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            • 1. 人们预防与诊疗传染性疾病经常使用疫苗和抗体,已知禽流感传染性疾病的病原体为RNA病毒,该病毒表面的A蛋白为主要抗原,相应疫苗生产和抗体制备的流程之一如图:

              (1)过程②代表基因工程操作步骤中的______,;基因工程的核心步骤是______(填序号),该过程所需的工具酶有______.
              (2)过程⑦利用的生物学原理是______,获得的X称为______
              (3)对健康人进行该传染病免疫预防时,可选用图中基因工程生产的______制备疫苗.对该传染病疑似患者确诊时,可以从疑似患者体内分离出病毒,与已知病毒进行______比较,或用图中的______进行特异性结合检测.
            • 2.
              如图表示含有目的基因D的DNA片段长度(bp即碱基对)和部分碱基序列,图右表示一种质粒的结构和部分碱基序列.现有MspI、BamHI、MboI、SmaI 4种限制性核酸内切酶,它们识别的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG.

              (1)图左DNA分子中的一条脱氧核苷酸链中相邻两个脱氧核苷酸之间由 ______ (化学键)连接.
              (2)若用限制酶SmaI完全切割图中含有目的基因D的DNA片段,其产物长度分为 ______ .
              (3)为了提高试验成功率,需要通过 ______ 技术扩增目的基因,以获得目的基因的大量拷贝.在目的基因进行扩增时,加入的引物有A、B两种,引物的作用是 ______ ,若该目的基因扩增n代,则其中含有A、B引物的DNA分子有 ______ 个.
              (4)若将图右中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行连接,形成重组质粒,那么应选用的限制酶是 ______ .经检测,部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达,其最有可能的原因是 ______ .
              (5)导入目的基因的植物细胞,经过植物组织培养技术得到幼苗,该技术利用的原理是 ______ .
            • 3. 材料一:人类可利用转基因番茄作为生物反应器生产人胰岛素.所用的人胰岛素基因是依据植物“偏爱”的密码子来设计所含的密码子,通过人工合成若干DNA片段,拼接而成,并且在胰岛素﹣COOH端加上KDEL内质网滞留序列,避免胰岛素在植物细胞中的降解.将该基因置于果实专一性启动子的驱动之下通过农杆菌介导的方法转入番茄中,在番茄的果实中表达人胰岛素.
              材料二:T4溶菌酶在温度较高时易失去活性,科学家对编码T4溶菌酶的基因进行改造,使其表达的T4溶菌酶的第3位的异亮氨酸变为半胱氨酸,在该半胱氨酸与第97位的半胱氨酸之间形成了一个二硫键,提高了T4溶菌酶的耐热性.
              (1)材料一中基因工程操作是采用 方法获得目的基因的.获得的人胰岛素基因与人体细胞中胰岛素基因中编码氨基酸的碱基序列不同,但两者所编码的蛋白质中氨基酸序列相同,这是因为密码子具有 .要想在体外获得大量该目的基因的片段,可以采用 技术.
              (2)根据上述描述,转基因操作时所用的载体是 ,载体上的 可以转移至受体细胞,并且整合到受体细胞染色体的DNA上.
              (3)材料二属于工程范畴.该工程是指以分子生物学相关理论为基础,通过基因修饰或基因合成,对 进行改造,或制造一种 的技术.
            • 4. 某研究所利用基因工程、胚胎工程等技术获得能产生人凝血因子的转基因山羊.回答下列问题:
              (1)基因工程的基本操作流程中,当获取目的基因后,在将其中导入受体细胞前需要进行一个重要的操作步骤,即构建 ,该步骤使用的两种工具酶分别是 .
              (2)从公羊体内采集的精子需经过 处理,才能在体外与卵细胞结合形成受精卵.常用 法将目的基因导入受精卵中,受精卵在体外培养至 阶段时再移植到母羊子宫中.
              (3)利用分子杂交技术可检测转基因山羊细胞中的人凝血因子是否转录出了 (填“tRNA”、“mRNA”或“rRNA”);利用针对 的抗体进行抗原﹣抗体杂交,可检测目的基因是否翻译.
            • 5. 基因疫苗指的是DNA疫苗,是将编码外源性抗原的基因插入到含真核表达系统的质粒上,然后将质粒直接导人人或动物体内,让其在宿主细胞中表达抗原蛋白,诱导机体产生免疫应答.回答下列问题:
              (1)要获得编码抗原的基因,首先要提取出病原体的DNA或RNA,并将RNA ,要大量获得表达特异抗原的基因,可采用 方法.
              (2)将抗原基因插入质粒的过程,即构建基因表达载体的过程,通常一个基因表达载体的组成,除了抗原基因(目的基因)外,还有 
              (3)一般将重组质粒利用的方法送人受体细胞,进入细胞核并表达抗原蛋白.
              (4)与传统疫苗相比,基因疫苗不仅能在宿主体内较长时间存在,还可以诱导产生(填“体液免疫”“细胞免疫”或“体液免疫和细胞免疫”).
              (5)一个质粒载体可插人多个抗原基因组成多价疫苗,导人这样的疫苗可达到 的目的.
              (6)基因疫苗是在基因治疗技术的基础上发展而来的.基因治疗是把 导入病人体内,使该基因表达产物发挥功能,从而达到治疗疾病的目的.
            • 6. 2015年,屠呦呦因发现青蒿素治疗疟疾的新疗法获奖.工业上青蒿素一般从青蒿植株中提取,产量低,价格高.基因工程及细胞工程等为培育出高青蒿素含量的青蒿提供了思路.科学家先通过紫外线处理大量青蒿幼苗后,偶然发现一株高产植株.通过基因测序发现该高产植株控制青蒿素合成相关的一种关键酶的基因发生了突变.
              (1)提取了高产植株的全部DNA后,要想快速大量获得该突变基因可以采用PCR技术,该技术的原理是 
              (2)如果用青蒿某个时期mRNA反转录产生的双链cDNA片段,用该双链cDNA进行PCR扩增,进行了30个循环后,理论上可以产生约为 个DNA分子,该双链与载体连接后储存在一个受体菌群中,这个受体菌群就叫做青蒿的 ,获得的cDNA与青蒿细胞中该基因碱基序列 (填“相同”或“不同”).
              (3)将获得的突变基因导入普通青蒿之前,先构建基因表达载体,图l、2中箭头表示相关限制酶的酶切位点.请回答:

              用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒,不能使用SmaⅠ切割,原因是 ,构建好的重组质粒在其目的基因前要加上特殊的启动子,启动子是 识别结合位点.
              (4)检测目的基因是否表达出相应蛋白质,应采取 技术.目的基因导入组织细胞后,通过 技术培育出青蒿幼苗.
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