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            • 1. 如图表示利用小鼠胚胎干细胞(ES细胞)进行的相关研究.请回答下列问题:

              (1)ES细胞可取自囊胚的 ______ ,过程b将ES细胞置于饲养层上进行培养,加入动物血清和抗生素等物质,可维持细胞 ______ ;加入抗生素的目的是 ______
              (2)使用PCR技术扩增致癌基因的前提是 ______ .过程a为检测致癌基因是否插入ES细胞的染色体DNA上,可采用 ______ 技术.
              (3)过程d移入的胚胎能够存活,是因为代孕子宫并不会对其发生 ______ ,同时能够与受体子宫建立正常的 ______ 联系.
              (4)暂不移入代孕小鼠的早期胚胎可使用 ______ 保存.
            • 2.
              角膜缘干细胞能更新角膜上皮细胞,角膜上皮细胞对维持角膜的透明性至关重要.回答下列问题:
              (1)将角膜缘组织剪碎,加入 ______ 处理,可获得大量游离分散的细胞.细胞悬液在培养瓶中培养,当贴壁生长的细胞发生 ______ 现象时停止增殖.
              (2)通常角膜缘干细胞的培养控制在10代以内,原因是 ______ .
              (3)离体培养角膜缘干细胞时,一般需要在合成培养基中加入 ______ 等天然成分,培养时所需的气体主要有 ______ .
              (4)研究发现,细胞因子能够调控角膜缘干细胞分化.放线菌素D能通过阻碍RNA聚合酶的功能进而抑制细胞因子的调控,由此推断该抑制过程发生在 ______ (选填“复制”、“转录”或“翻译”)水平.
              (5)研究还发现,皮肤干细胞可以诱导分化为角膜缘干细胞,这体现了皮肤干细胞具有 ______ .临床上常用诱导干细胞定向分化的方法修补损伤或衰老的组织器官,从而解决了 ______ 问题.
            • 3.
              啤酒酵母是啤酒工业发酵菌种,对啤酒的品质、风味有很大影响.请回答:
              (1)若实验室中啤酒酵母菌种被杂菌污染,可采用 ______ 进行纯化培养:接种时,先将接种环在酒精灯火焰上灼烧,待其 ______  后,蘸取带菌培养物放到新的培养基中.倒置培养皿恒温培养直到出现 ______ ,再进行菌种鉴定.
              (2)为实现啤酒发酵连续生产,酵母细胞固定化技术已在啤酒工业中广泛应用.例如,将啤酒酵母和海藻酸钠混合均匀,经CaCl2处理形成凝胶颗粒,而酵母细胞则被固定在其内部.这种固定化方法称为 ______ (A.吸附法   B.包埋法   C.交联法   D.共价偶联法).
              (3)科研人员将表达乙肝病毒表面抗原的基因构建在重组质粒中,进而转入 ______ ,发酵生产转基因酵母乙肝疫苗.在构建重组质粒过程中,通过同种限制性核酸内切酶(-G↓AATTC-)切割得到的一个目的基因和一个开环质粒,共有 ______ (A.1 个    B.2 个    C.3个D.4 个)粘性末端.将重组质粒导入受体细胞的操作步骤完成以后,需要对所有受体细胞进行筛选,这是因为 ______ .该转基因技术实践应用的成功标志是 ______ .
              (4)转基因技术结合胚胎工程在高等动物育种中也有成熟应用.人们将经过基因改造的胚胎干细胞与 ______ 融合,得到 ______ ,并促使其在体外分裂发育成 ______ ,再通过胚胎移植获得后代.目前胚胎移植是胚胎工程中获得后代的唯一方法,其原因是 ______ .
              (5)胚胎干细胞具有重要的生产和临床医学价值.在培养胚胎干细胞时,首先要在培养皿底部制备一层细胞,称为 ______ ,其作用是 ______ .
            • 4.
              请回答与动物细胞培养基胚胎工程有关的问题:
              (1)欲获得牛的单个体细胞,需用 ______ 处理动物组织,在体外培养时,通常需在培养液中添加 ______ 等天然成分.
              (2)获取的卵子需培养到 ______ 时期才能用于核移植,通过核移植获得的动物称为 ______ .
              (3)在胚胎分割技术中,需将牛囊胚的 ______ 均分,可利用囊胚的 ______ 细胞进行性别鉴定.
              (4)ES细胞在 ______ 上或含有抑制因子的培养基上培养时,不会发生分化;可用ES细胞分化出人造器官用于器官移植,优点是 ______ .
            • 5. 电影中,“蜘蛛侠”能产生高强度的蜘蛛丝,现实中的基因工程也创造出了“蜘蛛羊”,该羊的乳汁中含有蛛丝蛋白,高强度的蛛丝蛋白可用于许多重要的特种工业领域.请回答:
              (1)实验中,通常用ES细胞作为目的基因的受体细胞,这是因为ES细胞在功能上具有 ______ 特征.这种细胞一般可以从哺乳动物的 ______ ______ 中分离出来.
              (2)在培养重组细胞时,为了维持不分化的状态,在培养液中要加入 ______ .为防止杂菌污染,可以在细胞培养液中添加一定量的 ______
              (3)胚胎移植时,通常将早期移植到同种且 ______ 与供体相同的动物体内,受体对外来胚胎基本上不发生 ______ .正常发育后产出“蜘蛛羊”,这种生殖方式为 ______ .若需要一次产生两头转基因“蜘蛛羊”,可将 ______ 阶段的胚胎进行分割.
