1．生物乙醇是以生物为原料生产的可再生能源。我国利用农作物废弃物（秸秆）生产乙醇，其技术流程为：纤维素酶分解→酵母菌发酵→蒸馏→成品。纤维素酶可以从能分解纤维素的细菌培养液中提取。某同学设计了从土壤中分离纤维索分解菌的实验流程：土壤取样→选择培养→梯度稀释→鉴别培养。请分析回答下列问题：

（1）最好选择       环境采集土样。

（2）配置培养基时，各种成分在熔化后分装前必须进行       ，接种前要进行       。

在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在无菌条件下进行。在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的倒平板操作时，平板冷凝后，应将平板       放置，这样做的目的是       。

（3）以下是A、B两种培养基配方：

A培养基配方：

B培养基配方：

如果要分离提纯土壤中的纤维素分解菌，应选择   （填编号）培养基配方，从功能看该培养基属于___   ____培养基。该培养基能增加样品中纤维素分解菌的浓度，其原理是                  。

（4）为了鉴别纤维素分解菌和进一步纯化菌种，可以在鉴别培养基中加入       ，将筛选获得的菌液稀释后用      法接种到鉴别培养基上，然后挑选产生     的菌落作为菌种进行扩大培养。

（5）乙醇是酵母菌的发酵产物，发酵时酵母菌直接利用的物质是               。

2.科学家从某些能无限增殖细胞的细胞质中分离出无限增殖调控基因（prG），该基因能激发许多动物细胞分裂，这为单克隆抗体的制备提供了更为广阔的前景。请回答下列问题：

（1）利用细胞融合技术制备单克隆抗体的过程中，促进动物细胞融合常用的诱导剂是       ，植物体细胞杂交在细胞融合之前要用           处理。

（2）利用细胞融合技术制备单克隆抗体时有两次筛选，第1次筛选的目的是       ，第2次筛选的目的是           。

（3）有人提出，可以直接通过基因工程导入该调控基因来制备单克隆抗体，其思路如图所示。请回答下列问题：

①．酶A是指       ，酶B是指       。

②．对已导入重组质粒的Ⅱ进行“检测”的目的是         ；题目中Ⅱ所指的细胞是       ，Ⅲ所9指的细胞具有的特点是           。

（4）也有人提出用细胞核移植技术构建重组细胞来生产单克隆抗体，试用相关的图示及文字表示该过程：（图中·和▲代表细胞核，○代表细胞质）

(选修三)毛角蛋白Ⅱ型中间丝(KIFⅡ)基因与绒山羊的羊绒质量密切相关。获得转KIFⅡ基因的高绒质绒山羊的简单流程如图。

(1)过程①中最常用的运载工具是　　　　,所需要的酶是限制酶和　　　　。

(2)在过程②中,用　　　　处理将皮肤组织块分散成单个成纤维细胞。在培养过程中,将成纤维细胞置于5% CO₂的气体环境中,CO₂的作用是　　　　　。

(3)在过程③中,用　　　　处理以获取更多的卵(母)细胞。成熟卵(母)细胞在核移植前需要进行　　　　处理。

(4)从重组细胞到早期胚胎过程中所用的胚胎工程技术是　　　　。在胚胎移植前,通过　　　　技术可获得较多胚胎。

（选修一）从自然菌样筛选较理想的生产菌种的一般步骤是：采集菌样→富集培养→纯种分离→性能测定。

（1）不同微生物的生存环境不同，获得理想微生物的第一步是从适合的环境采集菌样，然后再按一定的方法分离、纯化。培养嗜盐菌的菌样应从　　　　　　　环境采集。

（2）富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境条件，使其在群落中的数量大大增加，从而分离出所需微生物的培养方法。对产耐高温淀粉酶微生物的富集培养应选择　　　　　的培养基，并在　　　　　　　条件下培养。

（3）下面两图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图解，请分析接种的具体方法。 

获得图A效果的接种方法是　　　　　　　　，获得图B效果的接种方法是　　　　　　　　。

（4）配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行　　　　　，接种前要进行　　　　　，在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在　　　　　　　条件下进行。

MRSA菌是一种引起皮肤感染的“超级细菌”，对青霉素等多种抗生素有抗性。为研究人母乳中新发现的蛋白质H与青霉素组合使用对MRSA菌生长的影响，某兴趣小组的实验设计及结

果如下表。

请回答下列问题：

(1)青霉素的用量是该实验的________变量。应保持________，目的是________。

(2)第2组和第3组对比表明MRSA菌对________有抗性，________能杀死MRSA菌。

(3)蛋白质H不是新型抗生素，理由是________。

(4)测定培养液中MRSA菌的活菌数量，不宜在显微镜下用________直接计数，适合选用________法进行计数，原因是________直接计数获得的结果包含活的MRSA菌和死的MRSA菌的总数，而用涂布法进行计数，计数的是菌落数，一个菌落一般来源于稀释液中的一个活菌。

