“创卫”是创建卫生城市的简称。“卫生城市”是一个城市综合功能和文明程度的重要标志。某同学欲利用所学习的微生物培养知识，通过实验证明痰液中含有细菌，来倡导同学们不要随地吐痰，为“创卫”添一份力。请回答下列问题：

(1)欲培养细菌必须先制备可供细菌生长的培养基。实验室中常用牛肉膏蛋白胨固体培养基来培养微生物，该培养基的组成成分包括牛肉膏、蛋白胨、NaCl________、H₂O等；该培养基中微生物所需的氮源来自________，制备该培养基的步骤是：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板，其中灭菌常用的方法是_______________________________________________；培养基灭菌后，需要冷却到________ ℃左右才能倒平板，等平板冷凝后，还需要将平板倒置，主要目的是___________________________________________。

(2)为了使实验更有说服力，某同学设置空白对照组和若干实验组，其中对照组的作用是____________________________________________________________。若在某次调查中，某一实验组平板上的平均菌落数为39个，而空白对照组的平板上出现了9个菌落，这种结果说明在此次调查中出现了________现象。

(3)某同学利用稀释涂布平板法来统计样品中细菌的数目，统计结果往往比实际细菌的数目要低，主要原因是：____________________________________。

（每空1分，共7分）

传统发酵技术包括果酒、腐乳、泡菜的制作等，丰富了餐饮生活，根据下列要求回答问题：

（1）腐乳制作的流程是：让豆腐上长出________→加盐腌制→加卤汤装瓶→密封腌制。把腐乳的制作过程看作是微生物的培养过程，则从物理性质看，制作腐乳的培养基属于__________。

（2）在制作果酒实验中，某同学为研究发酵罐中酵母菌的生长状况，要取样统计分析，并测定pH。判断取样先后顺序的主要依据是_____________。

（3）制作泡菜时，若菜坛有裂缝，即使其他操作正确规范，实验也会失败。说明该种微生物是________________。

（4）传统发酵技术中，都没有接种菌种，也没有严格的灭菌，但都可以得到相应的发酵产物。其菌种来源于____________________；
（5）某同学制作果酒时，在发酵后期向发酵液中通入空气，并将发酵液置于适宜温度的环境中，结果发现发酵液中有醋酸菌出现，这类微生物在糖类缺乏时可以使______转化为_______，后者再转化为醋酸。

（1）按细胞结构分类，金黄色葡萄球菌属于_________生物，从培养过程分析，金黄色葡萄球菌可进行____________呼吸。

（2）用质量分数为7.5%的NaCl肉汤培养基进行选择培养的主要目的是_________________。

（3）操作中在血平板上的接种方法是______________，接种操作前后需要对接种工具进行_____灭菌。

（4）在制备血平板时需将pH调节至________（填“微酸性”或“微碱性”）后灭菌，待培养基____________后，再加入适量血液。按培养基功能分类，血平板属于________培养基。

（5）经多次规范操作、重复实验，血平板上均出现______________________的菌落，初步证明鲜牛奶中存在金黄色葡萄球菌，但鲜牛奶供应商仍认为此菌并非鲜牛奶所携带，因此，要对本操作进行完善，完善的方案是________________________________________________。

研究发现柚皮精油和乳酸菌素(小分子蛋白质)均有抑菌作用，两者的提取及应用如图所示。请回答下列问题：

(1)通常采用压榨法提取柚皮精油，该过程得到的糊状液体可通过布袋________除去其中的固体杂质。为了提高出油率，需要将新鲜的柚皮进行________处理，并用石灰水浸泡，作用是________________________________________________________________________。

(2)筛选乳酸菌A时可选用________________________法接种。对新配制的培养基灭菌时常用的灭菌方法是________________。培养乳酸菌A的培养基中通常含有________、________、水和无机盐。

