[生物——选修1：生物技术实践]

金黄色葡萄球菌具有高度耐盐性，在血平板(培养基中添加适量血液)上生长时，可破坏菌落周围的红细胞，使其褪色。下面是某研究小组测定自来水中金黄色葡萄球菌浓度的实验操作。请回答下列问题：

（1）金黄色葡萄球菌的培养基为7.5％NaCl牛肉膏蛋白胨培养基，此培养基能为金黄色葡萄球菌的生长提供碳源、氮源及水和无机盐。培养基中加入7.5％NaCl利于金黄色葡萄球菌的筛选，原因是_____________________________________________。

（2）上述培养基的灭菌方法是_____________。在制作血平板时需等平板冷却后，方可加入血液，以防止___________。血平板在使用前，需置于恒温培养箱中一段时间的目的是________________。

（3）取10mL自来水样，加入_____mL无菌水稀释成10^-1稀释自来水样，依次操作，制作10^-2、10^-3、10^-4稀释自来水样。

（4）将0.1 mL 10^-l～10^-4的四个稀释样液，分别接种到4组(每组3个)血平板上的方法是__________。在血平板上，金黄色葡萄球菌菌落的周围会出现___________。若在10^-3组的3个血平板上，金黄色葡萄球菌菌落数分别为39、38和37，则每升自来水中的活菌数约为____________。  

[生物——生物技术实践]

幽门螺杆菌是栖息在胃粘膜的革兰氏阴性螺旋状杆菌，具有强的脲酶（能降解尿素）活性，其代谢类型属于异养厌氧型（氧气浓度在5％～8％左右适合，完全无氧或空气环境中无法生存），这种细菌是慢性胃炎、甚至胃癌发生的元凶。

（1）为了对胃炎患者的胃粘膜提取物稀释样液中幽门螺杆菌进行分离，应将样品稀释液接种于以________为唯一氮源的固体选择培养基上，接种后的培养皿在________条件下，倒置于37℃的恒温培养箱中培养。

（2）分离培养幽门螺杆菌时必须进行无菌操作，包括培养基和各种器皿都必须是无菌的，培养基常用的灭菌方法有________。

（3）欲检测上述培养基中是否具有幽门螺杆菌这类细菌的存在，向培养基中添加酚红指示剂，培养基中菌落周围显示红色环带，即表明这类细菌的存在，这种检测过程的机理是________。

（4）采用液体培养基培养幽门螺杆菌，为了测定菌液中的菌体数量，一般采用________法将一定量的菌液接种到固体培养基上，统计________的数量来代表菌体数，这种检测方法测得的结果一般偏________（填“大”或“小”），原因是________。

【生物技术实践】苹果园广泛使用的一种除草剂（含氮有机物）在土壤中不易被降解，长期使用可污染土壤．为修复被该除草剂污染的土壤，科学工作者按甲图程序选育能降解该除草剂的细菌（已知该除草剂在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明）。

（1）制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行稀释处理。现有一升土壤浸出液，用无菌吸管吸取1mL液样至盛有9mL无菌水的试管中，再稀释10³倍．各取0.1mL已稀释10³倍的水样分别接种到三个培养基上培养，记录的菌落数分别为55、56、57，则每升原土壤浸出液样中菌体数为______。

（2）科学工作者为修复被该除草剂污染土壤的目的来选择细菌，所用培养基应该_______

_____________。

（3）接种技术的核心是_________________。在划线接种时，连续划线的目的是将聚集的菌种逐步_______________，培养时，只有很少菌落出现，大部分细菌在此培养基上不能生长的主要原因是________________或有氧条件抑制了这些细菌的生长。

（4）在培养基上形成的菌落中，无透明带菌落利用的氮源主要是__________，有透明带菌落利用的氮源主要是______________，据此可筛选出目的菌。实验结果如乙图显示的A～E五种菌株中，___________是最理想菌株。

[生物——选修1：生物技术实践]

分离筛选降解纤维素能力强的微生物，对于解决秸秆等废弃物资源的再利用和环境污染问题具有理论和实际意义。研究人员从土壤和腐烂的秸秆中分离筛选出能高效降解纤维素的菌株，并对筛选出的菌株进行了初步研究。

