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            • 1.

              石油是人类重要的化工原料之一,其在给人类生产生活带来便利的同时也对陆地和海洋造成污染,下图是科研工作者分离能分解石油污染物的假单孢杆菌的过程。请根据流程图回答下列问题:

              土壤取样→A→梯度稀释→涂布到培养基上→筛选目的菌株(假单孢杆菌)


              (1)A过程为___________,目的是增加假单孢杆菌的浓度,该培养基中应当以___________为唯一碳源。该实验过程中需要设置完全培养液对照组,将菌液稀释相同的倍数,对照组培养基上生长的菌落数目应明显___________(填“多于”或“少于”)选择培养基上的菌落数目,从而说明选择培养基具有筛选作用。

              (2)实验中需要用___________对菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同浓度的菌液分别滴加到固体培养基的表面,用___________(器具)涂布均匀并进行培养,以便获得单个菌落。

              (3)若实验中用103倍的0.1mL的稀释液分别涂布三个平板,培养后分别形成了98、100和102个菌落,则每毫升原样液中含有假单胞杆菌___________个,实际值一般要比该测量值偏大的原因是___________。

            • 2.

              下列是与微生物培养有关的问题,请回答:

              ⑴某细菌固体培养基的组成成分是、葡萄糖、尿素、琼脂和蒸馏水,其中碳源是_____,氮源是_____。已知只有能合成脲酶的细菌才能在该培养基上生长,该培养基属于_____培养基。按照化学成分分类,该培养基属于_____培养基。从同化作用类型看,用该培养的细菌属于_____

              ⑵一小组采用稀释涂布平板法检测水样中细菌含量.在涂布接种前,随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间,这样做的目的是 ______ ;然后,将1mL水样稀释100倍,在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液;经适当培养后,3个平板上的菌落数分别为39、38和37,据此可得出每升水样中的活菌数为 ______ .
              (3)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌,操作时,接种环通过 ______ 灭菌,在第二次及以后的划线时,总是从上一次划线的末端开始划线,这样做的目的是 ______ .
              (4)纯化微生物,可以用_______________方法
            • 3. 金黄色葡萄球菌是一种具有高度耐盐性的微生物,可引起人类肺炎、肠炎等疾病。金黄色葡萄球菌在血平板(培养基中添加适量血液)上生长时,可破坏菌落周围的红细胞,使其褪色。下图为定性检测鲜牛奶中是否存在金黄色葡萄球菌的操作流程,请回答相关问题。

              (1)按细胞结构分类,金黄色葡萄球菌属于______生物,从培养过程分析,金黄色葡萄球菌可进行_______呼吸。

              (2)7.5%NaCl肉汤培养基可为微生物提供的营养成分包括________________,用7.5%NaCl肉汤培养基进行选择培养的主要目的是______________________。

              (3)操作中在血平板上的接种方法是____________,接种操作前后需要对接种工具进行___________灭菌。

              (4)在制备血平板时需将pH调节至________(“微酸性”或“微碱性”)后灭菌,待培养基冷却后,再加入适量血液。经多次规范操作、重复实验,血平板上均出现_____________________的菌落,初步证明鲜牛奶中存在金黄色葡萄球菌,但鲜牛奶供应商仍认为此菌并非鲜牛奶所携带,因此要对本操作进行完善,完善的方案是_______________________________。

            • 4.

              土壤中含有大量的难溶性磷酸盐,为了从土壤中筛选出能够将难溶性磷酸盐转化为植物能吸收的可溶性磷的优良解磷菌株,以便将其添加到有机肥中,改善植物磷元素供应。科研人员进行如下实验:


                                             图1                                                               图2

              实验原理:固体培养基中难溶性磷酸盐在微生物的作用下溶解,会在菌落周围形成透明圈(如图),透明圈直径(D)与菌落直径(d)的比值(D/d)代表微生物溶解磷的能力大小。实验步骤:

                  步骤1 取某地区土样5 g制得土壤溶液后稀释,取稀释液1 mL接种到基础培养基A上,在适宜温度下培养72 h。                  

                  步骤2 在基础培养基A上用接种环挑取代表性菌落再次接种,培养3~4 d后观察菌落特征和透明圈的大小。

              菌株

              透明圈直径(D)

              菌落直径(d)

              D/d

              M-3-01

              18.8

              12.3

              1.5

              B3-5-6

              20.7

              8.0

              2.6

              T1-4-01

              9.1

              6.5

              1.4

              (1)从物理形态看,培养基A属于________培养基。培养基中磷源应该是_____________。

              (2)步骤1中接种方法是________,步骤2中接种环的灭菌方法是________。

              (3)根据实验结果可以确定溶解磷能力最强的菌株是________。

              (4)为进一步测定初步筛选的三种菌株实际溶解磷的能力,研究人员将它们接种到基础培养基B中,并在37 ℃、200 r·min-1摇床培养,定期取上清液,测定溶液中可溶性磷含量,得到图2所示曲线。

              ①用摇床进行培养的好处是____________________、___________________。

              ②结果表明最优良的解磷菌株是________________________________________。

            • 5.

              牛奶富含蛋白质长期饮用有助于增强体质,但牛奶同时也是多种疾病的传播载体。国家标准是每毫升牛奶中细菌数小于30000个。以下是牛奶消毒及细菌检测实验。

              (1)图中步骤①称为_______消毒法。步骤②是_______________。

              (2)培养基中的蛋白胨可以为微生物提供_________________。进行步骤③操作时,应选用下列中的哪种工具?______。为了避免杂菌污染,此步骤应在____________附近进行。

              (3)将接种后的培养基和作为对照的________________同时放入37℃恒温培养箱中,培养36小时。取出后统计各平板的菌落数,结果如表所示。应该选择其中稀释倍数为______的平板进行计数,经过消毒后的牛奶中,细菌数大约是_________/mL。

            • 6.

