（1）农杆菌中的Ti质粒上T-DNA具有__________________________________的特点。图中D过程的方法称为____________________。A过程所需的酶是_____________________________。

（2）图中重组质粒，除了含有目的基因外，还必须有________________________和复制原点；培育转基因玉米成功的标志是____________________________；目的基因能否遗传给后代常采用的检测方法是_______________。

我国目前临床使用的乙肝疫苗大多为基因工程疫苗,其有效成分是乙肝表面抗原蛋白。下图是将乙肝表面抗原基因转移到烟草细胞内生产乙肝疫苗的示意图,请据图回答下列问题。

（1）过程①表示             。为了使目的基因正常表达，其首端必须有       ，它是RNA聚合酶识别和结合的部位。若限制酶切出了平末端，要选择           进行连接。（填“E•coli DNA连接酶”或“T4 DNA连接酶”）

（2）图中将乙肝表面抗原基因导入烟草细胞的方法称为            。它是利用运载体Ti质粒中含有__________序列，可以将目的基因整合到宿主细胞的染色体上。

（3）图中将乙肝表面抗原基因导入烟草细胞后，长芽、生根的过程中采用了细胞工程的_______________技术，该技术的原理是                    。

（4）检测烟草植株细胞中乙肝表面抗原基因是否合成出乙肝表面抗原蛋白，采用的方法是            。

科学家将人的生长激素基因与大肠杆菌的DNA分子进行重组，并成功地在大肠杆菌中得以表达．但在进行基因工程的操作过程中，需使用特定的限制性核酸内切酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选．已知限制性核酸内切酶I的识别序列和切点是-G↓GATCC-，限制性核酸内切酶II的识别序列和切点是-↓GATC-，据图回答：

(1)过程①表示的是采取             的方法来获取目的基因。

(2)根据图示分析，在构建重组质粒过程中，应用限制性核酸内切酶        （Ⅰ或II）切割质粒，用限制性核酸内切酶          （Ⅰ或II）切割目的基因。

(3)人的基因之所以能与大肠杆菌的质粒进行重组，原因是                     。

(4)将重组质粒导入细菌B之前，要将细菌B放入一定浓度的         溶液中处理，目的是                                。

(5)要筛选出含目的基因的受体细胞应将大肠杆菌培养在含           的培养基上

(6)人体的生长激素基因能在细菌体内成功表达是因为                    ，写出目的基因导入细菌中表达的过程                        。

下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tet^R表示四环素抗性基因，amp^R表示氨芐青霉素抗性基因,BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ直线所示为三种限制酶的酶切位点。据图回答:

(1)获取目的基因的主要途径包括从自然界已有的物种中分离和                        。

(2)获取目的基因还可以使RNA 形成cDNA。获得目的基因可以通过            技术大量扩增。图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用 限制酶同时切割载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含                         的培养基上进行。 

(3)图中质粒除了所示结构以外，还必须含有 才能构成一个完整的基因表达载体。能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是图中的         。 

(4)过程①可采用的操作方法是 。 ②过程表示        。 

(5)为检测人乳铁蛋白是否成功表达,可采用               技术。 

【生物——选修3：现代生物科技专题】

I．科学家将人的生长激素基因与pBR322质粒进行重组，得到的重组质粒导入牛的受精卵，使其发育为转基因牛，再通过细胞工程培育为转基因克隆牛。pBR322质粒含有两个抗生素抗性基因和5个限制酶切点(如图2)。将重组质粒导入大肠杆菌，并成功地在大肠杆菌中得以表达。请据图回答问题。

(1)图1中显示的人的生长激素基因是通过人工合成的，图中①过程需要的酶是__________。该过程所依据的碱基互补配对原则是___________________________(用字母和箭头表示)。

(2)图1中的mRNA是从人体的_______________细胞中获取。

(3)重组质粒形成与否需要鉴定和筛选，方法是将重组质粒的DNA分子导入大肠杆菌，通过含抗生素的培养基进行培养，观察大肠杆菌的生长、繁殖情况进行判断，如图3所示：

如果受体菌在培养基A上能生长、繁殖形成菌落，而不能在培养基B上生长、繁殖，则使用限制酶a的切点是图2中的___________________________________，即目的基因插入了___________________中。

II．SRY基因是Y染色体上的性别决定基因，SRY—PCR胚胎性别鉴定技术能准确鉴定早期胚胎性别，应用前景十分广阔。请回答相关问题：

用SRY—PCR法鉴定胚胎性别需要充足的材料并保证被测胚胎的活性，因此，首先从被测胚胎中取出几个细胞，提取_______________，然后用________________的一段脱氧核苷酸序列作引物，进行PCR扩增。鉴定扩增产物，制备具有SRY基因特异性的探针，出现阳性反应者，胚胎为__ ___性。

