利用动物乳腺生产产品的技术称为动物乳腺反应器技术。2005年我省青岛“崂山奶山羊乳腺生物反应器的研制”项目通过鉴定，该项目生产的药用蛋白具有表达效率高、成本低、安全性高、易于分离纯化的优点，可产生乙肝表面抗原及抗凝血酶Ⅲ等医药产品，造福人类健康。下图为利用生物技术获得生物这一新品种和抗虫棉的过程，据图回答：

⑴在基因工程中，A表示______________，如果直接从苏云金杆菌中获得抗虫基因，①过程使用的酶区别于其他酶的特点是____________________，B表示__________________。

⑵在研究过程中，研究人员首先从相关基因组中获取了目的基因，并采用____     技术对目的基因进行了扩增，然后将目的基因与质粒等载体组合形成了重组载体。在重组载体的构建过程中需要的工具酶有______________。

⑶基因表达载体的构建是基因工程的核心，一个完整的基因表达载体至少包括哪些部分?____________。

⑷将目的基因导入受体细胞的过程中，在③过程中一般是采用_______________方法，在②过程中一般采用_________方法，受体细胞一般是__________。

⑸由于转基因表达产物存在于山羊的乳汁中，检测其体内是否出现药用蛋白，在分子水平上的检测方法及结果是什么?

现代生物工程技术推动了医药学、免疫学和生态学的发展，如科学家将人的血清蛋白基因转入奶牛细胞中，利用牛的乳汁生产出人的血清蛋白等。

（1）从牛的组织获得单个细胞，通常需要用______________酶处理。

（2）将人血清蛋白基因导入牛的常用的方法是_______________。在导入之前，要用_____________酶构建基因表达载体，导入后再将受精卵送入母体的输卵管，受精卵即在输卵管内进行___________，开始发育。

（3）上述胚胎发育早期是在____________内进行的，这个时期称为卵裂期。在胚胎发育过程中，囊胚的___________将发育成转基因牛的各种组织。

（4）为了要泌乳，必须保证移植的胚胎为______性，一般的做法是取样_________做DNA分析性别鉴定。当转基因动物进入泌乳期时，可通过分泌的乳汁来生产人血清蛋白，因而称为_______________。

（5）单克隆抗体的制备中，将经抗原免疫的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行融合，再用特定的___________培养基进行筛选，获得杂交瘤细胞后，还需进行___________培养和抗体检测，经过多次筛选，就能获得能分泌单一抗体的杂交瘤细胞。最后获得的杂交瘤细胞只能产生一种单一抗体的原因是___________。

（6）为建设美丽乡村，积极推进生态农业建设，依据生态工程___________的原理，合理设计食物链，使生态系统中的物质和能量得到分层次多级利用，使废弃物资源化，提高了能量的___________，减少了环境污染。

已知二倍体番茄红果(A)对黄果(a)为显性,双子房(B)对多子房(b)为显性,高蔓(C)对矮蔓(c)为显性。现有三个纯系品种:Ⅰ(黄色、多子房、高蔓),Ⅱ(黄色、双子房、矮蔓),Ⅲ(红色、双子房、高蔓),为了快速获取红色、多子房、矮蔓纯系新品种。

(1)请完善以下实验步骤。

第一步:Ⅰ×Ⅱ→获得植株Ⅳ,让Ⅳ自交,从子代中选取黄色、多子房、矮蔓植株Ⅴ。

第二步:____________________________　。

第三步: 取植株Ⅵ的花药进行离体培养,获得单倍体幼苗,用秋水仙素处理,即可筛选获得红色、多子房、矮蔓纯系新品种。

(2)将上述植株V的离体细胞与植株Ⅲ的离体细胞融合,形成杂种细胞。

①促进融合时常采用的化学诱导剂是_____________。

②请画出该融合细胞中控制红色与黄色这对性状的染色体组成图,并标明相关基因。

(3)据报道,番茄红素具有一定的防癌效果。科学家将含有酵母S-腺苷基蛋氨酸脱羧酶基因(简称S基因)cDNA片段导入普通番茄植株,培育了番茄红素高的新品种。

①获得cDNA片段的方法是_________。

②假设S基因的一条链中A和T的总量为2 400个,占该片段总碱基的60%,用PCR扩增该基因,该基因复制n次共要dGTP______个。

③为确保S基因在番茄中表达,在构建基因表达载体时应插入特定的_________。

④将基因表达载体导入番茄的方法有农杆菌转化法和_________等。

如图是从酵母菌获取某植物需要的某种酶基因的流程，结合所学知识及相关信息回答下列问题：

（1）图中cDNA文库______基因组文库（填“大于”、“等于”或者“小于”）．

（2）（2）①过程提取的DNA需要__________的切割．

（3）（3）为在短时间内大量获得目的基因，可用________扩增的方法，其原理是___________．

（4）（4）目的基因获取之后，需要进行_________，其组成，必须有_________、________、_______以及标记基因等．此步骤是基因工程的核心．

I.我国科研人员克隆了100多个重要基因，取得了抗虫棉、抗虫玉米、耐除草剂大豆等一批重大转基因成果。请回答下列问题：

（1）抗虫棉中转入的Bt毒蛋白基因是从苏云金(芽孢)杆菌中分离出来的，该基因编码的Bt蛋白对哺乳动物        （填“有”或“无”）毒害作用。

（2）每一种Bt毒蛋白的杀虫范围有限，对现有的毒蛋白进行       ，使其具有更广杀虫范围，属于           （生物工程）的范围。

（3）随着转基因成果的不断涌现，人们对转基因生物的安全性的关注与日俱增，在食物安全、生物安全和           三个方面发生了激烈争论。

II.关注生态工程的建设。

（1）与传统的工程相比,生态工程是一类少消耗、          、可持续的工程体系。

（2）“无废弃物农业”是我国古代传统农业的辉煌成就之一,也是生态工程最早和最生动的一种模式，该模式主要遵循生态工程的              原理。我国西北一些地区年降雨量少，适宜种植灌木和草，却被硬性规定种植属于乔木的杨树，致使许多地方的杨树长成半死不活状，结果防护林成了残败的“灰色长城”。其失败的原因主要是违背了       原理。

