已有研究证实,在体外培养条件下耐药基因能够在不同种属的乳酸菌菌株中发生转移。鉴于此,科研小组对市售酸奶中的乳酸菌进行分离和鉴定,通过药物敏感性实验确定菌株的耐药谱,同时调查环丙沙星、庆大霉素、四环素等耐药基因在这些菌株中的分布情况,为乳酸菌的安全评价提供参考依据。请分析回答下列有关乳酸菌培养过程中的相关问题:

(1) 本研究使用的细菌培养基中特别加入了一定量的碳酸钙,乳酸菌产生的乳酸能与不溶性的碳酸钙生成可溶性的乳酸钙,从而在菌落周围形成溶钙圈。从功能角度分析,本研究使用的培养基属于______。 

(2) 在利用高压蒸汽灭菌锅对培养基灭菌时,锅内水加热煮沸后,必须____,以保证锅内气压上升、温度升至121 ℃,灭菌后的培养基应适当冷却后,在____附近倒平板。 

(3) 在酸奶制作过程中要严格控制发酵条件是保证发酵正常进行的关键,通常所指的发酵条件包括_____________(至少写出两项)。一般情况下含抗生素牛奶不宜制作酸奶,原因是_______________。 

(4) “检测乳酸菌对环丙沙星、庆大霉素、四环素耐药性”实验中,____(选填“需要”或“不需要”)设置对照实验,培养基配制好后再分别接种____。 

(5) 在统计菌落时,发现0.1 mL稀释倍数为10⁵的稀释液在平板上的平均菌落数为40个,则每毫升样液中的乳酸菌数大约为____个。用此法测定的乳酸菌数量比实际活菌数量____,原因是______________。 

如下表所示为某微生物培养基的配方，请回答：

(1)依物理性质，该培养基属于__________培养基。依用途划分，则属于_________培养基。

(2)根据培养基原料，所培养微生物的同化作用类型是______________，培养的微生物可能是_______________。

(3)该培养基中的碳源是_____________。不论何种培养基，在各成分都溶化后分装前，要进行灭菌。

(4)若用该培养基培养尿素分解菌,应除去的物质是________________,加入的物质是_____________。

(5)为检测尿素分解菌的存在与否,还应加入________________,将呈___________反应。

请回答下列与微生物培养相关的问题：

（1）土壤中具有分解尿素的细菌，此类细菌能产生________酶，该酶能将尿素分解成____________。

（2）某同学要分离土壤中能分解尿素的细菌，并统计每克土壤样品中活菌数目，培养基配方如下。将各种物质溶解后，用蒸馏水定容到1000ml，再经高温灭菌，制成固体培养基备用。

根据培养基的成分判断，该同学能否分离出土壤中能分解尿素的细菌？__________（填“能”或“不能”），原因是__________________。

（3）某小组采用平板划线法分离某样品的细菌时，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线，这样做的目的是_______________________________。使用稀释涂布平板法检测土样中细菌含量时，在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板培养基先行培养一段时间，这样做的目的是_________________。

（4）在分离尿素分解菌的实验中，大部分同学从培养基上筛选出大约50个菌落，而有一个同学从培养基上筛选出大约150个菌落，这种实验结果差异产生的原因可能是________________、_______________。

尿素是一种重要的农业氮肥，不能直接被农作物吸收，只有当土壤中的微生物将尿素分解后才能被植物吸收利用。因此，对土壤中分解尿素的微生物进行分离和鉴定具有重要意义。回答下列问题：

（1）该培养基的葡萄糖为微生物的生长繁殖主要提供_________________。

（2）该培养基可以选择出分解尿素的细菌，原因是___________________________。

（3）某同学用0.1ml的稀释涂布平板法测定一个土壤样品中的细菌数（取10克该土壤加90ml无菌水制成稀释液）。在对应稀释倍数为10⁶的培养基中统计3个平板上的菌落数分别为：231、212、256，则每克该土壤样品中的菌落数为___________。

（4）若要对上述初步筛选出的分解尿素的微生物作进一步的鉴定，可以向培养基中加入__________________。若分离得到的是尿素分解菌，则培养基中pH升高，pH升高的原因是__________________________。

（5）细菌的数目可以通过滤膜法来测定，例如测定饮用水中大肠杆菌的数目。将已知体积的水过滤后，将滤膜放在伊红美蓝培养基上培养，在该培养基上，大肠杆菌的菌落呈现__________，根据培养基菌落的数目，计算出水样中大肠杆菌的数量。

请回答下列问题：

  (1)果酒制作过程离不开酵母菌，其新陈代谢类型为________型。葡萄酒的自然发酵过程中，菌种主要来自于附着在葡萄皮上的野生型酵母菌。如果要从中分离纯化酵母菌，最常用的接种方法是________和稀释涂布平板法。葡萄酒制作成功与否，经发酵后需用酸性条件下的___________来检测。

  (2)泡菜制作离不开乳酸菌，其在无氧条件下，将葡萄糖分解成___________。腐乳制作过程中，卤汤是由酒及各种香辛料配制而成，酒含量一般控制在_________左右。

