8.
嗜热菌可以生活在98℃的高温环境中,研究发现其耐热性与基因H的表达产物有关。下图表示某研究小组利用大肠杆菌对H基因实行的克隆和表达过程,其中NdeⅠ、EcoRⅠ、HindⅢ、SalⅠ四种限制酶的识别序列和酶切位点分别为CA↓TATG、G↓AATTC、A↓AGCTT、G↓TCGAC。请分析回答:
(1)图中的结构A是________,其主要作用是________。一个完整的基因表达载体组成,除了质粒1中所示结构以外,还应该含有________。
(2)用图中质粒1和H基因构建重组质粒,应选用________两种限制酶进行切割,影响限制酶处理效果的因素可能有________(多选)。
①反应温度 ②缓冲液pH ③限制酶的浓度 ④DNA样品的纯度
(3)实验中发现,重组质粒导入大肠杆菌后H基因的表达效率很低,但在含有质粒2(辅助性质粒)的细胞中,H基因可以高效表达。为了筛选出转入了两种质粒的受体菌,应在筛选平板培养基中添加________,整个实验过程应保持________操作。
(4)PCR反应中引物的设计非常关键,据图分析,扩增H基因时应选择的一对引物是________。
A.引物Ⅰ:···GGGAATTC···;引物Ⅱ:···CTCATATG···
B.引物Ⅰ:···GAATTCCC···;引物Ⅱ:···CATATGAG···
C.引物Ⅰ:···GGAAGCTT···;引物Ⅱ:···AAGCTTCC···
D.引物Ⅰ:···CTCATATG···;引物Ⅱ:···AAGCTTAAGCTT···