(3)抑菌实验时，在长满致病菌的平板上，会出现以抑菌物质为中心的透明圈。可通过测定透明圈的________来比较柚皮精油和乳酸菌素的抑菌效果。

回答下列(一)、(二)小题：

    (一)牛奶是微生物生长的良好培养基。生鲜牛奶中的微生物情况反映了奶牛的健康状况，也影响奶制品的运输和贮藏；牛奶在饮用前都要经过巴氏消毒，以杀死有害微生物。

    (1)为检测消毒前后牛奶中细菌含量变化情况，做如图操作。用无菌吸管从三角烧瓶中吸取1 mL生牛奶稀释液至盛有9 mL无菌水的试管中，如此重复3次，将10 mL生牛奶稀释到10^－4浓度后，取0.1 mL滴在培养基上。

    ①将牛奶稀释液滴加在培养基上进行涂布，应选择的涂布工具是_______________。

    ②该涂布工具最合适的灭菌方法是_______________________。

    (2)图中所示方法为稀释培养法，按此方法培养得到的3个培养皿中菌落数分别为25个、23个、24个，则生牛奶中每毫升含细菌数为______个。

    (3)消毒后牛奶中绝大部分细菌被杀死，若用稀释平板法检测消毒后牛奶是否含有细菌，则在操作步骤上应作什么改动?______________________。

    (4)涂布结束后将培养皿______，在37℃______________中培养。

    (5)细菌种群进化过程中，起主要作用的变异是______。

    A．环境条件    B．基因重组    C．基因突变    D．染色体变异

    (二)兔肝细胞中的基因E编码代谢甲醛的酶，拟利用基因工程技术将基因E转移入矮牵牛中，以提高矮牵牛对甲醛的代谢能力，请回答：

    (1)从兔肝细胞中提取mRNA，在_________酶的作用下形成互补DNA。然后以此DNA为模板在体外利用____________反应大量扩增，得到基因E。在相关酶的作用下，将基因E与Ti质粒连接在一起，形成___________，再导入用氯化钙处理的_______________，侵染矮牵牛叶片。将被侵染的叶片除菌后进行培养，最终得到转基因矮牵牛。其中培养过程正确的是________________(A．叶片在含合适浓度生长素的培养基上分化形成愈伤组织  B．愈伤组织在含细胞分裂素和生长素配比较高的培养基上形成芽  C．再生的芽在细胞分裂素含量高的培养基上生根  D．愈伤组织在含合适浓度植物生长调节剂的培养基上脱分化形成再生植株)。

    (2)取转基因矮牵牛叶片，放入含MS液体培养基和适量浓度甲醛且密封的试管中，将试管置于__________上，进行液体悬浮培养。一段时间后测定培养基中甲醛的含量，以判断基因E是否在转基因矮牵牛中正常表达。培养过程中液体培养基的作用：一是提供营养；二是__________，从而使叶片保持正常形态。

在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。实验基本步骤如下：
―→―→―→
请回答下列有关问题：
(1)配制培养基时，各成分含量确定的原则是________                                   ________________。不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进行的是__________________________________。
(2)倒平板的适宜温度是50℃左右，原因是_______________________________。待平板冷凝后，要将平板倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止________________________。
(3)纯化菌株时，若使用稀释涂布平板法进行接种，应选择的涂布工具是图中的________；若使用平板划线法进行接种，应选择的接种工具是图中的________。

(4)划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，第二划线区域所划的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有________________________________________________________________________。
(5)若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及培养物必须经过________处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。

胡萝卜素是常用的食品色素，可以用于治疗某些疾病，甚至有使癌变细胞恢复成正常细胞的作用，因此提取胡萝卜素具有重要的意义。胡萝卜素可以从植物中提取和养殖的岩藻中获得，还可以利用微生物发酵产生。如图为提取胡萝卜素的流程示意图，请回答下列问题：

―→―→―→―→―→―→

(1)胡萝卜素在人体内可以被氧化成________，有利于治疗夜盲症、干皮症等疾病；炒胡萝卜时要多加________，以利于胡萝卜素的溶解，从而更易被人体吸收。工业生产上，用养殖的岩藻作为原料获得胡萝卜素时，________(填“需要”或“不需要”)将新鲜的岩藻干燥。

