoB          D. PstⅠ

c.新基因与质粒重组后的DNA分子导入受体细胞的概率很小，因此需进行________，才能确定受体细胞已含有目的基因。

回答下列(一)、(二)小题。

(一)请回答下列有关微生物培养、发酵过程中的相关问题。

(1)在“分离以尿素为氮源的微生物”的实验中，配制好的尿素固体培养基加上封口膜后用高压蒸汽灭菌方法灭菌，冷却后加入用_________漏斗过滤的尿素溶液。漏斗用后需用适宜浓度的___浸泡，再用蒸馏水冲洗，干燥后保存。 

(2)在“果汁中的果胶和果胶酶”实验中，可以用___(A.50%乙醇　B.70%乙醇　C.90%乙醇　D.95%乙醇)鉴别果胶。果胶酶可以从黑曲霉或______中提取，配制这些微生物的培养基时需要将pH调至____。

(3)果酒制作果醋过程中，通入空气需要经过_____过滤。果醋发酵结束的标志是pH_____。 

(二)下图表示动物细胞克隆和制备单克隆抗体的相关过程，请回答相关问题：

(1)过程①常应用____方法导入重组诱导基因后得到干细胞；部分干细胞经过诱导可分化成全身的不同组织或器官，说明这些细胞具有____性。在动物细胞培养过程中培养液中必须通入O₂和CO₂，通入CO₂的目的是__________。

(2)该过程中甲和乙细胞可经过生物诱导剂______的作用形成丙细胞。取一个丙细胞，放在含大量失去____的小鼠成纤维细胞的特定培养体系中培养，最后产生大量的细胞群，这种方法为____法。 

(3)下列关于经③和④过程得到单克隆抗体的叙述，错误的是_____。

A.该过程应用了细胞膜具有流动性的原理    B.该过程应用了动物细胞融合和动物细胞培养技术

C.丙细胞要具有分泌多种抗体的能力   D.丙细胞的形成先通过筛选得到杂交瘤细胞，再进行抗体检验

（2）若想对初步筛选得到的目的菌进行纯化并计数，可采用的接种方法是 _________ ．对分离的细菌数目统计时，统计的菌落数目往往比活菌的实际数目偏少，原因是_______________________________________ 。

（3）选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的_________________________________特点，又具备B淋巴胞的__________________________特点。单克隆抗体与常规的血清抗体相比 ，最大的优越性是________________________________。（至少填两个） 

人感染埃博拉病毒(EV)会引起致命的出血热。为了寻找治疗EV病的有效方法，中外科学家进行了系列研究。

                     图1                                                        图2

                                          图3

(1)EV表面的糖蛋白(EV-GP)作为________刺激机体产生________性免疫反应。

(2)科学家采集了多年前感染EV并已康复的甲、乙两人的血液，检测抗EV-GP抗体的水平。据图1，应选取________的血液分离记忆B细胞用以制备单克隆抗体(单抗)。

(3)将制备的多种单抗分别与病毒混合，然后检测病毒对宿主细胞的感染率。据图2，抑制效果最好的两种单抗是______________。

(4)EV-GP具有多个与抗体结合的位点。为了研究上述两种单抗(分别称为A、B)与EV-GP结合的位点是否相同，可按图3所示简要流程进行实验。

①请将图3中应使用的抗体填入下表ⅰ、ⅱ、ⅲ、ⅳ处(填“A”“B”或“无关抗体”)，完成实验方案(一种即可)。

②若A、B与EV-GP结合的位点不同，与对照组1、2分别比较，实验组的荧光值应____________________________________。

(5)中国科学家用分子结构成像技术证实了A、B与EV-GP 结合的位点不同。基于上述系列研究，请你为治疗EV病提供一种思路：_________________。

A．淀粉酶       B．脂肪酶      C．纤维素酶    D．葡萄糖氧化酶

①骨髓瘤细胞可以产生抗体，但不能无限增殖

②骨髓瘤细胞可以无限增殖，但不能产生抗体

③B淋巴细胞可以产生抗体，但不能无限增殖

④B淋巴细胞只有与骨髓瘤细胞融合才能产生抗体

利用小鼠制备的抗人绒毛促性腺激素单克隆抗体做成的“早早孕试剂盒”，检测早孕的准确率在90%以上。请回答该“单抗”制备的有关问题：

(1)单克隆抗体与常规的血清抗体相比。最大的优越性是______________。

(2)在该“单抗”的生产过程中，将__________________作为抗原对小鼠进行注射。

(3)对小鼠注射特定抗原后，可从小鼠体内脾脏中得到相应的____________细胞，设法将鼠的骨髓瘤细胞与该细胞融合，常用诱导融合剂______________处理,再用特定的选择培养基对融合细胞进行筛选，选出的是____________；大规模培养前对该细胞还需进行细胞培养和__________检测，经多次筛选，可获得足够数量的符合需要的融合细胞。该融合细胞的特点是: _______________________。

(4)得到的杂交瘤细胞一般采用体内培养和体外培养两种方式进行培养，体外培养对环境条件的要求比较高，除了需适宜的温度和PH、一定的营养和气体条件外，还需满足的条件有：____________。