(1)对培养基进行灭菌的常用方法是        。为在培养基表面形成单个菌落，若以接种环为工具，则用        法进行接种。

(2)先将样品悬液稀释后涂在放有滤纸条的固体培养基上进行筛选得到初筛菌株。再将初筛菌株接种到以         为唯一碳源的培养基培养2～5天，加入       溶液后，依据出现的颜色反应进行筛选，观察菌落特征并测量          。同时将初筛菌株制备成的菌液放入加有滤纸条的液体培养基中，恒温振荡培养8天，观察滤纸条的破损情况。结果见表。由表可知，8种菌株中1、3、7号菌株产酶能力较强，你的解释是               。

 注:①DP = (D / d) 2，其中d表示菌落直径(cm)，D表示水解圈直径(cm)

      ②“+”为滤纸边缘膨胀；“+ +”为滤纸整齐膨胀并弯曲；“+ + +”为滤纸不定形；“+ + + +” 为成团糊状；“+ + + + +”为半清状 (3)为进一步研究1、3、7号菌株对秸秆降解的效果。分别用这三种菌株对秸秆进行处理，并在第5天和第10天对秸秆和秸秆中含有的纤维素、半纤维素以及木质素等组分的降解情况进行了测定。结果见下图。

 由图分析可知，三种菌株对        的降解最强，与第5天结果相比，第10天秸秆各组分中            的降解率变化最大。

【生物－选修1：生物技术实践】

现在大力提倡无纸化办公，但是每年仍然不可避免的产生了大量废纸，其主要成分是木质纤维，人类正努力将其转化为一种新的资源——乙醇。下图是工业上利用微生物将纤维素

（1）上述工作流程中①环节需要的微生物大多分布在＿＿＿＿＿＿的环境中。在分离分解纤维素的微生物时，土壤取样后，通过选择培养可以＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿，在筛选①环节需要的微生物时，可采用＿＿＿＿＿＿（方法），通过＿＿＿＿＿＿直接对微生物进行筛选。

（2）可利用＿＿＿＿＿＿技术，使②中的酶能够重复利用。

（3）生产中可以满足④环节的常见菌种是＿＿＿＿＿＿，④过程要注意对接种器材进行＿＿＿＿＿＿。为了确保⑤环节成功，后期要注意发酵装置＿＿＿＿＿＿。

37．[生物－选修1：生物技术实践]
生物技术与我们的生活息息相关。请根据所学知识，回答下列有关问题：
（1）在泡菜腌制过程中，亚硝酸盐含量会发生变化，测定亚硝酸盐含量的方法是________。亚硝酸盐在特定的条件下会转变为________，进而可能引发人体细胞癌变。
（2）制作葡萄酒的菌种主要来源是________。检验是否产生酒精可在________条件下，用________试剂检测。
（3）若要提高果酒的产量，发酵过程中要控制好哪些条件？________（至少写出两项）。
（4）为获得一种能高效降解有机磷农药的细菌，应使用含有________的选择培养基；使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌处理，目的是________。

【加试题】回答下列（一）（二）小题

（一）随着社会的发展，石油产品的使用越来越多，石油烃污染也越来越严重。为了筛选出分解石油烃能力强的微生物，人们不断地进行研究。下图为获取能分离出分解石油烃的微生物的土壤样品后的研究过程，请回答有关问题：

（1）获取土壤样品的取样地点最好选在  。为了能有效地分离出分解石油烃的微生物，过程①④所用的选择培养基只能以石油烃作为唯一碳源,其原因是  。

（2）根据⑤平板上生长的菌落，对④进行接种采用的方法是  ，若发现在⑤中无法区分菌落，可以将图中③取出的菌液    。

（3）纯化菌株时,通常使用的划线工具是  。采用  方法对其进行灭菌。划线的某个平板培养后,第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落,第二划线区域所划的第一条线上无菌落,其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误是  （写出一点即可）。

（二）毛角蛋白Ⅱ型中间丝（KIFⅡ）基因与绒山羊的羊绒质量密切相关。获得转KIFⅡ基因的高绒质绒山羊的简单流程如图。

（2）在过程②中，用  酶处理将皮肤组织块分散成单个成纤维细胞。把一个单细胞从群体中分离出来单独培养，使之繁衍成一个新的细胞群体的技术，叫细胞克隆。未经克隆化的细胞系具有  性。由于人们对动物细胞所需营养物质还没有完全搞清楚，因此在培养细胞时需在培养基中加入一定量的  ，在培养过程中应将培养瓶置于  培养。

