如下图为微生物的实验培养和纯化醋酸菌的部分操作步骤。请回答下列问题：

（1）微生物生长繁殖所需的主要营养物质有无机盐、水、________四类。①是制备培养基时________中的主要操作，该操作需使锥形瓶的瓶口通过火焰，目的是通过灼烧灭菌防止瓶口的微生物污染培养基，实验操作中的灭菌方法还有_________。

（2）该纯化醋酸菌的接种方法是______________；完成步骤④的操作，接种共需要________次灼烧处理。如果需要统计醋酸菌液中活菌的数目可以采用______________法进行接种；培养过程中，常选择菌落数在__________的平板统计计数。

（3）食草动物能够消化食物的关键是体内存在能合成__________酶的微生物能够降解纤维素，该酶是一种复合酶，它至少包括__________________。为检测纤维素分解菌的存在与否，还应加入__________染料，形成________色复合物，若产生__________，则证明有纤维素分解菌存在。

（一）酵母菌是日常生产和生活中应用极其广泛的一种微生物。下图是有关酵母菌的实验操作。请据图回答：

(1)实验中试管用滤膜（封口膜）封住，其目的是___________________________，A和C过程所采用的接种方法分别是______________和______________。

(2)为了扩增酵母菌，可将经D过程接种后的三角瓶置于______培养一段时间，若要测定三角瓶中酵母菌的细胞数，可借助显微镜和血细胞计数板进行计数，下列操作不正确的是____（A.压在方格线上的细胞只计左线和上线上的酵母菌数  B.用滴管取1滴培养液到血细胞计数板的方格区，盖上盖玻片进行计数 

C.如果酵母菌有芽体，因为没有分离成两个子体，要以一个计数 D.计数方格内酵母菌总数应不少于300个）。

(3)G过程利用酵母菌进行果酒制作，为适当提高果酒的生产速率，进气口应____________，制作好的果酒，还可继续生产果醋，用果酒制作果醋的原理是__________________________（写化学反应式）。

（二）玉米自交系（遗传稳定的育种材料）A具有高产、抗病等优良性质，但难以直接培育成转基因植株，为使其获得抗除草剂性状，需进行一系列试验。部分试验如图所示。

（1）为防止酶切产物自身环化，构建重组DNA分子需用2种限制性核酸内切酶，选择的原则是____。

①Ti质粒内，每种限制性核酸内切酶只有一个切割位点

②G基因编码蛋白质的序列中，每种限制酶只有一个切割位点

③酶切后，G基因形成的两个粘性末端序列不相同

④酶切后，Ti质粒形成的两个粘性末端序列相同

A．①③         B．①④        C．②③       D．②④

（2）下表是4种玉米自交系幼胚组织培养不同阶段的结果。据表可知，细胞脱分化时使用的激素是__________，自交系_____的幼胚最适合培养成愈伤组织作为转化受体，用愈伤组织做受体细胞是因为其细胞表达___________的能力强，图示目的基因导入受体细胞的方法是_____________。

（3）农杆菌转化愈伤组织时，T-DNA携带插入其内的片段转移到受体细胞。筛选转化的愈伤组织，需使用含________的选择培养基。

（4）转化过程中，愈伤组织表面常残留农杆菌，导致未转化愈伤组织也可能在选择培养基上生长。含有内含子的报告基因只能在真核生物中正确表达，其产物能催化无色物质K呈现蓝色。用K处理后出现蓝色的愈伤组织可能是无农杆菌附着的转化愈伤组织或________________________。

在生产研究上，常常需要进行微生物的培养和计数。回答下列与微生物的培养与利用有关的问题

（1）下图是利用______________法将微生物接种到固体培养基上，把混合的菌种逐步稀释分散获得______________菌落。接种后培养基应______________放在37℃恒温培养箱中进行培养。

分析下面培养基的配方：NaNO3、KH2PO4、NaH2PO4、MgSO4•7H2O、KCl、H2O。若此培养基用于筛选尿素分解菌，则应除去上述培养基成分中的________，并加入______________和________物质，以补充其生活所需的碳源和氮源。培养基中加入酚红作指示剂的原因是尿素分解菌能合成________将尿素分解为氨，使培养基pH发生改变，酚红由黄变红，使菌落周围呈现红色。

（3）三位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中细菌数量。在对应稀释倍数为10⁶的培养基中，取0.2ml稀释液涂布，得到以下统计结果：

甲同学涂布了1个平板，统计的菌落数是260；

乙同学涂布了三个平板，统计的菌落数是210、240和246，取平均值232；

丙同学涂布了三个平板，统计的菌落数是21、212和256，取平均值163；

在三位同学的统计中，____________同学的统计结果是相对准确可信的。按照该同学的结果，每毫升原液中的菌体数是______________。用这种方法测得的菌体数比实际活菌数量______________。

塑料袋造成的“白色污染”早已成为地球公害，塑料袋的自然分解需要20-1000年不等．2008年7月3日加拿大媒体报道：16岁的高中生丹尼尔-伯德从土壤中找到了一类假单胞杆菌，能将聚乙烯塑料的自然降解过程缩短至3个月，而且分解产物只有水和二氧化碳．伯德也因此被誉为“塑料袋的克星”．以下是伯德寻找到聚乙烯降解菌的大致过程．请回答：

（3）对培养基灭菌的常用方法是________________。接种前需要检测使用的培养基是否被污染，方法是__________________________。

