【生物——选修1：生物技术实践】

某研究小组从牛的瘤胃中采集样本，进行分解尿素的微生物的分离与计数。实验基本步骤如下：

（1）分解尿素的微生物含有_______________，因此，配制培养基时以尿素作为唯一氮源，尿素会被分解成_________使培养基的碱性增强。

（2）配制培养基时，需添加琼脂，琼脂起________________作用；培养基中添加___________作为指示剂，可使目标菌落的周围产生红色环带。

（3）对尿素溶液进行灭菌的最适方法是___________灭菌。

  A.高压蒸汽  B.干热   C.添加抗生素  D.过滤   E.紫外线照射    F. 70﹪酒精浸泡

（4）该小组在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是__________________________；然后将1mL瘤胃样液稀释1000倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板的菌落数分别为49、47和45。据此可得出每升瘤胃样液中分解尿素的微生物活菌数为__________，理论上，统计的菌落数往往_____（低、等、高）于接种的实际活菌数目。

胡萝卜素是一种常用的食用色素，可分别从胡萝卜或产胡萝卜素的微生物菌体中提取获得，流程如下：

(1)筛选产胡萝卜素的酵母菌R时，可选用________或平板划线法接种。采用平板划线法接种时需先灼烧接种环，其目的是____________________。

(2)培养酵母菌R时，培养基中的蔗糖和硝酸盐可分别为酵母菌R的生长提供________和________。

(3)从胡萝卜中提取胡萝卜素时，干燥过程应控制好温度和________以防止胡萝卜素分解；萃取过程中宜采用________方式加热以防止温度过高；萃取液浓缩前需进行过滤，其目的是________________________________________________________________________。

(4)纸层析法可用于鉴定所提取的胡萝卜素。鉴定过程中需用胡萝卜素标准品作为________。

自生固氮菌可不与其他植物共生，能独立完成固氮作用，在农业生产中具有广泛的用途。研究人员从土壤中筛选高效的自生固氮菌株，并对其固氮能力进行了研究。请回答下列问题：

(1)在配制含琼脂的培养基和倒平板的过程中，下列选项不需要的是________(填序号)

①酒精灯　②接种环　③高压蒸汽灭菌锅　④棉塞

(2)要从土壤样品中分离出自生固氮菌，在获得土壤浸出悬液后，可以采用稀释涂布平板法将菌液涂布于________培养基上进行筛选。

(3)在涂布平板时，滴加到培养基表面的菌液量不宜过多的原因是________。

(4)涂布培养四天后，可通过观察________的形态特征来统计土壤中自生固氮菌的种类。

(5)为了进一步筛选高效固氮菌，研究人员将上述获得的等量的四种固氮菌分别接种到等量的液体培养基中进行振荡培养相同时间后，对固氮菌进行计数并测定培养液中的含氮量，结果如下表：

①培养过程中需不断振荡的目的是____________________。

②可以采用________方法对固氮菌进行计数，假设计数室长和宽均为1 mm，深0.1 mm，每个小方格中平均有7个固氮菌，则10 mL培养液中有固氮菌的数量为________个；如果小方格中固氮菌的数量太多，无法数清，则应________。

③由上述结果可知，________菌的固氮效率最高。

[生物——选修1：生物技术实践]

空气中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。某研究小组欲用平板收集教室空气中的微生物，以了解教室内不同高度空气中微生物的分布情况。实验步骤如下：

①配制培养基（成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H₂O）;

②制作无菌平板；

③设置空白对照组和若干实验组，进行相关操作；

④将各组平板置于37℃恒温箱中培养一段时间，统计各组平板上菌落的平均数。

回答下列问题:

（1）  该培养基中微生物所需的氮来源于_________________。若要完成步骤②，该培养基中的成分X通常是_________________。

（2） 步骤③中，实验组的操作是___________________________________________________。

（3） 若在某次调查中，某一实验组平板上菌落平均数为36个/平板，而空白对照组的一个平板上出现了6个菌落，这种结果说明在此次调查中出现了____________现象。若将30（即36－6）个/平板作为本组菌落数的平均值，该做法_______________（填“正确”或“不正确”）。

回答有关问题：

（1）“超级细菌”可以清除原油泄漏导致的土壤和沙滩油污，基因工程要筛选出这样的超级细菌，过程是将工程菌样品稀释液接种于以________为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于________培养基。

（2）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即________和________。

（3）为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力________________.

