人组织纤溶酶原激活物(htPA)是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得。流程如下：

（1）htPA基因与载体构建重组表达载体需要用到的工具酶有__________。基因表达载体中除了要有目的基因以外，还要有启动子，它是_________识别和结合点部位；除上述外还需有_____________________。检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用____________技术。

（2）为获取更多的卵(母)细胞，要对供体母羊注射促性腺激素使其超数排卵，采集的卵子必须发育到________(时期)；采集的精子需要经过________处理，才具备受精能力。

（3）将重组表达载体导入受精卵常用的方法是__________。生产上常用________期的胚胎进行移植；为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行___________。利用______________技术可获得多个转基因个体，这体现了早期胚胎细胞的全能性。

（4）若在转htPA基因母羊的羊乳中检测到__________，说明目的基因成功表达。

图1表示利用生物技术制备抗X的单克隆抗体的过程；图2表示体外受精培育优质奶牛的过程；图3表示番茄和马铃薯植物细胞融合和再生植株的过程。请据图回答下面的问题。

⑴ 在图1中注射到小鼠体内的物质是__________。融合后的细胞经过多次筛选才能获得理想的细胞，此类细胞的特点是__________________。

⑵ 图2中参与体外受精的精子需要经过成熟和获能的过程，才能与达到__________期的卵子受精。若要获得多头与此优质奶牛相同的小牛，可对图2中囊胚中的__________均等分割后进行胚胎移植。以上技术是在__________(填“体内”或“体外”)完成的。

⑶ 图3中过程①是植物细胞形成__________________的阶段，该阶段所用的酶是__________________________。在形成再生植株的过程中与组织培养有相似之处的步骤是__________（填图中序号）。

2016年10月19日美国新希望生殖医学中心正式宣布，世界首个核移植“三父母”男婴已于2016年4月诞生。为中东一位线粒体携带有亚急性坏死脑病基因的母亲带来了希望。培养过程如下图，据图回答：

（1）获得重组卵母细胞A也会用到体细胞核移植技术，完成①过程需要用微型吸管吸出______，完成④过程的B细胞需要选择_________（时期）的卵母细胞。

（2）卵母细胞的获取过程中，需要对女性进行超数排卵处理，超数排卵的方法是给女性注射_______激素，超数排卵技术带来的危害之一是_________。

（3）细胞A的培养过程③所需气体主要有O₂和CO₂，CO₂的主要作用是________________。

（4）为了提高已有胚胎的利用率，可采用________________技术。若选用囊胚期的胚胎，操作过程中要特别注意的问题是____________。

（5）设计试管婴儿技术与解决不孕问题而进行的试管婴儿技术的主要区别是前者需要在植入前对胚胎进行___________________。

以下是科学家采用不同方法培育良种牛的过程，a～h为操作过程，请据图回答有关问题：

（1）试管牛技术的操作流程是________________(填字母)。

（2）图中用激素处理良种奶牛过程用到的激素是_________________，其目的是获得更多的卵母细胞。对供体母牛和受体母牛需要做___________处理，从而处于相同的生理状态。

（3）若a表示体内受精，则在此过程中防止多精入卵受精的两道屏障分别为               和____________。

（4）d操作的名称是____________，受体母牛必须和供体牛属于同一物种。移植后的胚胎能在受体子宫中存活的生理基础是________________________________________________。

（5）若要获得遗传物质完全相同的两个新个体，可对发育到           阶段的早期胚胎进行________________处理，再植入到受体内。在对囊胚阶段的胚胎进行分割时，应注意__________________________________。

下图1表示利用生物技术制备抗X的单克隆抗体的过程；图2表示培育优质奶牛的过程。请据图回答下列问题：

(1) 图1所示过程所用的生物技术有         。

(2) 将经免疫处理后的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，获得能分泌抗X的单克隆抗体的杂交瘤细胞的过程中至少要进行两次筛选：一次是通过           培养基，筛选出杂交瘤细胞，另一次是通过            检测，筛选出能分泌抗X的单克隆抗体的杂交瘤细胞。

(3) 通过上述方法得到的单克隆抗体可快速准确地识别抗原X，其原因是该抗体具有                   的特点。

(4) 图2中的重组细胞         (填“①”或“②”)实现了基因的重组。

(5) 图2中的早期胚胎发育到         阶段才可以移植，在移植之前，需要进行质量检查，用某染料鉴定胚胎细胞是否为活细胞时，发现活胚胎细胞不能被染色，其原因是                。