40 [生物一选修3  现代生物科技专题]

下图为培育转基因山羊生产人β酪蛋白的流程图。

请回答下列问题：

(1)获取过程①所用的人β-酪蛋白基因时，可先提取人体细胞中的________，以其作为模板，在________的作用下台成________。

(2)重组人β-酪蛋白基因表达载体中必须有启动子，是________识别和结合的部位。

(3)过程②可选用________阶段的胚胎进行移植。

(4)过程③可使用________技术扩大转基因山羊群体，除此之外，还可以采取的措施有________。

(5)过程④人β-酪蛋白基因在细胞内表达的场所为________。

（1）用稀释涂布平板法可以纯化三孢布拉氏霉菌，进行梯度稀释时一般是将1 mL菌液移入盛有________mL无菌水的试管中。常用_____________法进行活菌计数，其原理是培养基表面的一个菌落来源于______________________。但统计的菌落数往往__________（填“多于”或“少于”）稀释液中的活菌数。

（2）不同的材料选用的提取方法不同，根据胡萝卜素具有_________________________的特点，常用_______法提取胡萝卜素，其效率主要取决_________________。

（3）图为提取的胡萝卜素样品通过纸层析进行鉴定的结果，从图中分析可知，色带________为β­胡萝卜素。出现样品2的结果，可能原因是在操作过程中①________(A．萃取温度高，时间长　B．干燥温度高，时间长)；②________(A．未经浓缩蒸馏　B．点样太快，样点小)。

【选修3现代生物科技专题】继哺乳动物乳腺生物反应器研发成功后，膀胱生物反应器的研究也取得了一定进展。最近，科学家培养出一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中，请回答下列问题。

（1）人的生长激素基因可以从人类cDNA文库中获取，建立该基因文库时通常需要从人的_________________细胞中提取全部的_____________，通过__________方法获取cDNA，并将其导入________________中储存。

（2）人的生长激素基因进入小鼠细胞内，且能维持稳定和表达的过程称为________。常用方法是_______________________。基本操作是：首先提纯含有目的基因的_________________。并将其转入________细胞中。经过早期胚胎培养后再移植到雌性动物的子宫或输卵管中使其发育。

（3）若要一次获得多只相同的转基因小鼠，可采用_________技术，该技术的最后一道工序是___________________。

（1） 筛选微生物 L时，用            作为培养基中的唯一氮源，加入            凝固剂。接种时应采用           方法

（2） 下列对尿素溶液进行灭菌的最适方法是           灭菌

   A高压蒸汽     B 紫外灯照射      C 70%的酒精侵泡液      D过滤

（3）对微生物L进行扩大培养时宜采用            培养基，接种时采用           方法对接种环进行灭菌

（4）脲酶宜采用共价偶联法进行固定化，可通过检测固定化脲酶的           确定其应用价值。除此法外，酶的固定化方法还包括           及交联法等。

（二）下面是关于获得能产生人干扰素大肠杆菌的问题。请回答：

（5）用限制性核酸内切酶识别人干扰素基因和质粒中一段特定的          并切割，然后用           连接形成重组DNA。该质粒是一种含抗生素抗性基因的          核酸分子

 A.双链环状  B.单链环状  C.双链线状  D.单链线状

（6）将含有人干扰素基因的重组质粒导人到大肠杆菌，经含有           的培养基筛选等过程，最终获得能产生人干扰素的大肠杆菌。

胡萝卜是生活中常见的植物，根据所学知识回答下列有关问题。

（1）胡萝卜的韧皮部细胞中含有核酸的细胞器有&;      ，胡萝卜植株叶肉细胞的叶绿体和线粒体中，部分蛋白质由细胞核基因指导合成，说明二者具有       （选填“自主”、“半自主”）细胞器的特点。

（2）从胡萝卜中提取胡萝卜素常用的方法是        法，用这种方法提取胡萝卜素常选用石油醚作为溶剂。

（3）一般情况下，提取胡萝卜素时，提取效率与原料颗粒的含水量成       比。

（4）对提取的胡萝卜素粗品进行鉴定时需要用         对照。

（5）用胡萝卜韧皮部进行植物组织培养所用的MS培养基通常要加入一定量的       、        等植物激素，以启动外植体的细胞分裂、脱分化和再分化。这两种激素的使用先后顺序和     都会影响植物组织培养的结果。

40 【生物———选修 3 :现代生物科技专题】( 15 分)

下图是人体免疫物质的培养方法，①~⑥ 表示不同的过程，请回答。

（1）方法 1 中，细胞 A 应具备的特点是      。体外培养细胞 Y 需要满足以下条件：           、添加了血浆（或 “血清”）培养基、适宜温度与pH、         的气体环境等。