（4）若要测定“超级细菌”培养液中的菌体数，可在显微镜下用________直接计数；若要测定其活菌数量，可选用________平板法且选取具有________个菌落的平板进行计数。

（5）培养基灭菌常用________，检测灭菌的效果是将平板倒放在恒温箱中，在适宜的温度下培养适当的时间，再观察有无________，如果有需要重新灭菌。

[生物—选修1：生物技术实践]

请回答有关物质提取、微生物培养与应用的问题：

（1）实验室分离叶绿体中的色素常用的方法是________，从胡萝卜中提取胡萝卜素常用的方法是________法。

（2）微生物培养过程中，获得纯净培养物的关键是________。常用的对培养皿进行灭菌的方法是________。

（3）从土壤中分离尿素分解菌的过程中，应向以________为唯一氮源的培养基中加入________指示剂。

（4）纯化菌种和统计某活菌的数目时，宜采用的接种方法是________，用这种方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，其原因是________。

【生物—选修1：生物技术实验】

研究发现柚皮精油和乳酸菌素（小分子蛋白质）均有抑菌作用，两者的提取及应用如图所示。

（1）柚皮易焦糊，宜采用____________法提取柚皮精油，该过程得到的糊状液体可通过___________除去其中的固体杂质。

（2）筛选乳酸菌A时可选用平板划线法或____________接种。对新配制的培养基灭菌时所用的设备是_______________。实验前需对超净工作台进行____________处理。

（3）培养基中的尿素可为乳酸菌A生长提供______________。电泳法纯化乳酸菌素时，若分离带电荷相同的蛋白质，则其分子量越大，电泳速度___________。

（4）抑菌实验时，在长满致病菌的平板上，会出现以抑菌物质为中心的透明圈。可通过测定透明圈的______________来比较柚皮精油和乳酸菌素的抑菌效果。

请回答下列有关的问题：

（1）鉴定尿素分解菌需在培养基中加入        指示剂。纤维素分解菌的筛选方法                              

（2）制作泡菜时，所用盐水使用前，盐水需要         。为了缩短制作时间，有人还会在盐水中加入少量陈泡菜液，加入陈泡菜液的目的是         。

（3）在采用平板划线法分离硅酸盐细菌时，第二次及之后的划线，总是在上一次划线末端开始，这样做的目的是                                。

（4）水中蒸馏的方法对于有些原料不适用。这是因为水中蒸馏会导致                   、和                 等问题。

（5）萃取的效率主要取决于                     和                ，同时还要受到原料颗粒的大小、紧密程度、含水量、萃取的温度和时间等条件的影响。

图是利用影印培养技术证明大肠杆菌产生抗链霉素突变基因的实验。具体方法是：

①首先把大量对链霉素敏感的大肠杆菌涂布在不含链霉素的平板1的表面，待其长出密集的小菌落后，用影印法接种到不含链霉素的培养基平板2上，随即再影印到含有链霉素的培养基平板3上。经培养后，在平板3上出现了个别抗链霉素的菌落。

②对培养皿2和3进行比较，在平板2上找到平板3上那几个抗性菌落的“孪生兄弟”。

③把平板2上与平板3上菌落相应的一个部位上的菌落挑至不含链霉素的培养液4中，经培养后，再涂布在平板5上。

④重复以上各步骤，最后在试管12中获得了较纯的抗性菌落。

请根据以上材料回答下列问题：

（1）大肠杆菌的同化作用类型为________，与酵母菌相比，大肠杆菌细胞在结构上的主要特点是________。

（2）从培养基的功能上看，含有链霉素的培养基属于________培养基。若在培养皿的培养基中加入伊红和美蓝，则培养皿中长出的菌落颜色表现为________。

（3）大肠杆菌抗链霉素基因存在于细胞的________结构上，而与生长、繁殖和遗传有关的基因主要存在于________中。

（4）3号、7号、11号培养基中加入链霉素的作用是________，3号培养皿中的菌落比1号、2号中的菌落少很多，这说明了________。

【生物——选修1：生物技术实践】

谷氨酸棒状杆菌可用于微生物发酵工程生产谷氨酸，从而制取谷氨酸钠（味精）。下表是生物兴趣小组探究发酵条件对微生物数量和产物生产的影响。

请分析回答下列问题：

（1）谷氨酸棒状杆菌发酵的培养基中主要营养物质有________，该培养基是一种________培养基。

（2）得到谷氨酸棒状杆菌数目可采用的计数方法是________，用该方法计数过程：取第一组的102倍的稀释液0.1mL滴加到计数板（由25×16＝400个小室组成，容纳液体总体积为0.1mm³）上，记录到5个中方格（80个小室）共有菌体44个，则1mL的第一组发酵液中有

菌体________个。用该方法测定的微生物数量大于实际的活菌数，原因是________。

（3）在无氧条件下，谷氨酸棒状杆菌代谢产物是乳酸或琥珀酸，由此说明谷氨酸棒状杆菌的代谢类型是________，由上述探究可知，通过发酵得到大量谷氨酸的发酵条件是________。