              [生物一选修1:生物技术实践]

              泡菜和酸奶的制作都离不开乳酸菌。请回答下列一种相关的问题。

              (1)制作泡菜时,泡菜坛需要加水密封,目的是_____________。制作期间,是否需要定时排气?为什么?_________________。一般地说,泡制14天后的泡菜中_____________的含量较低,不会危害人体健康,适合食用。

              (2)为了比较不同培养基上乳酸菌的生长效果,某同学制备了3种无菌培养基,再量取1mL乳酸菌发酵奶,进行梯度稀释后取10-8稀释液,分别接种到上述的3种培养基上,然后置于37°C环境中培养,第5天用直尺在放大镜下测量菌落直径。

              ①配制本实验的培养基时需要加入___________,使培养基能够凝固。配制好的培养基还需要放入________中进行彻底灭菌。

              ②采用________法,将乳酸菌稀释液分别接种到3种培养基上。接种要求在酒精灯的火焰旁进行,目的是______________________。

              ③菌落直径大的培养基更适合用于培养乳酸菌,原因是___________________。

            • 7.

              人和哺乳动物的尿中含有尿素,大量尿素的存在会对环境造成污染.土壤中有些细菌含有脲酶,可通过降解尿素作为其生长的氮源.现对土壤中的这类细菌进行分离实验,请回答下列问题:

              (1)分离培养细菌时必须进行无菌操作,包括培养基和各种器皿都必须是无菌的,常用的灭菌方法有______、______和______.
              (2)将样液进行一系列的梯度稀释,然后接种培养.在稀释土壤溶液的过程中每一步都要在______旁进行操作.接种后的培养皿倒置于37℃的______中培养.
              (3)用含有酚红指示剂的培养基筛选能分泌脲酶的细菌,从功能上划分该培养基属于______培养基.若培养基中存在有分解尿素的细菌,其菌落周围会出现红色环带,这是由于尿素被分解产生的______使 pH升高,酚红指示剂产生的颜色变化,从而证明这一菌株可以尿素为氮源.变色区域越大,表明该菌株利用尿素的能力______.
            • 8.

              如图是工业上利用微生物分解纤维素生产乙醇的基本工作流程,请回答下列问题:

              (1)微生物一般来自土壤,图中①过程选取产酶微生物时应选择__________的土壤,在鉴定和筛选这种微生物时需用_______对纤维素进行染色并制成选择培养基.最后还要在平板培养基上分离纯化目的菌。

              (2)图中②环节获得的酶是一种复合酶,一般认为它至少包括三种组分,分别为C1酶、CX酶和________。前两种酶使纤维素分解成______,第三种酶将其进一步分解成葡萄糖。

              (3)⑤环节常用的菌种是________.微生物在果酒、果醋、腐乳、泡菜等食品加工方面应用广泛,其中与果醋、泡菜制作密切相关的微生物分别是______和_______。

              (4)产生酒精的过程中,要注意对发酵装置进行灭菌处理.通常情况下,在微生物培养过程中,实验室常用的灭菌方法有_______、________和高压蒸汽灭菌.无菌技术要求实验操作应在酒精灯火焰附近进行,其目的是___________。

            • 9.

              【生物——选修1:生物技术实践】

              从自然菌样中筛选较理想的生产菌种的一般步骤是:采集菌样→富集培养→纯种分离→性能测定。

              (1)不同微生物的生存环境不同,获得理想微生物的第一步是从适宜的环境中采集菌样,然后再按一定的方法分离、纯化。筛选噬盐菌的菌样应从____________环境中采集。

              (2)富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境条件,使其数量大大增加,从而分离出所需微生物的培养方法。对产耐高温淀粉酶微生物的富集培养应选择_____________的培养基,并在__________条件下培养。

              (3)如图甲、乙是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图,请分析接种的具体方法。

              获得图甲效果的接种方法是________________,获得图乙效果的接种方法______________。

              (4)配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行____________,培养基的灭菌方法是________________。在整个微生物的分离和培养中,一定要注意在____________条件下进行。

            • 10.

              利用微生物分解淀粉生产糖浆具广阔的应用前景。某同学为了从长期种植马铃薯的土壤中分离出能够高效分解淀粉的细菌,进行如下实验:

              (1)实验步骤:

              ①配制以           为碳源的固体培养基,为了使培养基凝固成固体,应该向培养基中加入的物质是               

              ②将土壤样品接种到已灭菌的培养基上,在恒温培养箱中培养一段时间后,培养基上出现        

              ③将接种针用                   法灭菌后,从②中的培养基上挑取一定量细菌,接种入          (固体、液体)培养基,在恒温摇床上培养24h,使细菌大量繁殖。

              ④配制与①相同的培养基,并加入少量碘液,使培养基呈蓝紫色。用                  法将上一步大量繁殖后的细菌接种到已灭菌的培养基上。

              ⑤培养一段时间后,观察菌落周围培养基的颜色变化和变化范围的大小。周围出现较大的          现象的菌落即为初选菌落,经进一步分离、纯化后即可达到实验目的。

              (2)上述实验步骤中,从用途看,①所用培养基属于             培养基,⑤所用培养基属于             培养基。

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