回答下列（一）、（二）小题。

(一）某研究小组欲用苹果汁为原料，利用发酵瓶制作果酒和果醋，请分析回答：

(1)将苹果汁放入发酵瓶，要预留约________的空间。为得到酒精和糖含量较高的果酒，可在果汁中加入一定比例的______。若发酵瓶内持续无气泡产生，则需加入更多的_______，使发酵作用尽快发生。

(2)变酸的果酒表面有一层醋杆菌形成的菌膜，若要在该菌膜中筛选高表达量的醋杆菌菌株，可通过获得_______的方法来分离筛选。若要统计获得菌种的数目，则常采用_________法。对获得的优质醋杆菌菌种常用划线法接种在固体培养基______上低温保存。

(3)下图是果酒和果醋的发酵装置，关于果醋发酵叙述错误的是_______

A.发酵前，瓶内酒—冰混合物的pH需调至7.0

B.发酵过程中，充气口要适时适量充气

C.发酵过程中，排气口排出醋酸发酵产生的CO₂

D.发酵完成后，出料口的pH值不再减少

 (二）请回答杂交瘤技术和单克隆抗体制备的有关问题。

(1)杂交瘤技术制备单克隆抗体时，利用一定的物质，如生物诱  导剂_____作介导，使经免疫的小鼠脾细胞与________细胞融合，筛选出融合的细胞再进行细胞的______培养，获得纯系细胞，同时还要进行________检验，以保证获得的是所需的特定杂交瘤细胞。

(2)有关杂交瘤细胞体外培养的叙述，正确的是________

A.用固体培养基培养          B.用滋养层细胞支持生长

C.能进行传代培养            D.需要对细胞进行研磨破碎获得产物

(3)现在欲利用基因工程技术生产单克隆抗体，科研小组将与抗体形成有关的关键基因通过噬菌体导人到受体细胞，该技术的核心步骤是______________,噬菌体是这些关键基因的___________。

现代生物技术在生物育种方面发挥越来越重要的作用。回答下列问题：

（1）“白菜—甘蓝”是通过________技术培育而来的杂种植株，培育大致流程：首先，利用酶解法制备________；其次利用________（PEG）作为诱导剂来诱导细胞融合；最后，利用组织培养技术获得完整植株。与普通白菜相比，“白菜—甘蓝”具有________等优点。

（2）番茄的抗冻性较差，可利用转基因技术培育抗冻番茄。该技术需用到的非酶工具是________；该技术的核心步骤是________。

（3）为了快速繁殖高产奶牛，可采用________技术，该技术的优势是充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力。在该项技术中，供体的主要职能是________。

[生物——选修3：现代生物科技专题]

研究发现，人体内的N基因是正常基因，无N基因的人会患严重肾病而早年夭折，科学家为治愈此病进行了相关探索。下图是对标记基因(绿色荧光蛋白基因，用GFP表示) 和N基因的酶切过程。请据图分析回答下列问题：

(1)切割基因时选用不同限制酶的目的是_______。切割完成后，需用DNA连接酶将两基因连接成GFP—N融合基因(以下称融合基因)，该融合基因的上游基因为______________。

(2)若用质粒做运载体，需用图中的______酶切割质粒。在构建的融合基因表达载体中，调控融合基因转录的结构为________。

(3)将融合基因表达载体包埋在由磷脂双分子层构成的脂质体内并转染ES细胞，融合基因表达载体进入ES细胞的方式为_______________。用激光激发ES细胞并用荧光显微镜观察，可确定细胞内有________现象的ES细胞转染了融合基因。

(4)ES细胞在功能上具有___________，当培养在________上时，细胞只分裂不分化。将整合了融合基因的ES细胞，在培养液中培养并加入相应的分化诱导因子后，ES细胞进行____________，最终形成正常的肾小球足突细胞，可用于该肾病的治疗。

【生物—选修3：现代生物科技专题】

(一)下面是关于获得能产生人干扰素大肠杆菌的问题。请回答：

（1）用限制性核酸内切酶识别人干扰素基因和质粒中一段特定的________并切割，然后用________连接形成重组DNA。该质粒是一种含抗生素抗性基因的____（从以下答案中选择：A．双链环状 B．单链环状 C．双链线状 D．单链线状）核酸分子。

（2）将含人干扰素基因的重组质粒导入到大肠杆菌，经含有________的培养基筛选等过程，最终获得能产生人干扰素的大肠杆菌。

(二)某农户建立了小型的“蔬菜－鸡、猪－沼气”系统。请回答：

（1）这一系统属于人工干预下的庭院生态系统，其生物组成成分包括生产者、消费者和________。在分析该生态系统的经济效益时，除了考虑这三者的投入与产出外，还要考虑________的投入。