（2）方法 2 中，通过④得到的目的基因与细胞 B 中原有基因            （一定/不一定）相同，⑤过程必须用到的工具酶有           ，结构甲的组成必须包括          及目的基因等。

（3）若用棉花生产抗体 2，⑥过程的受体细胞应选用                   ，经过一系列的过程得到再生植株。要确认该抗体基因是否在再生植株中正确表达，通常采用                  法，在田间试验中检测植株是否含有该种抗体。

(一)请回答与“泡菜的腌制”实验有关的问题：

(1)腌制泡菜的基本过程是：将蔬菜、盐水、糖、白酒等放入洗净的菜坛，混合均匀。坛口加盖后用________封好。如果希望发酵快些，可将蔬菜在________中浸1分钟。加入的白酒，既可作为调味剂增加醇香感，还具有________的作用。

(2)腌制泡菜过程中起作用的微生物主要是乳酸菌和________。为了分离某种美味泡菜汁中的乳酸菌作为菌种，可将稀释后的泡菜汁用________法快速接种到平面培养基上，立即将培养皿________(A．正放于无氧培养箱 B．正放于有氧培养箱 C．倒置于无氧培养箱 D．倒置于有氧培养箱)中培养。

(二)生物工程技术为人们获得需要的生物新品种或新产品提供了便利。请回答：

人的生长激素基因重组DNA→受精卵转基因牛

抗虫基因→重组Ti质粒→细菌M棉花细胞抗虫棉

(1)在培育转人生长激素基因牛的过程中，①过程需要的工具酶是________。②过程中，应对代孕母进行________处理，以便早期胚胎的着床。若在②过程中培养到早期胚胎阶段采用________技术。可培育出多头相同的转基因牛。

(2)在抗虫棉培育过程中，重组Ti质粒先导入细菌M，细菌M的名称是________，③过程中的棉花细胞常采用愈伤组织细胞而不采用叶肉细胞，原因是愈伤组织细胞________，④过程中，愈伤组织细胞可通过________技术培养成单个胚性细胞，胚性细胞再分化形成的胚状体可发育成植株。

（1）图中D过程的方法称为_________。A过程所需的酶是_________和_________。

（2）图中重组质粒，除了含有目的基因外，还必须有___________、___________以及___________；目的基因能否遗传给后代常采用的检测方法是                                             。

（3）E过程需要运用__________技术，经过__________、___________过程最终形成植株，其依据的原理是__________。

【加试题】抗疟药青蒿素挽救了数百万人的生命。中国女科学家屠呦呦由于在青蒿素研发所做的重大贡献荣获2015年诺贝尔医学奖。青蒿中青蒿素的含量很低，科研工作者一直致力于提高青蒿素含量的研究。某研究小组给青蒿转入青蒿素合成的关键基因fps，通过该基因的过量表达来提高青蒿素的产量，其过程如下图所示（注：农杆菌中Ti质粒上只有T—DNA片段能转移到植物细胞中）。

（1）提取青蒿的总RNA，在        酶作用下获得青蒿的DNA片段。

（2）如果fps基因的基因序列已知，我们可以通过          合成目的基因或者用PCR扩增目的基因；如果fps基因的基因序列未知，可以从            获取目的基因。

（3）过程①需用同种                   酶对含fps基因的DNA和Ti质粒进行酶切。

（4）过程③中将青蒿细胞与农杆菌混合后共同培养，旨在让            进入青蒿细胞；除尽农杆菌后，还须转接到含卡那霉素的培养基上继续培养，目的是            。

（5）下列有关基因工程的叙述正确的是（   ）

A．大肠杆菌质粒上具有控制质粒DNA转移的基因

B．基因工程的基本原理是让目的基因在宿主细胞中稳定存在和高效复制

C．用氯化钙处理植物细胞，可增加细胞壁的通透性

D．将乙肝抗原导入酵母菌可以获得能生产乙肝疫苗的工程菌

（6）进行组织培养的一般培养基为MS培养基，该培养基由大量元素、微量元素和   组成。MS培养基含有十几种化合物，配制不方便也难称量，可将培养基的各种成分扩大5—10倍分别称量，配成       ，用时稀释。

（7）过程④要在        培养基中进行培养，使之长出较多的丛状苗。

（8）取出试管苗，在适宜的光照、温度和80%以上的         等条件下进行锻炼，再转移至土中培养（定植）。

（9）在植物组织培养中关于消毒和灭菌操作的叙述，正确的是（   ）

A．操作者的双手可以不消毒      B．外植体可以用酒精消毒

C．镊子等器械需用酒精灭菌      D．接种后培养基需用高压蒸汽灭菌