              (4)科学家为保证乳汁中有蛛丝蛋白,应该用 ______ 技术,先检测蛛丝蛋白基因是否整合到了染色体上.
            • 6. 白血病是由于造血干细胞增殖分化异常而引起的恶性增殖性疾病.目前治疗白血病的主要方法是骨髓移植,但骨髓配型的成功率较低,大大限制了白血病的治疗.随着基因工程的日渐兴起,迎来了基因治疗白血病的曙光.请回答下列相关问题:
              (1)骨髓移植必须进行骨髓配型实验,原因是 ______ .目前,临床上通常通过使用 ______ 来提高造血干细胞移植的成活率.
              (2)造血干细胞移植之前先要进行培养.动物细胞培养一般分为 ______ ______ 两个阶段.对于培养的环境条件,除需要适宜的温度、无菌无毒等以外,还要向培养液中通人氧气和二氧化碳,通人氧气的目的是 ______ ,通人二氧化碳的目的是 ______ ;对子所用的培养液,应定期更换,其目的是 ______
              (3)在进行细胞移植前,有时需对移植的细胞进行基因改造.要了解基因改造是否成功,可在分子水平上检测是否翻译成了相应的蛋白质,常用的方法是 ______
              (4)上述使用的正常细胞,通常为 ______ 代以内,以保持细胞正常的二倍体核型.
              (5)哺乳动物的胚胎干细胞是从 ______ 中分离出来的一类细胞,可以在体外被诱导 ______ 形成新的组织细胞,这使科学家进一步培育人造骨髓成为可能.
            • 7. 请回答下列现代生物科技问题:
              (1)基因工程的工具之一限制酶主要是从 ______ 中分离纯化出来的.将目的基因导入受体细胞内,并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程称为 ______ ,从分子水平检测目的基因是否翻译成蛋白质的方法是 ______
              (2)将目的基因导人动物细胞培育转基因动物常用的受体细胞是 ______ ,经早期胚胎培养和 ______ ,使其发育成具有新性状个体.
              (3)胚胎干细胞是由早期胚胎或原始性腺中分离出来的一类细胞,在功能上具有 ______ ,在 ______ 细胞上或在添加抑制因子的培养液中培养可以增殖而不发生分化.
              (4)转基因产品的安全性问题一直是争论的焦点,原因之一是由于科学发展水平的限制,目前科学家对基因的 ______ 、基因间的相互作用以及基因的调控机制等都了解的相当有限.
            • 8. Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞.科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗.其技术流程如图:

              (1)步骤①中所选的卵母细胞应处于 ______ 期.
              (2)步骤②中,重组胚胎培养到囊胚期时,可从其 ______ 分离出ES细胞,ES细胞在形态上表现为 ______ 的特点.
              (3)步骤③中,需要构建含有Rag2基因的 ______ .可以根据Rag2基因的核苷酸序列设计合成 ______ ,利用 ______ 技术扩增Rag2基因片段.用HindⅢ和PstⅠ限制酶分别在目的基因所在DNA片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段.为将该片段直接连接到表达载体,所选择的表达载体上应具有 ______ 酶的酶切位点.
            • 9. “今又生”是我国为数不多的首创基因治疗药物之一,其本质是利用腺病毒和人P53基因(抑癌基因)拼装得到的重组病毒.人的P53蛋白可对癌变前的DNA损伤进行修复,使其恢复正常,或诱导其进入休眠状态或细胞凋亡,阻止细胞癌变.“今又生”的载体采用第一代人5型腺病毒,其致病力很弱,其基因不整合到宿主细胞的基因组中,无遗传毒性;载体经基因工程改造后,只对细胞实施一次感染,不能复制,不能污染.请回答下列问题:
              (1)在“今又生”的生产中,为了获得更高的安全性能,在载体一般应具备的条件中,科学家选择性地放弃了一般载体都应该具有的 ______ 特点.检测P53基因的表达产物,可以采用 ______ 技术.
              (2)如果要大量扩增P53基因,一般采用 ______ 技术,该技术中需使用的一种特殊的酶是 ______ .除此之外,获得目的基因还可以采取的方法有:化学方法直接人工合成和 ______
              (3)在研究中如果要获得胚胎干细胞,则胚胎干细胞可来源于囊胚的 ______ 或胎儿的原始性腺,也可以通过 ______ 技术得到重组细胞后在进行相应处理获得.在哺乳动物早期发育过程中,囊胚的后一个阶段是 ______
            • 10. 胚胎干细胞(ES细胞)在基础生物学、畜牧学和医学上都具有十分重要的价值,胚胎干细胞的应用前景吸引着众多科学家投入到这一研究领域中.根据相关知识,回答下列问题:
              (1)哺乳动物的胚胎干细胞(ES细胞)是由 ______ 或原始性腺中分离出来的一类细胞,在功能上具有 ______ ,即可以分化为成年动物体内任何一种组织细胞.
              (2)ES细胞液是研究体外细胞分化的理想材料,ES细胞在 ______ 细胞上能维持不分化的状态.在培养液中加入 ______ 可诱导ES细胞向不同类型的组织细胞分化.
              (3)ES细胞的另一个重要的应用前景为体外诱导分化,从而培育出人造组织器官,进而解决临床上存在供体器官不足和 ______ 问题.此外科学家还试图用基因工程的方法对动物器官进行改造:向器官 ______ (供体/受体)基因组中导入某种调节因子,以抑制 ______ (抗原/抗体)决定基因的表达或设法除去该基因,再结合 ______ 技术,培育出没有免疫排斥反应的转基因动物器官.
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