（4）I号培养基属于______培养基，其作用是使目的菌能“脱颖而出”．如图采用的接种方法为______．

（5）使用Ⅱ号培养基的目的是使目的菌数目增多，若对目的菌进一步培养，则其增长呈____型曲线增长。Ⅱ号培养基中必须包含水、无机盐、______等基本营养成分．从物理性质来看，Ⅱ号培养基中________（填“不能”或“能”）添加琼脂．假设该同学发现培养基上细菌数目过多连成一片，说出一种可能的原因并提出合理的处理措施。原因：__________________________；

(2)在制备杨梅醋过程中，乙罐内填充的木材刨花应先经__________处理，然后加入含___________菌的培养液，使该菌附着在刨花上，再让甲罐中发酵完毕的杨梅酒流入乙罐进行杨梅醋发酵，请写出乙罐中生产杨梅醋的化学反应方程式_______________________。

(3)为了提高杨梅酒和杨梅醋的品质，更好地抑制其他微生物的生长，需向相应的发酵罐中加入优良的菌种。从野生菌群中分离纯化优良菌种时，最常用的接种方法有____________和____________。

在生产研究上，常常需要进行微生物的培养和计数。回答下列与微生物的培养与利用有关的问题：

（1）下图是利用______________法将微生物接种到固体培养基上，把混合的菌种逐步稀释分散获得单个菌落。接种后培养基应______________放在37℃恒温培养箱中进行培养。

（2）分析下面培养基的配方：NaNO₃、KH₂PO₄、NaH₂PO₄、MgSO₄•7H₂O、KCl、H₂O、琼脂。若此培养基用于筛选尿素分解菌，则应除去上述培养基成分中的________，并加入______________和_____________。培养基中加入酚红作指示剂的原因是尿素分解菌能合成________将尿素分解为氨，使培养基pH发生改变，使菌落周围呈现红色。

（3）三位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中细菌数量。在对应稀释倍数为10⁶的培养基中，取0．2ml稀释液涂布，得到以下统计结果：

甲同学涂布了1个平板，统计的菌落数是260；

乙同学涂布了三个平板，统计的菌落数是210、240和246，取平均值232；

丙同学涂布了三个平板，统计的菌落数是21、212和256，取平均值163；

在三位同学的统计中只有一位同学的统计结果是相对准确可信的，按照该同学的结果，每毫升原液中的菌体数是______________。

（4）实验结束后，使用过的培养基应该进行_____________处理后，才能倒掉。

（5）用这种方法测定密度，实际活菌数量要比测得的数量______，因为_______________． 

(1) 如上图所示,菌株A和B混合培养几小时后,把大肠杆菌洗涤后涂布在基本培养基的固体平板上,发现长出了若干野生型菌落,对此实验现象可作出如下假设:

① 不同大肠杆菌间遗传物质发生重组。

② ____________。 

(2) 为了探究上述假设①,有人设计了一种U型管(如图),中间用过滤器隔开,大肠杆菌不能通过,但培养液和营养物质可通过,实验如下。请补充相关实验内容:

实验步骤:

① 在U型管中加入________; 

② U型管两端各加入菌株A、菌株B,培养几小时;

③ 将U型管两端的大肠杆菌各自取出洗涤后涂布在____上,观察有无菌落。 

实验结果:________。 

实验结论:菌株A与菌株B之间遗传物质发生重组。

(3) 现有1 L水样,用无菌吸管吸取1 mL转至盛有9 mL无菌水的试管中,依次稀释至10³倍。各取0.1 mL已稀释10³倍的水样分别接种到三个培养基上培养,记录的菌落数分别为31、34、37,则每升原水样中大肠杆菌数为____。该数据理论上比细菌实际数目____。 

(4) 该实验中需要灭菌的是_____________。(至少写3个) 

根据相关信息，回答下列问题：

（1）筛选产乳糖酶的微生物时，宜用___________作为培养基中的唯一碳源。

（2）固定化酶常用的方法是________________________________________________

（3）科研人员用海藻酸钠作为包埋剂来固定乳糖酶，以研究固定化酶的相关性质和最佳固定条件。研究结果如下图所示。酶活力为固定化酶催化化学反应的总效率，包括____________和____________等方面，根据图示信息，在____________的条件固定化酶催化效果较好。

（4）实验者还进行了海藻酸钠固定化乳糖酶及化学结合法固定化乳糖酶的催化效果的比较研究，发现用____________法固定化酶的效果更好，原因可能是_________________________ 

（5）工业生产中，使用固定化酶和使用游离酶相比，优点是_________________________ 

如表是某微生物固体培养基的配方。请回答下列问题：

    （1）根据培养基的成分分析，所培养微生物的同化作用类型是____________，表中的“？”应该是________________________。

    （2）如图所示在用稀释涂布平板法进行接种时，不能得到的是图____________。统计饮用水中大肠杆菌数目时，____________（填“需要”或“不需要”）设置对照，原因是___________________。

    （3）若要分离分解尿素的细菌需将培养基中的____________换成____________；若要鉴定分解尿素的细菌还需在培养基中添加____________指示剂。

下图表示微生物培养与利用的相关实验技术，请回答下列问题：

（1）在培养基的制备过程中，A表示      ，B表示灭菌，常用的方法是      。

（2）D是微生物接种最常用的方法之一，它包括         和         两步操作。

（3）在筛选土壤中分解尿素的细菌时，所用培养基以尿素作为       ；在统计菌落数目时，一般选择菌落数在       的平板进行计数。若要对分离的菌种作进一步的鉴定，可在选择培养基中加入       指示剂，若指示剂变       ，则可初步鉴定该种细菌能够合成       ，分解尿素。