(2)新鲜胡萝卜干燥时温度不能太高、时间不能太长，目的是________________________________。萃取时一般选用的萃取剂是________，影响萃取效率的因素有_____________________________________________________________________(答出三项即可)。萃取液浓缩前需进行过滤，其目的是_________________。鉴定萃取液中是否含有胡萝卜素时，通常可采用________法，并以________________样品作为对照。

(3)利用微生物发酵生产胡萝卜素时，培养微生物的培养基中的蔗糖和硝酸盐可以分别为微生物提供________和________。采用________法接种时需要先灼烧接种环，以防止杂菌污染。

为了获得β-胡萝卜素产品，某小组开展了产β-胡萝卜素酵母菌的筛选与色素提取实验。请回答下列问题：

(1)实验用的培养皿常用的两种灭菌方法是________________________________；为了减少灭菌后器皿被污染，灭菌前应该________________。

(2)为了筛选出酵母菌，培养基中添加了青霉素，其目的是________________________________________________________________________。

(3)下图是灭菌锅及其局部剖面示意图，图中甲、乙、丙指示的依次是________。(填序号)

①安全阀、放气阀、压力表　②放气阀、安全阀、压力表

③安全阀、放气阀、温度表　④放气阀、安全阀、温度表

(4)为了将分离到的菌株纯化，挑取了菌落在3块相同平板上划线，结果其中一块平板的各划线区均未见菌生长，最可能的原因是________________。

(5)为增加β-胡萝卜素提取量，在研磨酵母细胞时，添加石英砂的目的是___________________________________________________________；研磨时________(填"需要"或"不需要")添加CaCO，理由是______________________________________。

下表是筛选异养型细菌的培养基配方。回答下列问题：

(1)苯胺是致癌物质，土壤中有分解苯胺的异养型细菌，若要筛选此异养型细菌，则此培养基中的成分X除了为目的菌提供能源外，还能提供_________，该培养基从物理性质看属于________培养基。中学实验室中对培养基进行灭菌的常用方法是____________。接种前，用灭菌后未接种的培养基培养一段时间，观察是否形成菌落，目的是________________________________________________________________________。

(2)如图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图，获得图A效果的接种方法是____________________。运用获得图B效果的方法接种时，操作上应注意每次划线前要灼烧________。

(3)在以尿素为唯一氮源的培养基中加______________可初步鉴定该种细菌能否分解尿素；在筛选能够分解纤维素的微生物过程中，常用到________染色法。

LB液体培养基和LB固体培养基是微生物实验室中较常用的一种培养基，其配方为10 g/L蛋白胨、10 g/L酵母提取物、5 g/L氯化钠等，主要用于培养细菌、扩增菌种数量。某研究组开展了氧气对微生物生长、繁殖的影响实验，请回答下列问题：

(1)要配制供微生物生长、繁殖的培养基，其中一般都含有______________和无机盐等。有些微生物对某些特殊营养物质及______________等条件有特殊要求。

(2)将各类微生物用______________从斜面培养基接种于灭菌过的LB液体培养基中，进行扩大化培养。

(3)将含有LB固体培养基(LB液体培养基中加15 g琼脂粉，刚配好，尚未凝固)的锥形瓶放入______________中进行灭菌。灭菌完成后将锥形瓶取出，待温度下降到60 ℃(不烫手的温度)时，用______________擦拭桌面和双手，在超净工作台中的______________旁将锥形瓶中的LB培养基分装到一系列试管中，并做标记。

(4)当试管温度下降到40 ℃(培养基还是液态)时，用灭菌过的移液器吸取0.1 mL的各类微生物悬液加入相应试管中并封口，双手快速搓动试管，使菌种均匀分布于培养基内后迅速将封口的试管放置在________条件下使培养基凝固。