【生物——选修1生物技术实践】

由于酵母菌利用淀粉的能力很弱，有人将地衣芽孢杆菌的α-淀粉酶基因转入酵母菌中经筛选得到了可高效利用淀粉的工程菌菌种（过程如图甲所示）。

(1)图甲中，过程①需要的酶有_____________。为达到筛选目的，平板内的固体培养基应以____________作为唯一碳源。②.③过程需要重复几次，目的是______________。

(2）某间学尝试过程③的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图乙所示。该同学的接种方法是_____________________；推测该同学接种时可能的操作失误是______________。

(3）以淀粉为原料，用工程酵母菌和普通酵母菌在相同的适宜条件下密闭发酵，接种________菌的发酵罐需要先排气，其原因是__________________________。

（4）用凝胶色谱法分离α一淀粉酶时，在色谱柱中移动速度较慢的蛋白质，相对分子质量较________。

[生物——选修3：现代生物科技专题]

基因工程在农业中的应用发展迅速，基因可导入农作物中，用于改良该农作物的性状。通过多重PCR技术可扩增并检测转基因农作物的外源基因成分。多重PCR是在一个PCR反应体系中加入多对引物，针对多个DNA模板或同一模板的不同区域，扩增多个目的基因的PCR技术。请回答：

（1）我国科学家将Bt毒蛋白基因、鱼的抗冻蛋白基因、控制果实成熟的基因导入农作物，可获得     、     、延熟的转基因作物。

（2）引物是根据      的一段核苷酸序列合成的，每种基因扩增需要一对引物的原因是                      。下表是A、B、C三种基因的引物，据表分析，引物特异性主要体现在                         。

  （3）PCR过程中温度从90℃降到55-60℃的目的是                  。

（4）检测人员通过多重PCR技术确定农作物中是否含有A、B、C三种转基因。将A、B、C三种基因和待测的农作物基因样品进行PCR，扩增后的产物再进行电泳，结果如图。据图分析：含有三种转基因的农作物是    ，判断依据是         。

  （5）与PCR技术相比，多重PCR技术的优势是

【选修3—现代生物科技专题】

   2016年日本动物学家培育出转基因“绿光猴”，其培育过程为：将能编码绿色荧光蛋白基因嵌入长尾猴的卵子中，使其受精，所生下的小猴受到紫外线照射时就成了全身发绿的“绿光猴”。

请据此回答下列问题：

（1）如果对已有的荧光蛋白基因进行大量扩增，需要用________方法，该方法的原理是DNA复制，这项技术需要用到________酶，该酶需从________的末端开始催化子链的延伸。

（2）绿色荧光蛋白基因需要构建成________之后，用________方法将其导入到长尾猕猴的卵子中。

（3）受精卵在体外培育成________后再利用________技术将其导入到受体猕猴的子宫中继续发育，检测所出生的猕猴是否为“绿光猴”通常用________方法。

【生物-选修3：现代生物科技专题】

pBV220质粒是被广泛应用的大肠杆菌载体，结构如下图所示。其中P_RP_L是启动子，rrB是基因转录终止信号，Ampr是氨苄青霉素抗性基因，ori是质粒复制起点，EcoRⅠ、HindⅢ、BamHⅠ、PstⅠ均为限制性内切酶。回答下列问题：

（1）从图中可看出，pBV220作为运载体具备的条件有               。

（2）将目的基因与此质粒构建基因表达载体时，通常用图中           两种限制酶切割此质粒，其优点是                     。用这两种酶可以切开

此质粒的    个磷酸二酯键，并且会          （填“消耗”或“产生”）同样数量的水分子。

（3）将构建好的基因表达载体导入大肠杆菌前，需用    处理大肠杆菌，使之成为       细胞，以提高转化效率。目的基因是否成功导入大肠杆菌，

可采用          进行检测。

[生物——选修3：现代生物科技专题]

基因工程技术包括一系列的分子生物学操作步骤。请回答下列问题：

（1）基因工程操作的核心步骤是                              。

（2）cDNA文库的构建方法为                   。

（3）限制酶、DNA连接酶和              是基因工程的基本操作工具。其中限制酶的特点是                                    。

（4）Mullis教授因发明PCR技术获1993年诺贝尔奖，PCR技术中需要的酶是          ，若PCR进行30轮循环，理论上可获得    个基因片段。

（5）将目的基因导入动物受体细胞的方法是                    。

（6）周光宇教授提出的花粉管通道法为我国的转基因抗虫棉作出重要贡献。请写出分子水平检测抗虫棉基因是否表达的方法        及个体水平鉴定的方法            。

[生物——选修3：现代生物科技专题]

