抗凝血酶Ⅲ蛋白是一种血浆糖蛋白，临床上主要用于血液性疾病的治疗。凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶。下列是生产这两种酶的相关思路，请回答下列问题：

（1）图1为通过培育转基因奶牛获得抗凝血酶Ⅲ蛋白的流程。

①图中过程a指的是利用________法将目的基因导入受精卵，受体细胞不选用体细胞的理由是________________。

（2）从牛胃液中分离得到的凝乳酶以其催化能力强而被广泛应用，研究人员运用基因工程技术，将编码该酶的基因转移到了微生物细胞中。

①从牛胃细胞中提取目的基因。以此DNA为模板进行PCR扩增，还需要____________、____________、____________等。

②为提高重组DNA分子的比例，在构建重组DNA分子（如图2所示）时最好选用______________作限制酶。

③经研究发现，如果将该凝乳酶的第20位和24位氨基酸变为半胱氨酸，则其催化能力将提高2倍。现已知通过蛋白质工程可生产高效凝乳酶，请写出有关制备步骤：________________________。

下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1和图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：

(1)一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有________个游离的磷酸基团。

(2)若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越________。

(3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是____________________________________________________________________。

(4)与只使用EcoR Ⅰ相比较，使用BamH Ⅰ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止_____________________________。

(5)为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入___________酶。

(6)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了_____________________。

(7)蛋白质工程也被称为第二代基因工程，其基本途径是从预期蛋白质功能出发，通过_____   ___和________________，进而确定相对应的脱氧核苷酸序列，据此获得基因，再经表达、纯化获得蛋白质。

(8)将重组DNA分子导入植物受体细胞的常用方法为               法。 为了确定转基因是否培育成功，要用放射性同位素标记的                         作探针进行分子杂交检测。

科学家对鼠杂交瘤抗体进行改造，生产出效果更好的鼠—人嵌合抗体，用于癌症治疗。下图表示形成鼠—人嵌合抗体的过程。请据图回答：

（1）生产单克隆抗体一般不直接培养浆细胞，主要原因是    。

（2）在单克隆抗体制备过程中之所以选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞，是因为它们融合后的杂交瘤细胞具有    、   的特性。

（3）单克隆抗体制备过程运用了    和     等动物细胞工程技术手段。

（4）动物细胞培养液的配方通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素等，与植物细胞培养基有所不同的是，还含有    。

（5）在动物细胞融合过程中，需要将所选取的组织细胞离散开，以利于细胞融合，可用    处理离体组织细胞使之分散开。

（6）改造鼠源杂交瘤抗体，生产鼠—人嵌合抗体，属于    (生物工程)的范畴。必须直接对    进行操作。

【生物—选修 现代生物技术】

凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶，研究人员利用基因工程技术，将编码该酶的基因转移到了微生物细胞中并使之表达。下图表示EcoRI、BamHI、PstI三种限制酶在质粒和含凝乳酶基因的外源DNA片段上的切割位点。请回答下列问题：

（1）根据图中EcoRI、BamHI、PstI三种限制酶的切割位点分析，该工程中最不适宜用来切割外源DNA获取目的基因的限制酶是___________________________，原因是___________________________。将切割后的质粒和目的基因连接起来需要_______________________酶。构建好的重组质粒在目的基因前要加上特殊的启动子，它是___________________________识别和结合的部位。

（2）工业化生产过程中，若采用重组大肠杆菌生产凝乳酶，该过程中将目的基因导入大肠杆菌前，常常用___________________________处理细胞，使之处于一种能___________________________的生理状态，这种细胞称为感受态细胞。

（3）研究发现，如果将该凝乳酶第20位和第24位氨基酸改变为半胱氨酸，其催化能力将提高2倍。科学家可以生产上述高效凝乳酶的现代生物工程技术是___________________________。该生物工程技术对蛋白质结构的设计和改造，必须通过基因来完成，原因是___________________________。

[生物——选修3：现代生物科技专题]

为增加油葵种子中的含油量，科学家尝试将花生中的酶A基因导入油葵细胞．获得转基因油葵新品种。

(1)为获取目的基因，可从花生细胞中提取_____________，经逆转录形成cDNA。以此cDNA为模板通过PCR技术扩增目的基因。

(2)构建重组DNA分子(如图所示)最好选用__________________________限制酶，目的是可避免________________________________。

(3)普通大肠杆菌细胞中没有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因，将构建的重组DNA分子导入农杆菌中，将获得的农杆菌接种在含_______________的固体平板上培养得到含重组质粒的单菌落，再利用培养基震荡培养，可以得到用于转化的浸染液。

(4)剪取油葵的叶片放入浸染液中一段时间后，经过筛选获得转基因油菜细胞。最后经过__________________培育成转基因油葵植株。此种技术的原理是______________。