(6) 为了获得多个基因型相同的优质奶牛，可采用的技术手段是         。

图1

(1) 荷斯坦奶牛在初次产奶300天后就会停止分泌乳汁,进入干奶待产期。为缩短干奶期,可在奶牛哺乳期的合适时间为母牛进行____,以提高受孕率,促使母牛开始新一轮的产奶。 

(2) 过程①中产生的精子需进行____处理后方有受精的能力,过程④中移植的早期胚胎处于____期。图示过程中发生基因重组的是____(填序号)。 

图2

(4) 为保证和牛的品质,防止近亲繁殖,需要对和牛进行DNA检测。目前常用“拔牛毛”的方法获取带毛囊的牛毛进行检测,而不是用直接剪取牛毛进行检测,原因是____________。DNA检测首先需制备DNA荧光探针,过程如图2所示,在DNA酶Ⅰ作用下产生切口,随后在DNA聚合酶Ⅰ作用下,以荧光标记的______为原料,合成荧光标记的DNA探针。 

(5) 牛是反刍动物,消化道并不能分泌纤维素酶,但在其瘤胃中生活着大量的微生物,可以帮助牛消化纤维素,这些微生物与牛的关系是____。 

  (1)在培育转入甲型H1N1病毒抗体基因牛的过程中，①过程需要的工具酶是_____________，②过程常用的方法是_____________。

  (2)转入甲型H1N1病毒抗体基因的牛可通过分泌乳汁来生产甲型H1N1病毒抗体，在基因表达中，甲型H1N1病毒抗体基因的首端必须含有________，它是________识别和结合的位点。③过程培养到桑椹胚或囊胚阶段，可以采用________技术，培养出多头相同的转基因牛。

  (3)prG能激发细胞不断分裂，通过基因工程导入该调控基因可制备单克隆抗体，Ⅰ最可能是________细胞，Ⅱ代表的细胞具有________________________________________的特点。

  (4)制备单克隆抗体也可以用动物细胞融合技术。与动物细胞融合过程不同，植物体细胞杂交在细胞融合之前要用________________对细胞进行处理。

(1) 上述过程涉及的现代生物工程技术中属于分子水平的技术是____________。 

(2) 图中B过程常用______法将绿色荧光蛋白基因导入成纤维细胞中。 

(3) C过程要获得单个的成纤维细胞进行培养,需用_______处理猪胚胎的部分组织;E过程中若要获得大量的卵母细胞,需用____处理成年母猪;在进行H过程之前,需要对代孕母猪进行____处理。 

(4) H过程前,若要进行胚胎分割,用分割针或分割刀片将胚胎切开,吸出其中的半个胚胎,注入预先准备好的____中,或直接将____移植入受体。在对囊胚阶段的胚胎进行分割时,要注意将内细胞团均等分割,否则会影响分割后胚胎的_______。 

(1)“试管牛”和“克隆牛”的培育过程都要使用胚胎工程的早期胚胎培养和胚胎移植技术，不同之处在于其胚胎的来源不同，“试管牛”的胚胎是通过____________技术获得的，而“克隆牛”的胚胎是通过____________技术获得的。

(2)c操作的要求是__________________________ 。

(3) A、B的遗传物质一般认为是相同的，利用该方法获得A、B牛的生殖方式是____生殖

(4)移植后的胚胎能通过_________从受体子宫获得营养物质。

（1）②为PCR过程，除了要加入引物、原料外还需要加入________________________，在此过程中引物的作用是_____________________________________。

（2）BamHⅠ的识别序列为—G↓GATTC—，HindⅢ的识别序列为—A↓AGCTT—，选用这两种酶进行操作的意义是______________________________，除此之外，③过程还需要_____________酶。

（3）BLG基因5′端调控序列能使hLF基因在羊的乳腺细胞中特异性表达，这是因为__________________________________________________________________。

（4）要获得能表达目的基因的羊，应将重组质粒导入羊的_____________（填“乳腺细胞”“去核卵细胞”或“受精卵”），获得优良胚胎后，为了提高胚胎的利用率，常采用____________的方法来处理胚胎。