（2）在该生态系统中，利用发酵技术产生沼气开发生物能属于_____的生态工程。

A．生物多样性保护和持续利用

B．节水和废水处理与利用

C．山区小流域综合治理与开发

D．洁净及可再生能源系统组合利用

菊天牛是菊花的主要害虫之一。科研人员将抗虫基因转入菊花，培育出抗虫菊花。下图是获得转基因菊花的技术流程。请据图回答：

（注：卡那霉素抗性基因（kan^R）作为标记基因，菊花叶片对卡那霉素高度敏感）

（1）质粒是基因工程中最常用的载体，其化学本质是_        __，此外还可用                 作为载体。

（2）下图限制酶M和N切割产生的黏性末端是__ ____ ____ __，连接它们所需要的基本工具是__              ________。

（3）为了促进土壤农杆菌吸收重组质粒，可用__  _____处理，使其处于感受态。

（4）将愈伤组织转移到添加一定浓度植物激素、营养物质以及___________和  ________ 的固体培养基中，在适宜条件下进行培养，筛选转基因菊花。

（5）用PCR方法检测转基因菊花是否含有目的基因时，需根据抗虫基因（目的基因）两端的部分碱基序列设计特异引物，若其中一种引物共用了31个，则目的基因最多扩增了__  __次。

（6）将转基因菊花嫩茎及叶片与人工饲料以适当比例混合后饲喂菊天牛2龄幼虫，实验结果如下表所示。

请据表回答：

①对照组应饲喂等量的__                ________                __。

②据表分析，__               ____            __差异显著，说明转基因菊花对菊天牛2龄幼虫有较强的毒杀作用。

菊天牛是菊花的主要害虫之一。科研人员将抗虫基因转入菊花，培育出抗虫菊花。图11是获得转基因菊花的技术流程，请据图回答：

（1）为了促进土壤农杆菌吸收重组质粒，可用______________处理土壤农杆菌，使其处于感受态。

（2）将重组质粒导入土壤农杆菌的目的是利用农杆菌能够_______________________的特点，使目的基因进入受体细胞中，并插入到菊花细胞的_______________上，最终形成转基因植株。

（3）将愈伤组织转移到添加一定浓度植物激素和_____________的培养基中，在适宜条件下进行培养，筛选转基因菊花。

（4）用PCR方法检测转基因菊花是否含有目的基因时，需根据________________的核苷酸序列设计特异引物，以________________为模板进行第一轮扩增。

（5）将转基因菊花嫩茎及叶片与人工饲料以适当比例混合后饲喂菊天牛2龄幼虫，实验结果如下表所示。

①对照组应饲喂等量的_______________________________。

②据表分析，______________________________差异显著，说明转基因菊花对菊天牛2龄幼虫有较强的毒杀作用。

根据基因工程的有关知识，回答下列问题：

（1）cDNA文库属于     基因文库,其构建方法是：用某种生物发育的某个时期的       通过反转录产生cDNA片段,与        连接后储存在一个受体菌群中.

（2）切割DNA分子的工具是           ，它能使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的            断开，形成黏性末端或平末端。

（3）基因工程中所使用的DNA连接酶有两类。既可以“缝合”黏性末端，又可以“缝合”平末端的是       DNA连接酶。

（4）将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是           ；如果受体细胞是大肠杆菌,需要用          处理细胞,使之成为感受态细胞,才能吸收DNA分子.

①骨髓瘤细胞可以产生抗体，但不能无限增殖

②骨髓瘤细胞可以无限增殖，但不能产生抗体

③B淋巴细胞可以产生抗体，但不能无限增殖

④B淋巴细胞只有与骨髓瘤细胞融合才能产生抗体

 35、如下图所示为农作物新品种的育种方式：

（1）图示育种方式涉及到的生物工程技术有：____________、______________．

（2）②③过程分别为：______________、  ___________．

（3）⑤过程中常用的载体是____________；⑤过程表示的基因操作步骤是___________________________________________．

（4）上述育种与传统杂交育种相比，突出优点是__________________________．

（5）微型繁殖培育无病毒草莓苗时，一般选取___________作为外植体．

回答下列与生物工程有关的内容：

（1）基因工程技术中，　              　是将目的基因导入植物细胞最常用的方法．

试管婴儿技术是指采用人工方法将卵子与精子从人体内取出并在体外受精，发育成胚胎后，再移植回母体子宫内，以达到受孕目的一种技术．顺受受精必须满足两个条件：来自父方的精子要进行　        　；来自母方的卵母细胞要培养促进成熟（或培养至 II中期）．　       　（填生物技术）是培育试管婴儿最后一道工序．一般来说，该技术操作比较合适的时期是　                          ．与传统方法生成的抗体相比，单克隆抗体逊主要的优点是特异性强、灵敏度高、　  ．在癌症治疗时，把抗癌细胞的单克隆抗体跟　      　相结合，制成的“生物导弹”，借助单克隆抗体的　            　作用，将药物带到癌细胞位置，将其在原位杀死．