（1）基因工程的基本操作程序主要包括四个步骤：第一步是目的基因的获取，第二步是基因表达载体的构建，第三步是将目的基因导入受体细胞，第四步是          ▲         

①通常在第一步和第二步的操作中需要相同的工具酶是          ▲           

②利用PCR技术扩增目的基因的过程中，目的基因受热形成单链并与引物结合，在   ▲     酶的作用下延伸形成DNA。

③采用农杆菌转化法将目的基因导入植物细胞后，培养该细胞再生成植株的过程中，往往需要使用植物激素，人为地控制细胞的           ▲          。

④如果转基因植物的花粉中含有毒蛋白，将引起的安全性问题包括     ▲            （多选）。

    A．生物安全  B．环境安全    C．食品安全    D．伦理道德问题

⑤蛋白质工程的基本原理是：预期蛋白质功能→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到相对应的        ▲            序列，所以蛋白质工程实质是对基因直接操作的。

（2）请回答下列有关单克隆抗体制备的问题：

①与动物细胞融合过程相比，植物体细胞杂交在细胞融合之前要用    ▲      ，以获得原生质体。

②骨髓瘤细胞和产生免疫反应的动物的脾脏细胞中的B淋巴细胞融合时，由于可能产生多种融合细胞，因此还需对融合细胞进行            ▲        ，且要适时克隆化培养。

（3）请回答下列有关胚胎工程的问题：

   ①在胚胎移植过程中，供、受体母牛选择好后，要用激素进行同期发情处理的原因是       ▲        ，

     以保证移植的胚胎能够继续正常发育。

   ②人类的胚胎发育过程中，细胞分化开始于    ▲        阶段。

（1）根据表面抗原蛋白质的氨基酸序列推测出目的基因的________，进行人工合成，然后通过______技术大量扩增。

（2）基因工程的核心步骤是________，要利用________连接被限制酶切开的键。

（3）在表达过程中，启动子需与________识别和结合，从而驱动转录过程。

（4）实验证明，一定时间内间隔口服该疫苗3次效果更好，其主要原因是体内产生的________细胞数量增多，导致获得的免疫预防作用更强，持续时间更久。

(1)图中①～⑤过程所示的生物工程为________。图示④所示过程中碱基互补配对方式有________种。

(2)基因表达载体中的________是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。在上述过程中，不能将目的基因直接导入受精卵中的原因是________；过程⑤中只用同一种限制酶切割含目的基因的DNA片段或载体，将会________(任答一点)。

&;    人的血清白蛋白(HSA)在临床上需求量很大，通常从人血中提取．如果应用现代生物技术，将人的血清白蛋白基因转入奶牛细胞中，那么利用牛的乳汁生产血清白蛋白就成为可能．其大致过程如下：

（1）②过程使用                 酶，③表示               技术．基因工程的核心是过程           （填序号），其中人血清白蛋白基因首端必需含有                  。

（2）图中方法C是                  。鉴定人血清白蛋白基因是否成功在转基因牛体内表达的方法称为___________。

（3）该图示培育良种牛的过程中用到的胚胎工程技术有                     。（至少两项）

（4）乳汁保存和运输条件相对较高，而奶酪便于保存和运输，预将转基因牛D分泌的乳汁制成奶酪，需要一种关键性酶——凝乳酶．研究发现，如果将该凝乳酶20位和24位氨基酸改变为半胱氨酸，其催化能力将提高2倍．通过蛋白质工程生产高效凝乳酶，所需步骤有___________。

 a． 蛋白质的结构设计                  b． 蛋白质的结构和功能分析

 c． 蛋白质结构的定向改造              d． 凝乳酶基因的定向改造

 e． 将改造后的凝乳酶基因导入受体细胞  f． 将定向改造的凝乳酶导入受体细胞

据图回答：

（1）获取人乳铁蛋白基因：可构建          文库。构建该文库的第一步是从        细胞中提取           。

（2）图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用限制酶BamH I 和        同时酶切载体和人乳铁蛋白基因,用两种酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因的优点是                       。

（3）重组质粒筛选方法是用经限制酶切割和DNA连接酶作用过的质粒转化大肠杆菌，先用含               的培养基进行培养，若能生长，再影印到含         的培养基上培养，若不能生长，说明该菌落的大肠杆菌导入的质粒是重组质粒。

（4）培育转基因牛时可用           法将重组质粒导入牛的受精卵中。在体外培育成早期胚胎后，再移植至代孕母牛的子宫中，在移植前某一段时间需给代孕母牛注射            激素。

（5）为检测人乳铁蛋白在牛乳腺中是否表达成功，采用的方法是                   。

疾病的诊断与治疗过程中，经常使用单克隆抗体。回答问题：

(1)单克隆抗体是由杂交瘤细胞产生的，杂交瘤细胞具有的特点是________。体外培养杂交瘤细胞，首先应保证其处于________的环境，其次需要提供充足的营养和适宜的温度，培养箱中充入二氧化碳的作用是________。

(2)单克隆抗体在诊断疾病的方面上具有________的优点；在治疗癌症方面可制成________治疗癌症。

(3)科研工作者欲对单克隆抗体进行改造，生产出效果更好的嵌合抗体，用于治疗疾病。用蛋白质工程技术对单克隆抗体进行改造时，首先必须根据预期________，设计嵌合抗体的结构。最终通过基因拼接，将抗体基因改造成嵌合抗体基因，然后导入到淋巴细胞中表达。检测该基因在淋巴细胞中是否翻译成蛋白质．可使用________技术。

（1）目的基因可以从基因文库中直接获取，然后可以利用PCR技术扩增基因，PCR的原理是               ，利用PCR技术扩增目的基因的前提，是要有一段已知基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成       。

（2）据图分析，在构建重组质粒的过程中，目的基因用                   （填“酶I”或者“酶II”）进行了切割。检验重组载体导入能否成功需要利用                      作为标记基因。检测目的基因是否翻译成蛋白质的方法是      。

（3）将目的基因导入动物细胞最有效的方法是     ，早期的基因工程操作都用         作为受体细胞。

（4）若希望通过转基因牛生产的胰岛素具有作用快、持续时间长等特点，则需要通过             工程手段对人的胰岛素基因进行设计，该工程的基本途径是：从预期的蛋白质功能出发→               →推测应有的氨基酸序列→找到相对应的脱氧核苷酸序列。

（5）基因工程已经广泛应用于各个领域。目前，治疗遗传病的最有效的手段是      。

（1）理论上，基因组文库含有生物的         基因；而cDNA文库中含有生物的            基因。

（2）若要从植物甲中获得耐旱基因，可首先建立该植物的基因组文库，再从中          出所需的耐旱基因，导入植物体细胞中，经过一系列的过程得到再生植株。要确认该耐旱基因是否在再生植株中正确表达，应检测此再生植株中该基因的              ，如果检测结果呈阳性，再田间试验中检测植株的              是否得到提高。

（3）假如用得到的二倍体转基因耐旱植株自交，子代中耐旱与不耐旱植株的数量比为3∶1时，则可推测该耐旱基因整合到了             （填“同源染色体的一条上”或“同源染色体的两条上”）。

（4）蛋白质工程的基本程序是：预期蛋白质功能→设计预期的蛋白质结构→推测应有的         序列→找到相对应的          序列

(1)写出图中各数字代表的生物学过程的名称或内容：

①_________，②_________，③_________，④_________，⑤_________。

(2)蛋白质工程的目的是_____________，通过_______________来实现。