（3）若要获得多只相同的转基因山羊，可对图中早期胚胎进行  后进行胚胎移植。

（4）下列有关转基因山羊培育过程的叙述，错误的是  。

A.图中重组细胞的细胞核来自导入目的基因的细胞

B.重组细胞最初分裂时开始进行DNA复制和基因的转录

C.将早期胚胎（如早期囊胚）植入到代孕母羊的输卵管或子宫角部位

D.如果KIFⅡ基因的序列是已知的，则可用化学方法合成或用聚合酶链式反应扩增该基因

  （1）接种前要对培养基进行____________处理。在整个微生物的分离和培养过程中，一定要注意在____________条件下进行。

  （2）不同微生物的生存环境不同，获得理想微生物的第一步是从适合的环境采集菌样，然后再按一定的方法分离、纯化。如培养纤维素分解菌的菌样应从___________环境中采集。

  （3）从土壤中筛选纤维素分解菌需要配制          培养基，该培养基中需要加入纤维素粉作为             。

  （4）经过梯度稀释后，要将样品均匀涂布在用于鉴别纤维素分解菌的培养基上，在该培养基中需要加入的特殊染料是            ，当形成菌落以后可以根据菌落周围是否产生_____________来筛选纤维素分解菌。某同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是____________________。

  （5）下图是利用        法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。

  （6）关于上图的操作方法和结果，叙述正确的是         。

A.操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌

B.划线操作须在火焰上进行

C.在5区域中才可以提取到所需菌落

D.在1、2、3、4、5区域中划线前后都要对接种环灭菌

 26．2（共15分）下图表示菊花的嫩枝和月季的花药离体培养过程，请据图回答下面的问题。

（7）对于菊花来说，其组织或细胞在      条件下可以发育成完整的植株。在选取菊花茎段时要取       的嫩枝来进行组织培养。对月季来说，适宜花粉培养的时期是花粉应处于        期，为确定该花粉是否处于该时期，最常用的方法是              。

   （8）在培养菊花嫩枝组织和月季花粉的培养基中都要加入一定的植物激素，常用的植物激素有             ；在材料消毒时都要先用体积分数为           浸泡，后用质量分数为0.1%的          消毒。

     （9）月季的花药培养与菊花的嫩枝组织培养不同，从植株产生的途径来说，花粉植株产生的途径除了图中所示外，还可以通过       阶段发育而来，这两种发育途径的差别主要取决于             。

     （10）不同植物对各种条件的要求往往不同，进行菊花组织培养一般将温度控制在   ℃，并且对光照的控制为          。

   【选修Ⅲ  现代生物科技专题】(两道大题，选做选修Ⅰ不做此部分)

     目前，现代生物技术已经广泛地应用于工业、农牧业、医药、环保等众多领域，产生了巨大的经济和社会效益。请回答下列生物技术方面的问题：

(1)利用乳酸菌制作泡菜时，往往会加入陈的“泡菜水”，作用是________，若泡菜特别咸而不酸，最可能的原因是_________________________。

(2)微生物培养过程中，获得纯净培养物的关键是________，其中对培养皿进行灭菌常用的方法是________________________。

(3)柑橘组织培养的操作程序是①________；②________；③接种；④培养；⑤移栽；⑥栽培。柑橘皮可以用提取橘皮精油，橘皮在________中的浸泡时间为10h以上，并且橘皮要浸透，这样才会得到高的出油率。

(4)植物芳香油的提取可采用的方法有压榨法、蒸馏法和_____。

(1)江南某橘子盛产地想建立一个大型的果酒、果醋加工厂，需要的发酵菌种是_________和________。分离纯化这两种微生物的常用方法是：将10³-10⁷倍的稀释液分别吸取0.1mL加入到固体培养基上，用涂布器将菌液铺平。这种接种方法称为_________________  。

(2)提取桔皮的胡萝卜素过程中，萃取加热时需安装冷凝回流装置，其目的是________________________________________________________________________。

(3)四川一果汁加工厂在制作橘子汁的过程中发现果汁有些浑浊，为提高出汁率，可加入适量的________________使果汁变得澄清。

(4)培养外植体的培养基中常用的凝固剂是________________。培养基中的生长素和细胞分裂素用量的比值____________(填“高”或“低”)时，有利于芽的分化。对培养基彻底灭菌时，应采取的灭菌方法是______________________________________________。