（生物选修）某科研兴趣小组欲对土壤中分解尿素的细菌进行分离纯化和计数，请帮助完成实验．

（1）实验原理：分解尿素的细菌由于含有脲酶，可将 而使周围环境的PH上升，在以尿素为唯一氮源的培养基中加入 指示剂，对其进行分离、鉴别；通过平板上的菌落数可以推测样品中的活菌数．

（2）实验简要步骤：

①土壤取样并制备培养基：用 法对培养基进行灭菌．

②分离纯化该细菌：用稀释涂布平板法进行接种，首先需对土壤滤液进行 ，再分别取土壤滤液0.1mL涂布在每一平板上．

③培养、观察与计数．

（3）有同学发现，稀释倍数为10⁴的5个平板上，长出的菌落数分别为9、147、150、153和360，则每升土壤样液中的细菌数量为             个．

（4）某些同学想将分离出的目的菌在﹣20℃长期保存，菌液中常需要加入一定量的                  （填化学物质）．

[生物—选修1：生物技术实践]

   为研究酸奶中的乳酸杆菌数是否达标，某同学做了如图所示的实验。请回答下列问题：

（1）为避免样本中菌体浓度过高，需要对样本用无菌水进行________处理。

（2）培养乳酸杆菌的固体培养基中，除了含有________、水和无机盐等主要营养成分外，还应加入适量的________和琼脂，在灭菌前，还需调节培养基的________。接种后，培养基置于（填“25～28℃”或“30～37℃”）恒温箱中培养。

（3）如图，测定菌落数时，该同学涂布了5个平板，培养后的菌落数分别是20、110、116、134和120，可算出每毫升样品中的菌落数是________个。

（4）用这种方法测定的乳酸杆菌菌落数比实际活菌数量________，因为________。

乳酸杆菌常用于生产酸奶，牛奶的质量和乳酸杆菌的种类都会影响酸奶的品质，请回答下列问题：

(1)含有抗生素的牛奶不能发酵成酸奶的原因是________．

(2)在分离纯化优良菌种时制作的培养基中一般含有水、无机盐和________等营养物质，在此基础上，还需要满足乳酸杆菌生长对________以及氧气的要求．制作好的培养基需要进行灭菌，灭菌是指用强烈的理化因子杀死物体内外的微生物包括________．在接种前需要检测该同体培养基是否被污染，具体检测方法是________

(3)测定培养液中乳酸杆菌数量时可选用________法和活菌计数法进行计数；若采用活菌计数法计数，则要对样品进行________操作，为保证结果准确，一般选择菌落数在________的平板进行计数．

为了调查某城市自来水的水质状况，某研究小组测定了自来水水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。回答下列问题：

(1) 该小组想检测水样中的活细菌含量。一般运用                培养基进行微生物的培养，在制备培养基从物理性质上属于       培养基；该培养基的制备过程是            

            。如果你想在涂布接种某种微生物前，随机取了若干灭菌后的空白固体培养基，在适宜的条件下培养了一段时间，若空白培养基出现了菌落。请分析出现菌落的原因(写出二个)①                           ， ②                          。

(2) 培养基灭菌后，将1mL水样稀释1000倍，在3个平板上用涂布法分别接入0．1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为51、50和49。据此可得出每升水样中的活菌数为            。

(3) 该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时，每次划线之前都要灼烧接种环，目的是                              的菌种，使下次划线的菌种直接来源于           。

    某同学要分离土壤中能分解尿素的细菌，并统计每克土壤样品中活菌数目，培养基配方如下。将各种物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL，再经高温灭菌，制成固体培养基备用。

（1）根据培养基的成分判断，该同学能否分离出土壤中分解尿素的细菌?_______（填“能”或“不能”），原因是___________________________。

   （2）培养基用_________方法灭菌，培养皿用____________方法灭菌，待培养基冷却到________℃（填“20”、“30”、“40”或“50”）左右时，在________附近倒平板，等平板冷却凝固后，将平板倒过来放置，可以防止__________，以免造成污染。

   （3）要统计每克土壤样品中活菌数目，宜采用__________法接种，根据土壤样品的稀释倍数和接种稀释液的体积，统计平板上的___________就能大约推测出样品中活菌数。

   （4）培养分解尿素的细菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是_______________。

   （5）实验中使用过的培养基及其培养物必须经过_________处理后才能丢弃，以防止微生物的扩散。

实验原理：农田的表层土壤中，自生固氮菌的含量比较多。将用表土制成的稀泥浆，接种到某特定的选择培养基上进行培养。在这种情况下，只有自生固氮菌才能生长繁殖。用这种方法，可以将自生固氮菌与其他细菌分离开来。

材料用具：农田的表层土壤、某特定选择的培养基、牛肉膏蛋白胨培养基，盛9 mL无菌水的试管、无菌吸管、无菌涂布器、无菌培养皿，盛90 mL无菌水的锥形瓶、恒温箱。

（1）方法步骤：
①倒平板
     分别将        培养基（填写题中特定选择培养基的具体名称）、牛肉膏蛋白胨培养基倒平板，应在酒精灯火焰旁操作。
②制备土壤稀释液
    取土样 10 g加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。用无菌吸管吸取上清液1 mL，转至9 mL的无菌水的大试管中，依次稀释到10⁷稀释度。
③涂布
    按照由10⁷～10³稀释度的顺序分别吸取0.1 mL进行平板涂布，每个稀释度下，特定的选择培养基上应至少涂布        个平板，牛肉膏蛋白胨培养基涂布        个。
④培养
    放入恒温箱内，在28～30 ℃下培养3～4天。
⑤细菌的计数
    当菌落数目稳定时，选取菌落数在        的平板进行计数。如果测试的平均值为50，则每克样品中的菌落数是           。(稀释度是10⁵)

（2）预期结果：
相同稀释度下，牛肉膏蛋白胨平板上的菌落数        (填“多于”或“少于”)特定选择培养基上的数目。并说明原因。                                         （2分）