图示方案为人们获得生物新品种的过程，请回答下列问题：

方案Ⅰ：抗冻蛋白基因烟草细胞―→抗冻烟草

方案Ⅱ：A基因免疫过的B细胞―→体外培养―→单克隆抗体

方案Ⅲ：人的生长激素基因牛的受精卵―→早期胚胎受体母牛―→转基因牛

(1)基因工程的核心步骤是________________。农杆菌转化法中，根据农杆菌的特点，如果将抗冻蛋白基因插入________上，通过农杆菌的转化作用，就可以使目的基因进入植物细胞，并将其插入植物细胞中________上。

(2)推测方案Ⅱ中A基因所起的作用是________，请写出该方案获得的细胞中遗传信息传递时所遵循的法则____________________________。

(3)方案Ⅲ中的转基因牛可以通过分泌乳汁来生产人的生长激素。这需要将人的生长激素基因与________的启动子等调控组件重组在一起。该方案中的早期胚胎在移植入受体母牛子宫之前，必须进行性别鉴定，一般是取处于________时期的________细胞进行检测。

回答下列（一）、（二）小题。

(一）某研究小组欲用苹果汁为原料，利用发酵瓶制作果酒和果醋，请分析回答：

(1)将苹果汁放入发酵瓶，要预留约________的空间。为得到酒精和糖含量较高的果酒，可在果汁中加入一定比例的______。若发酵瓶内持续无气泡产生，则需加入更多的_______，使发酵作用尽快发生。

(2)变酸的果酒表面有一层醋杆菌形成的菌膜，若要在该菌膜中筛选高表达量的醋杆菌菌株，可通过获得_______的方法来分离筛选。若要统计获得菌种的数目，则常采用_________法。对获得的优质醋杆菌菌种常用划线法接种在固体培养基______上低温保存。

(3)下图是果酒和果醋的发酵装置，关于果醋发酵叙述错误的是_______

A.发酵前，瓶内酒—冰混合物的pH需调至7.0

B.发酵过程中，充气口要适时适量充气

C.发酵过程中，排气口排出醋酸发酵产生的CO₂

D.发酵完成后，出料口的pH值不再减少

 (二）请回答杂交瘤技术和单克隆抗体制备的有关问题。

(1)杂交瘤技术制备单克隆抗体时，利用一定的物质，如生物诱  导剂_____作介导，使经免疫的小鼠脾细胞与________细胞融合，筛选出融合的细胞再进行细胞的______培养，获得纯系细胞，同时还要进行________检验，以保证获得的是所需的特定杂交瘤细胞。

(2)有关杂交瘤细胞体外培养的叙述，正确的是________

A.用固体培养基培养          B.用滋养层细胞支持生长

C.能进行传代培养            D.需要对细胞进行研磨破碎获得产物

(3)现在欲利用基因工程技术生产单克隆抗体，科研小组将与抗体形成有关的关键基因通过噬菌体导人到受体细胞，该技术的核心步骤是______________,噬菌体是这些关键基因的___________。

回答下列有关现代生物科技的问题：

(1)糖尿病在现代社会中的发病率越来越高，主要是由于患者胰岛B细胞受损，胰岛素分泌不足引起的。对此，某同学根据所学知识提出了用转基因动物生产胰岛素治疗方法。基本程序：①获取目的基因→②基因表达载体的构建→③将目的基因导入受体细胞→④目的基因的检测与鉴定。其中①和②的操作中需要相同的工具酶是________________，该酶的作用是__________________，暴露出相同的黏性末端。利用PCR技术扩增目的基因的过程中，目的基因受热形成单链并与引物结合，在________酶的作用下延伸形成DNA。

(2)蛋白质工程的基本途径是：预期蛋白质功能→设计预期的蛋白质结构→推测应有氨基酸的序列→找到相对应的________序列。

(3)单克隆抗体的制备过程中，经人工诱导后，骨髓瘤细胞和产生免疫反应的B淋巴细胞融合。由于可能产生多种融合细胞，因此还需对融合细胞进行________________。