（3）甘肃陇南地区的“九子登科”模式是哪种生态工程建设的实例？（ ）

A.草原生态恢复工程              B.城市环境工程

C.小流域综合治理生态工程    D.湿地生态恢复工程

利用基因工程技术培育转基因抗冻番茄.该过程需要用多种限制酶,下图依次表示EcoR I、Sma I、Nae I三种限制酶的识别序列及切割位点.

请回答:

（1）上述限制酶在特定位点切割DNA,其实质是断开DNA分子每条链中特定部位的两个核苷酸之间的_______切割后产生了____________末端.

（2）利用EcoR I和NAE酶切得某种鱼的抗冻蛋白基因,可与被EcoR I和Sam I酶切后的质料连接成重组质料,原因是___________

（3）重组质料导入番茄后,欲检测抗冻蛋白基因是否转录出mRNA,需利用__________作探针.

（4）利用抗冻蛋白制备出相应的__________,然后进行抗原-抗体杂交,观察到杂交带出现,尚不足以确定转基因抗冻番茄培育是否成功.因此,还应将转基因番茄__________,以确定其耐寒能力是否提高

(1)下列有关现代生物技术的叙述正确的是__________。

   A．基因工程与蛋白质工程都能制造出新的蛋白质
    B．动物细胞培养时通常需要添加血清
    C．动物的早期胚胎发育依次经过受精卵、卵裂、桑椹胚、孵化、囊胚、原肠胚等阶段
    D．DNA连接酶和DNA聚合酶都能使核苷酸之间形成磷酸二酯键，属于同一种酶
(2)基因工程的基本操作程序主要包括四个步骤，其中的核心步骤是__________；
(3)植物组织培养的主要原理是植物细胞具有__________，具体过程是在__________和人工控制条件下，将离体的植物器官、组织、细胞培养在人工配制的培养基上，给予适宜的条件，诱导其经过__________产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植株。
(4)克隆动物实际上是用__________方法得到的动物，也就是将一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的__________细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，最终发育为动物个体。
(5)生态工程是实现循环经济最重要的手段之一，请写出它遵循的基本原理（至少答两项）：________________________________________。

（1）如用大肠杆菌作为受体细胞，则该大肠杆菌中不应含有青霉素抗性基因，请阐述其原因？                                   。

（2）培养导入了重组质粒的大肠杆菌时，需配制培养基。该培养基除含有大肠杆菌必需的葡萄糖、氮源、无机盐、水、生长因子等营养物质外，还应加入的物质有（    ）（多选）

A．细胞分裂素 B．琼脂 C．噬菌体 D．青霉素 

（3）培养基配制和灭菌时，灭菌与调节pH的先后顺序是         ；一般对配制的培养液采用

         法灭菌。

（4）微生物接种培养时，可采用两种方法。下图为接种后微生物培养的效果图，那么，获得图A效果的接种方法是______________，获得图B效果的接种方法是_____________。

（5）与大肠杆菌相比，嗜热菌具有的特点是         。（多选）

下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图一、图二中箭头表示相关限制酶的酶切位点。

A．DNA自我复制           B．DNA以其一条链为模板合成RNA

C．RNA自我复制           D．按照RNA上密码子的排列顺序合成蛋白质

（2）限制酶Sma和限制酶Xma作用的不同点是_________________________________。

（3）图二中的目的基因D需要同时使用Mse酶和Pst酶才能获取，而图一所示的质粒无相应的限制酶切位点。所以在用该质粒和目的基因构建重组质粒时，需要对质粒改造，构建新的限制酶切位点。试写出构建需要的限制酶切位点的过程（提供构建需要的所有条件）：

①首先用_______________酶处理质粒；

②然后用_______________酶处理质粒，使被切开的质粒末端连接上相应的脱氧核苷酸；

③再运用T₄DNA连接酶处理质粒，形成新的限制酶切位点，即可被_________酶识别。

（4）基因工程中的检测筛选是一个重要的步骤。下图表示运用影印培养法（使在一系列培养皿的相同位置上能出现相同菌落的一种接种培养方法）检测基因表达载体是否导入大肠杆菌。培养基除了含有细菌生长繁殖必需的成分外，培养基A和培养基B分别还含有________________________。从检测筛选的结果分析，含目的基因的是________（填编号）菌落中的细菌。

质粒是基因工程中最常用的运载体，质粒上有标记基因，如图所示，通过标记基因可推知外源基因插入的位置，插入位置不同，细菌在培养基上的生长情况也不同。下图表示外源基因的插入位置（插入点有a、b、c）。

Ⅰ.（1）质粒的基本组成单位是___________，在基因工程中作为_________。

（2）将细菌放在含有四环素、氨苄青霉素中培养，属于基因工程操作中的_________步骤。

（3）在插入外源基因过程中用到的工具酶有__________。

Ⅱ.设计实验探究外源基因插入的位置。

（1）步骤：

①将导入外源基因的细菌进行培养产生大量细菌。

②分组：将细菌平均分成两组并标号为1，2。

③培养：将第1组细菌放入含氨苄青霉素的培养基上培养，________________________。

④观察并记录结果。

（2）预测实验结果及结论：

若__________________________，则外源基因插入点是a；

若__________________________，则外源基因插入点是c；

若__________________________，则外源基因插入点是b