已知微生物A可以产生油脂，微生物B可以产生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生产。回答有关问题：

（1）显微观察时，微生物A菌体中的油脂通常可用于        染色。微生物A产生的油脂不易挥发，可选用        （填“萃取法”或“水蒸气蒸馏法”）从菌体中提取。

（2）为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物B的单菌落，可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样，并应选用以              （ 填“淀粉”或“蛋白质”或“脂肪”）为碳源的固体培养基进行培养。若要测定培养液中微生物B的菌体数，可在显微镜下用：_________________直接计数。

（3）为了确定微生物B产生的脂肪酶的最适温度，某同设计了如下实验：取试管16支，分别加入等量的脂肪、脂肪酶、缓冲液，混匀，平均分为4组，分别置于0℃、5℃、10℃、40℃下保温相同时间后，检测各试管中的脂肪的分解情况。该实验温度设置的不足之处有  _______________________和_________________。

（4）某同学取5组试管（A～E）分别加入等量的同种脂肪，在A、B、C、D4个实验组的试管中分别加入等量的缓冲液和不同量的脂肪酶，然后，补充蒸馏水使4组试管内液体体积相同；E组加入蒸馏水使试管中液体体积与实验组相同。将5组试管置于适宜温度下保温一定时间后，测定各组脂肪的分解情况。通过A～D组实验可比较不同实验组脂肪分解情况的差异。本实验中，若要检测加入酶的量等于0而其他条件均与实验组相同时的脂肪分解情况，E组设计＿＿＿（填“能”或“不能”）达到目的，其原因是                     。

（1）由于锈去津的　　　　　作用，在长期使用锈去津的土壤中可能含有目的菌。

（2）目的菌培养常用的接种方法有              和                ，后者可用来统计微生物数量，其计数方法叫                             ，该法统计结果比实际数目       。

（3）在固体培养基中，无透明带菌落利用的氮源是　　　　　　；有透明带菌落利用的氮源是　　　　　　　，据此可筛选出目的菌。硝化细菌的代谢类型为                 ，筛选硝化细菌的培养基的碳源为            ，能源物为         。

（4）下图是A～C瓶中三类细菌的最大密度柱形图，由图推断，从A瓶到C瓶液体培养的目的是　　　　　　　　　　　　。

（5）微生物的培养需要适宜的条件，醋酸菌生长的适宜温度为             ，用毛霉制作腐乳的温度应控制在               ，菊花组织培养温度应控制在               。

（6）制作泡菜测定亚硝酸盐含量的方法为               。

（1）在实验室培养微生物，一方面需要为培养的微生物提供适合的____和____条件；另一方面需要确保无处不在的其它微生物无法混入。

（2）据图，研究小组采用的是_______法分离和计数金黄色葡萄球菌。由样品到4号试管的操作中，第一步，将分别盛有9mL生理盐水的4支试管______，并编号1—4号；第二步，用移液管从样品中吸取1mL牛奶，注入1号试管中，充分摇匀；第三步，重复第二步骤操作，以此类推，4号试管的稀释倍数是_____。

（3）资料显示，金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10%—15%NaCL的肉汤中生长;本实验可配制含10%氯化钠的培养基，使之成为_______培养基，以利金黄色葡萄球菌的生长，抑制或阻止其他微生物的生长

（4）通过观察菌落特征可区分不同种类微生物，这些特征包括菌落的________等方面；在统计菌落数目时，需按照菌落计数的要求计数，以保证计数结果准确。据图可得出1mL牛奶样品中金黄色葡萄球菌的活菌数为_____。

MRSA菌是一种引起皮肤感染的“超级细菌”，对青霉素等多种抗生素有抗性。为研究人母乳中新发现的蛋白质H与青霉素组合使用对MRSA菌生长的影响，某兴趣小组的实验设计及结

果如下表。

请回答下列问题：

(1)青霉素的用量是该实验的________变量。应保持________，目的是________。

(2)第2组和第3组对比表明MRSA菌对________有抗性，________能杀死MRSA菌。

(3)蛋白质H不是新型抗生素，理由是________。

(4)测定培养液中MRSA菌的活菌数量，不宜在显微镜下用________直接计数，适合选用________法进行计数，原因是________直接计数获得的结果包含活的MRSA菌和死的MRSA菌的总数，而用涂布法进行计数，计数的是菌落数，一个菌落一般来源于稀释液中的一个活菌。

40 [生物一选修3  现代生物科技专题]

下图为培育转基因山羊生产人β酪蛋白的流程图。

请回答下列问题：

(1)获取过程①所用的人β-酪蛋白基因时，可先提取人体细胞中的________，以其作为模板，在________的作用下台成________。

(2)重组人β-酪蛋白基因表达载体中必须有启动子，是________识别和结合的部位。

(3)过程②可选用________阶段的胚胎进行移植。

(4)过程③可使用________技术扩大转基因山羊群体，除此之外，还可以采取的措施有________。

(5)过程④人β-酪蛋白基因在细胞内表达的场所为________。

已知硅酸盐细菌在无氮培养基、钾细菌培养基及硅酸盐细菌培养基上均能生长。表1为无氮培养基的配方，表2是每种培养基上每个稀释度的菌落数及菌落直径。请回答下列问题：

(1)表1从物理性质上看属于________培养基，按用途划分，属于________培养基。

(2)硅酸盐细菌能在无氮培养基上生长，推测该细菌具有________功能。

(3)为统计硅酸盐细菌的数目，应采用________法进行接种，该方法的所有操作都应在________附近进行。表2中，稀释度为________时，统计的结果较为可靠。