  (3)醋酸杆菌属于___________核生物，其细胞结构中__________(填“含有”或“不含有”)线粒体。

  (4)有人想提取橘皮精油获取利润，一般提取橘皮精油的方法是_________法，之所以不采取水蒸气蒸馏法，是因为水中蒸馏会导致原料焦糊和有效成分___________等问题。

  (5)要鉴定分离得到的微生物，常需要借助生物化学的方法。如在以尿素为唯一碳源的培养基中加入____________，可用来鉴定分解尿素的细菌。

（每空1分，共5分）某些土壤细菌可将尿素分解成CO₂和NH₃，供植物吸收和利用。回答下列问题：

（1）能分解尿素的细菌不能以尿素的分解产物CO₂作为碳源，原因是_______________，但可用葡萄糖作为碳源，进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是___________________（答出两点即可）。

（2）为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择_________________（填“尿素”“NH₄NO₃”或“尿素 NH₄NO₃”）作为氮源，不选择其他两组的原因是_____________。

（3）用来筛选分解尿素细菌的培养基含有KH₂PO₄和Na₂ HPO₄，其作用有_______________（答出两点即可）。

（1）若分离以尿素为氮源的细菌。在含有___酶的细菌菌落周围会出现，这是由于尿素被分解产生的氨气使PH升高，______指示剂产生颜色变化。采用______法将发酵菌株固定在锯末上制成固定化菌株，可大幅缩短生产周期,降低生产成本和提高生产效率。

(2)亚硝酸盐测定原理:亚硝酸盐可与________________发生重氮化反应.这一产物再与____________________偶联,形成__________色产物。

（3）获得目的基因，获取已知目的基因序列用化学方法合成或_________________

基因工程的核心:通常用_________________分别切割目的基因和载体DNA，然后用________将目的基因和载体DNA连接在一起,形成重组DNA分子。

（4）卵巢经超数排卵处理后，要使用__________________确定卵泡的位置。     

 科研人员单独培养胚胎干细胞，首先需要在培养皿底部制备一层______细胞，称为饲养层。 利用动物细胞培养技术中的细胞具有________________和__________________的特点可用烧伤患者自身的健康皮肤细胞培养出大量自身薄层皮肤细胞，用于移植。

（5）植物克隆和动物克隆共有的培养方法是_______

A.原生质体培养、传代培养     B.贴壁培养、传代培养 

C.器官培养、愈伤组织培养     D.悬浮培养、器官培

(3)取田间不同品种水稻的幼胚，先进行_______，然后接种到培养基中培养，幼胚发生_______形成愈伤组织，并进行继代培养。用含重组质粒的农杆菌侵染愈伤组织，再培养愈伤组织，以便获得抗虫的转基因水稻。影响愈伤组织能否成功再生出植株的因素有：培养条件如光温、培养基配方如植物激素配比、以及_______（答 2点即可）。

（3）取适量含产脲酶细菌的10^-4、10^-5两种土壤稀释液，分别涂布接种到LB固体培养基和尿素固体培养基上，培养48h，推测固体培养基上生长的菌落数最少的是_____(A. 10^-5稀释液+尿素固体培养基        B. 10^-5稀释液+LB固体培养基     C. 10^-4稀释液+尿素固体培养基         D. 10^-4稀释液+LB固体培养基)。在尿素固体培养基上产脲酶细菌菌落周围出现_____，其原因是细菌产生的脲酶催化_____分解产生_____所致。

某研究小组从牛的瘤胃中采集样本，进行分解尿素的微生物的分离与计数。实验基本步骤如下：

（1）分解尿素的微生物含有_______________，因此，配制培养基时以尿素作为唯一氮源，尿素会被分解成_________使培养基的碱性增强。培养基中添加___________作为指示剂，可使目标菌落的周围产生红色环带。

（2）该小组在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是__________________；然后将1mL瘤胃样液稀释1000倍，在3个平板上用涂布法分别接入0．1mL稀释液；经适当培养后，3个平板的菌落数分别为49、47和45。据此可得出每升瘤胃样液中分解尿素的微生物活菌数为__________，理论上，统计的菌落数_____（低、等、高）于接种的实际活菌数目。

[生物一选修1：生物技术实践]多氯联苯是一种有机致癌物质，容易累积在脂肪组织，造成脑部、皮肤及内脏的疾病并影响神经、生殖及免疫系统。多氯联苯为油状液体，污染土壤后，土壤呈现油状板结，很难清除。研究发现部分酵母菌具有分解多氯联苯的作用，为消除这种污染，科研人员计划从受污染的土壤中筛选出高效分解多氯联苯的菌株。

（1）筛选分解多氯联苯的菌株时，应将土壤样品稀释，接种到以             为唯一碳源的培养基上，从功能上讲，该培养基属于              。

（2）对初步提取到的菌株要进行     ，一般操作方法有两种，下图是利用       法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。培养一段时间后，如果出现菌落且菌落周围       消失或减少，说明该菌落中的菌株具有降解多氯联苯的能力。

（3）若要测定培养液酵母菌的菌体数，可在显微镜下用         直接计数。若用稀释涂布平板法统计菌落数，在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板进行培养一段时间，这样做的目的是        。

（4）将1ml酵母菌溶液稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0．1mL稀释液经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为42、43、44，据此可得出每升溶液中酵母菌活菌数为             个/L。