科学家利用土壤农杆菌转化的方法(农杆菌中Ti质粒上T－DNA片段能转移到植物细胞中)，将Bt毒蛋白基因导入棉花细胞中，获得抗棉铃虫的转基因棉花植株。回答下列问题：

(1)T－DNA分子中的两条单链靠____________键维系成双链结构。限制酶能将特定序列的两个核苷酸之间的磷酸二酯键切开，形成____________末端。

(2)利用PCR技术扩增Bt毒蛋白基因时，需要在反应体系中添加的物质有4种脱氧核苷酸、模板DNA、____________和____________。

(3)为了获取重组质粒，将切割后的Ti质粒与Bt毒蛋白基因混合，并加入____________酶。重组质粒中抗生素抗性基因的作用是____________。

(4)利用农杆菌感染棉花受体细胞的过程中，需添加酚类化合物，目的是_______________________。

【生物——选修3：现代生物科技专题】

菊天牛是菊花的主要害虫之一，为达到防治目的，科研人员通过转基因技术培育出了抗虫菊花。请回答下列问题：

（1）可用处理土壤农杆菌，使其处于以便吸收重组质粒。

（2）将重组质粒导入土壤农杆菌的目的是利用农杆菌能够的特点，使目的基因进入受体细胞中，并插入到菊花细胞的上，最终形成转基因植株。

（3）用PCR方法检测转基因菊花是否含有目的的基因时，需根据的脱氧核苷酸序列设计特异引物，以为模板进行第一轮扩增。

（4）将转基因菊花嫩茎及叶片与人工饲料以适当比例混合后饲喂菊天牛2龄幼虫，实验结果如下表所示：

①对照组应饲喂等量的菊花嫩茎及叶片与人工饲料混合物。

②据表分析，实验组与对照组差异显著，说明转基因菊花对菊天牛2龄幼虫有较强的毒杀作用。

【加试题】回答下列（一）（二）小题

（一）随着社会的发展，石油产品的使用越来越多，石油烃污染也越来越严重。为了筛选出分解石油烃能力强的微生物，人们不断地进行研究。下图为获取能分离出分解石油烃的微生物的土壤样品后的研究过程，请回答有关问题：

（1）获取土壤样品的取样地点最好选在  。为了能有效地分离出分解石油烃的微生物，过程①④所用的选择培养基只能以石油烃作为唯一碳源,其原因是  。

（2）根据⑤平板上生长的菌落，对④进行接种采用的方法是  ，若发现在⑤中无法区分菌落，可以将图中③取出的菌液    。

（3）纯化菌株时,通常使用的划线工具是  。采用  方法对其进行灭菌。划线的某个平板培养后,第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落,第二划线区域所划的第一条线上无菌落,其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误是  （写出一点即可）。

（二）毛角蛋白Ⅱ型中间丝（KIFⅡ）基因与绒山羊的羊绒质量密切相关。获得转KIFⅡ基因的高绒质绒山羊的简单流程如图。

（2）在过程②中，用  酶处理将皮肤组织块分散成单个成纤维细胞。把一个单细胞从群体中分离出来单独培养，使之繁衍成一个新的细胞群体的技术，叫细胞克隆。未经克隆化的细胞系具有  性。由于人们对动物细胞所需营养物质还没有完全搞清楚，因此在培养细胞时需在培养基中加入一定量的  ，在培养过程中应将培养瓶置于  培养。

（3）若要获得多只相同的转基因山羊，可对图中早期胚胎进行  后进行胚胎移植。

（4）下列有关转基因山羊培育过程的叙述，错误的是  。

A.图中重组细胞的细胞核来自导入目的基因的细胞

B.重组细胞最初分裂时开始进行DNA复制和基因的转录

C.将早期胚胎（如早期囊胚）植入到代孕母羊的输卵管或子宫角部位

D.如果KIFⅡ基因的序列是已知的，则可用化学方法合成或用聚合酶链式反应扩增该基因

[生物——选修3：现代生物科技专题]

科学家通过利用PCR定点突变技术改造Rubisco酶基因，提高了光合作用过程中Rubisco酶对CO₂的亲和力，从而显著提高了植物的光合作用速率。请回答下列问题：

（1）PCR过程所依据的原理是________，利用PCR技术扩增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成________；扩增过程需要加入________酶。

（2）启动子是一段有特殊结构的DNA片段，具作用是________。目的基因能在不同生物体内正常表达原来的蛋白质，说明整个生物界________。PCR定点突变技术属于________的范畴。

（3）可利用定点突变的DNA构建基因表达载体，常用________将基因表达载体导入植物细胞，还需用到植物细胞工程中的________技术，来最终获得转基因植物。