(4)为检测培养基灭菌是否彻底，应进行的操作是________。由表2中的数据得出，用________培养基分离硅酸盐细菌的效果最好。

   [生物——选修3：现代生物科技专题]

如图所示为培育二倍体转基因抗虫棉的两种思路，其中EcoRⅠ、SmaⅠ、BamHⅠ为三种限制酶，EcoRⅠ和BamHⅠ切割DNA形成黏性末端，SmaⅠ形成平末端。(箭头指向为对应的酶切位点。)回答下列问题：

(1)与思路2相比，思路1的最大优点是________。

(2)分析图可知，不宜选择SmaⅠ获取目的基因，理由是________；选择________酶，可避免目的基因和质粒的自身环化。

(3)基因工程获得抗虫棉的核心步骤是________。

(4)图①过程得到的重组质粒，除了图中标出的特殊DNA片段外，还应有________；将重组质粒导入植物细胞采用最多的方法是________，如采用该方法，则图中所用的质粒应为________。

(5)检测目的基因是否翻译的方法是________。

&;   某生物兴趣小组试图探究牛和山羊的瘤胃中的微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能降解尿素的细菌（目的菌）。培养基成分如表所示，实验步骤如图所示。请分析回答：

(1)培养基中加入尿素的目的是____，该培养基是____培养基（按功能分类）。 从同化作用类型来看的，该菌属于____。

(2)实验需要振荡培养，目的是____；转为固体培养时，常采用____的方法接种，获得单菌落后继续筛选。

(3)在实验过程中：①培养基、培养皿；②玻棒、试管、锥形瓶、吸管；③瘤胃中的液体。其中需要灭菌的是____（填序号）。

(4)分离分解尿素的细菌实验时，甲同学从培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。甲同学实验结果差异的原因可能有____（填序号）。    

①取样不同    ②培养基污染    ③操作失误     ④没有设置对照

(5)以尿索为唯一氮源的培养基培养“目的菌”后，加入____指示剂后变红色，说明“目的菌”能分解尿素。理由是__________________。

(6)为进一步确定取自瘤胃中液体的适当稀释倍数，将接种的培养皿放置在37恒温培养箱中培养24h-48h，观察并统计具有红色环带的菌落数，结果如下表，其中____倍的稀释比较合适。

54.（每空2分，共16分）请分析回答下列问题：

(1)无菌技术主要通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。常用的灭菌方法有____________灭菌、干热灭菌和________灭菌。

(2)稀释涂布平板法分离纯化土壤中微生物的正确操作步骤是        (        )

①土壤取样  ②称取10 g土壤加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中制备土壤提取液 

③吸取0.1 mL溶液进行平板涂布  ④依次稀释至10¹、10²、10³、10⁴、10⁵ 、10⁶、10⁷稀释度

A．①②③④         B．①③②④     C．①②④③         D．①④②③

(3)利用酵母菌将葡萄汁发酵后是否有酒精产生，可以用重铬酸钾来检验，在酸性条件下，重铬酸钾与酒精反应呈______色。在发酵过程中，随着酒精度的提高，发酵液逐渐呈现深红色，原因是______________________．

(4)酵母菌适合生活在偏酸性环境，而放线菌则适合生活在偏碱性环境中，分离二者所用的培养基称为____________。

(5)在腐乳制作的过程中，起主要作用的微生物是____________。

(6)腐乳制作过程中影响其风味和品质的因素有哪些 (        )

①盐的用量  ②酒的种类和用量③发酵温度  ④发酵时间  ⑤香辛料的用量

A．①②③④⑤     B．①②③     C．①②⑤       D．③④

研究发现柚皮精油和乳酸菌素(小分子蛋白质)均有抑菌作用，两者的提取及应用如图所示。

(1)柚皮易焦糊，宜采用________法提取柚皮精油，新鲜的柚皮干燥去水并用________浸泡处理，该过程得到的糊状液体可通过________除去其中的固体杂质。

(2)培养基中的尿素可为乳酸菌A生长提供________。电泳法纯化乳酸菌素时，若分离带电荷相同的蛋白质，则其分子量越大，电泳速度________。

(3)抑菌实验时，在长满致病菌的平板上，会出现以抑菌物质为中心的透明圈。可通过测定透明圈的来比较柚皮精油和乳酸菌素的抑菌效果。

(4)柚皮油也可用萃取法来提取，原因是________。分析上图，提高萃取效果的方法是________、________。

(4)土壤中分解尿素的细菌能够合成脲酶，分离该类细菌的培养基应以________为唯一氮源，计数时一般选择菌落数在________范围的平板进行计数，统计的结果往往比活菌实际数目________，其原因是________________________．一般说来，在一定的培养条件下，同种微生物表现出稳定的菌落特征，这些特征包括菌落的________等(至少答出两个方面)

（1）纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶、Cx酶和　　　　酶。

（2）如果要对土壤中的纤维素分解茵进行计数，常采用　　　　　　法进行接种培养，接种工具采用　　　　　　灭菌的方法。

（3）常用的刚果红染色法有两种：第一种是先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应；第二种是在　　　　　　时就加人刚果红。　　　　　　（选答“第一种”或“第二种”）方法会使菌落之间发生混杂。

（4）如果观察到产生　　　　　　的菌落，说明可能获得了纤维素分解茵．为了确定是纤维紊分解菌，还需要进行　　　　　　的实验。纤维素酶的测定方法一般是采用对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的　　　　　　进行定量的测定。