Rag
2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞.科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag
2基因缺失小鼠进行基因治疗.其技术流程如图:
(1)步骤①中,在核移植前应去除卵母细胞的 ______ .
(2)步骤②中,重组胚胎培养到 ______ 期时,可从其内细胞团分离出ES细胞.
(3)步骤③中,需要构建含有基因Rag
2的表达载体.可以根据Rag
2基因的 设计引物,利用PCR技术扩增Rag
2基因片段.用HindIII和PstI限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag
2基因片段.为将该片段直接连接到表达载体,所选择的表达载体上应具有 ______ 酶的酶切位点.该基因表达载体上除含Rag
2基因外,还应含有 ______ (至少写出两个).用 ______ 方法将基因表达载体导入ES细胞.
(4)为检测Rag
2基因的表达情况,利用 ______ 原理,可提取治疗后小鼠骨髓细胞的 ______ ,用抗Rag
2蛋白的抗体进行杂交实验.