(4)．分析有关基因表达的资料，回答问题。

取同种生物的不同类型细胞，检测其基因表达，结果如图1。

               图1                                                 图2

a.现欲研究基因1和基因7连接后形成的新基因的功能，导入质粒前，用限制酶切割的正确位置是__________。

b.图2是表达新基因用的质粒的示意图，若要将新基因插入到质粒上的A处，则切割基因时可用的限制酶是________。

A. HindⅢ           B. EcoRⅠ          C. EcoB          D. PstⅠ

c.新基因与质粒重组后的DNA分子导入受体细胞的概率很小，因此需进行________，才能确定受体细胞已含有目的基因。

菊天牛是菊花的主要害虫之一。科研人员将抗虫基因转入菊花，培育出抗虫菊花。下图是获得转基因菊花的技术流程。请据图回答：

（注：卡那霉素抗性基因（kan^R）作为标记基因，菊花叶片对卡那霉素高度敏感）

（1）质粒是基因工程中最常用的载体，其化学本质是_        __，此外还可用                 作为载体。

（2）下图限制酶M和N切割产生的黏性末端是__ ____ ____ __，连接它们所需要的基本工具是__              ________。

（3）为了促进土壤农杆菌吸收重组质粒，可用__  _____处理，使其处于感受态。

（4）将愈伤组织转移到添加一定浓度植物激素、营养物质以及___________和  ________ 的固体培养基中，在适宜条件下进行培养，筛选转基因菊花。

（5）用PCR方法检测转基因菊花是否含有目的基因时，需根据抗虫基因（目的基因）两端的部分碱基序列设计特异引物，若其中一种引物共用了31个，则目的基因最多扩增了__  __次。

（6）将转基因菊花嫩茎及叶片与人工饲料以适当比例混合后饲喂菊天牛2龄幼虫，实验结果如下表所示。

请据表回答：

①对照组应饲喂等量的__                ________                __。

②据表分析，__               ____            __差异显著，说明转基因菊花对菊天牛2龄幼虫有较强的毒杀作用。

菊天牛是菊花的主要害虫之一。科研人员将抗虫基因转入菊花，培育出抗虫菊花。图11是获得转基因菊花的技术流程，请据图回答：

（1）为了促进土壤农杆菌吸收重组质粒，可用______________处理土壤农杆菌，使其处于感受态。

（2）将重组质粒导入土壤农杆菌的目的是利用农杆菌能够_______________________的特点，使目的基因进入受体细胞中，并插入到菊花细胞的_______________上，最终形成转基因植株。

（3）将愈伤组织转移到添加一定浓度植物激素和_____________的培养基中，在适宜条件下进行培养，筛选转基因菊花。

（4）用PCR方法检测转基因菊花是否含有目的基因时，需根据________________的核苷酸序列设计特异引物，以________________为模板进行第一轮扩增。

（5）将转基因菊花嫩茎及叶片与人工饲料以适当比例混合后饲喂菊天牛2龄幼虫，实验结果如下表所示。

①对照组应饲喂等量的_______________________________。

②据表分析，______________________________差异显著，说明转基因菊花对菊天牛2龄幼虫有较强的毒杀作用。

【生物——选修3：现代生物科技专题】

神经营养因子（NTF）能促进神经元的存活和再生。已知NTF基因能得到克隆。回答下列问题：

（1）在体外，可通过PCR技术扩增NTF基因，该技术依据的原理是______________。为何保证PCR反应的进行，反应体系需要加入______________酶、模板DNA、dCTP、dATP、dGTP、dTTP、______________等。在打开DNA双链时需要_______________________。

（2）将外源NTF基因导入受体细胞常用的方法是_____________，检测其是否已表达，可采用______________方法。

（3）与转基因工程菌相比，利用真核细胞作为受体得到的NTF才有生物活性，其原因可能是______________。

白藜芦醇是一种天然的抗氧化剂，可降低血液粘稠度，抑制血小板凝结和血管舒张，保持血液畅通，可预防癌症的发生及发展，具有抗动脉粥样硬化和冠心病，缺血性心脏病，高血脂的防治作用。抑制肿瘤的作用还具有雌激素样作用，可用于治疗乳腺癌等疾病。下图表示利用植物组织培养的方法生产白藜芦醇的过程。请分析作答：

外植体愈伤组织丛芽或根—→完整植株

(1)植物组织培养是在____________和人工控制条件下，将________的植物体器官、组织、细胞，在人工配置的培养基上培养成完整植株，利用的原理是______________________________________。

(2)植物组织培养的核心步骤为____________和____________。①和②过程需要的培养基的激素含量________(填“相同”或“不同”)。

 (3)利用细胞产物工厂化生产技术提取白藜芦醇需要将外植体培养至________，原因是此阶段的细胞分裂能力强，但白藜芦醇的产量一般较低，可以用______________________处理愈伤组织，再筛选产量提高的细胞进一步培养。

(4)将白藜芦醇的基因转入大豆等重要粮食作物和经济作物中，提高农作物的营养价值和品质。导入受体细胞时常用方法为_____________________，目的基因是否插入的检测方法为_____________________。

A．淀粉酶       B．脂肪酶      C．纤维素酶    D．葡萄糖氧化酶

根据基因工程的有关知识，回答下列问题：

（1）cDNA文库属于     基因文库,其构建方法是：用某种生物发育的某个时期的       通过反转录产生cDNA片段,与        连接后储存在一个受体菌群中.

（2）切割DNA分子的工具是           ，它能使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的            断开，形成黏性末端或平末端。

（3）基因工程中所使用的DNA连接酶有两类。既可以“缝合”黏性末端，又可以“缝合”平末端的是       DNA连接酶。

（4）将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是           ；如果受体细胞是大肠杆菌,需要用          处理细胞,使之成为感受态细胞,才能吸收DNA分子.