(5)研究发现，如果将该酶A的20位和24位氨基酸变为半胱氨酸，其催化能力将提高2倍。通过蛋白质工程对酶A进行改造，所需步骤有                 

a．蛋白质的结构设计                   b．蛋白质的结构和功能分析

c．蛋白质结构的定向改造               d．酶A基因的定向改造

e．将改造后的酶A基因导入受体细胞     f．将定向改造的酶A导入受体细胞

(6)经过种植转基因油葵发现，虽然转基因油葵种子中含油量上升，但是抗灰霉菌的能力丢失，其原因是_____________________。

凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶，研究人员利用基因工程技术，将编码该酶的基因转移到了微生物细胞中并使之表达。下图表示EcoRI、BamHI、PstI三种限制酶在质粒和含凝乳酶基因的外源DNA片段上的切割位点。回答下列问题：

(1)根据图中EcoRI、BamHI、PstI三种限制酶的切割位点分析，该工程中最不适宜用来切割外源DNA获取目的基因的限制酶是      ，原因是      。将切割后的质粒和目的基因连接起来需要      酶。构建好的重组质粒在目的基因前要加上特殊的启动子，它是     识别和结合的部位。

(2)研究发现，如果将该凝乳酶第20位和第24位氨基酸改变为半胱氨酸，其催化能力将提高2倍。科学家可以生产上述高效凝乳酶的现代生物工程技术是      。该生物工程技术对蛋白质结构的设计和改造，必须通过基因来完成，原因是              

回答与胡萝卜有关的问题：

（1） 胡罗卜含有的胡罗卜素中，最主要的是              （填“α—胡罗卜素”或“β—胡罗卜素”或“γ—胡罗卜素”），该胡罗卜素在人体内可以转变成两分子            ，后者缺乏会引起人在弱光下视物不清的病症，该疾病称为                 ，胡罗卜素是                                    （填“挥发性”或“非挥发性”）物质。

（2） 工业生产上，用养殖的岩藻作为原料提取胡罗卜素时，                （填“需要”或“不需要”）将新鲜的岩藻干燥。

（3） 现有乙醇和乙酸乙酯两种溶剂，应选用其中的                作为胡罗卜素的萃取剂，不选另一种的理由是                                                                                                      

​36（9分）已知生物体内有一种蛋白质（P），该蛋白质是一种转运蛋白，由305个氨基酸组成。如果将P分子中158位的丝氨酸变成亮氨酸，240位的谷氨酰胺变成苯丙氨酸，改变后的蛋白质（P₁）不但保留P的功能，而且具有了酶的催化活性。回答下列问题：

（1） 从上述资料可知，若要改变蛋白质的功能，可以考虑对蛋白质            的进行改造。

（2） 以P基因序列为基础，获得P₁基因的途径有修饰基因          或合成基因                ，所获得的基因表达时是遵循中心法则的，中心法则的全部内容包括的复制；以及遗传信息在不同分子之间的流动，即：                      。

（3） 蛋白质工程也被称为第二代基因工程，其基本途径是从预期蛋白质功能出发，通过                和                              ，进而确定相对应的脱氧核苷酸序列，据此获得基因，在经表达、纯化获得蛋白质，之后还需要对蛋白质的生物进行鉴定。

如图是从酵母菌细胞内获取某植物需要的某种酶基因的流程，请回答下列问题：

​

(1)图中cDNA文库含有酵母菌的________基因，与基因组文库中的基因相比无________、_________。

(2)①过程提取的DNA需要用限制酶，该酶能够识别_____________________，并且使_____________________断开。

(3)为在短时间内大量获得目的基因，可用PCR方法扩增，该反应体系的主要成分应包含：扩增缓冲液(含 )、水、4种脱氧核苷酸、模板DNA、________和________。

(4)蛋白质工程也被称为第二代基因工程，其基本途径是从________出发，通过设计蛋白质结构和推测相应的氨基酸序列，进而确定相对应的________，据此获得基因，再经表达、纯化获得蛋白质。

（1）图中cDNA文库               基因组文库（填“大于”、“等于”或者“小于”）。

（2）①过程提取的DNA需要              的切割，B过程是                    。

（3）为了在短时间内获得大量目的基因，可用                技术扩增数量。

（4）将该目的基因导入某双子叶植物细胞，常采用的方法是                ，若要判断其能否在此植物体内稳定遗传可以用                技术进行检测。

（5）如果要想使该酶活性更强或具有更强的耐受性，需要对现有蛋白质进行改造，这要通过基因工程延伸——蛋白质工程。首先要设计预期的                 ，再推测应有的氨基酸序列，找到相对应的                     。

(1)图中①～⑤所示的生物工程为________。该工程是指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过对基因的________，对现有的基因进行改造，或制造出一种新的________，以满足人类生活的需求。

(2)图中序号④所示过程叫作________，该过程遵循的碱基互补配对原则不同于翻译过程的是________(请将模板碱基写在前)。

(3)若大量扩增目的基因，则用的是________(写出全称)技术，该过程需要的聚合酶的特点是________。

(4)若预期蛋白质欲通过乳腺生物反应器生产，则构建基因表达载体时，在基因的首端必须有________；且在图中⑨过程之前，要对精子进行筛选，保留含________性染色体的精子。