[生物一选修3现代生物科技专题]

   人类是乙型肝炎病毒的唯一宿主，接种乙肝疫苗是预防乙肝病毒感染的最有效方法。乙肝基因工程疫苗的生产和使用过程如下：

（1）从图可知，该目的基因的具体功能是________。目的基因在人体细胞和大肠杆菌细胞中均能表达出相同的抗原，这是因为________原因所致。

（2）若要迅速获取大量的目的基因，常用的技术是（写中文全称）________。过程①合成重组质粒需要限制酶，还需要________。过程②常需要________处理大肠杆菌细胞，促使转化完成。

（3）要形成有效的重组质粒，选择适当的限制酶很重要，图1示意大肠杆菌质粒的相关基因与限制酶切点；图2示意有关限制酶在DNA分子中的具体切点。

要成功转入目的基因，可有两种选择限制酶的方案，分别是________或________。其中有一种方案重组效率较高，可以避免出现自身环化。

[生物——选修3：现代生物科技专题]

（1）步骤①中，利用PCR技术扩增干扰素基因时，设计引物序列的主要依据是                  。科研人员还在两种引物的一端分别加上了                                    和            序列，以便于后续的剪切和连接。

（2）过程②所构建的基因表达载体中未标注出的必需结构还有                ，过程③中需先用        处理农杆菌以便将基因表达载体导入细胞。

（3）过程④中，科研人员提取愈伤组织细胞的RNA后，先通过               过程获得DNA，再进行PCR扩增，若最终未能检测出干扰素基因，其可能原因是                                    。

（4）治疗中发现，用于口服的α-干扰素在胃中会受到一定程度的破坏影响其功效，需要利用                        技术加以改造，以达到满意效果。

[生物—选修3：现代生物科技专题]

科学家利用土壤农杆菌把编码霍乱毒素的无毒性β链的基因转移到苜蓿细胞，再将其培养成幼苗，食用这种苜蓿苗后，霍乱毒素β链很快被喉、肠胃等部位的分泌性粘液细胞吸收，刺激特异性抗体的大量产生，使机体获得对霍乱的免疫．其具体过程如下：

（1）构建重组DNA分子常用的工具酶是________、________，基因工程中构建基因表达载体的目的是________。

（2）图中过程②采用的方法是________，Ti质粒上有一个tms片段能促进生长素的大量合成，在对Ti质粒改造时要将该片段去除，其原因是________。

（3）该实验中将农杆菌转入苜蓿细胞的原生质体后，需再生细胞壁，实验室检测原生质体是否再生出细胞壁的方法是________。

（4）基因工程中，某些噬菌体经改造后可以作为载体，其DNA复制所需的原料来自于________，DNA的基因通过________合成蛋白质。

(1)在进行细胞培养时,要对取自转基因奶牛的组织细胞进行分散处理,形成单个细胞,这个过程中需要利用________酶处理。在培养过程中,将成纤维细胞置于5% CO₂的气体环境中,CO₂的作用是________。

(2)用于核移植的供体细胞,一般都选用传代10代以内的细胞,原因是________。

(3)在进行原代培养时,细胞增殖的方式是________,此外,细胞增殖还表现出________和接触抑制等特点。

(4)将进行培养的供体细胞的细胞核注入去核的卵母细胞中,去除卵母细胞细胞核的目的是________。

(5)在转基因奶牛的克隆过程中，下列哪项技术没有运用到 ________ 。     

A．细胞培养技术　　　　             B．细胞核移植

C．胚胎移植技术                    D．基因工程技术

(6) 转基因奶牛克隆的过程是否遵循孟德尔的遗传分离定律________。

(7)人生长激素基因能在奶牛细胞中表达，说明不同生物共用一套________。

人们预防与诊疗传染性疾病经常使用疫苗和抗体，已知禽流感传染性疾病的病原体为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白为主要抗原，相应疫苗生产和抗体制备的流程之一如下图：

(1)过程②代表基因工程操作步骤中的            ；基因工程的核心步骤是   (填序号)，该过程所需的工具酶有           。

(2)过程⑦利用的生物学原理是            ，获得的X称为             

(3)对健康人进行该传染病免疫预防时，可选用图中基因工程生产的        制备疫苗。对该传染病疑似患者确诊时，可以从疑似患者体内分离出病毒，与已知病毒进行       比较，或用图中的               进行特异性结合检测。