[生物—选修1：生物技术实践]

牛、羊等反刍动物的瘤胃中生活的微生物中，有些是能够以尿素作为唯一氮源，研究人员欲从牛的瘤胃提取液中分离这些微生物。结合所学知识回答下列问题：

（1）从瘤胃提取液中分离能够分解利用尿素的微生物，应使用________的固体培养基，配制培养基需要的基本步骤依次为________、称量、溶化、________、倒平板。

（2）为了既能够接种，又能够初步计数，可采用________法进行菌液接种，接种过程中使用________作为接种工具。

（3）某同学为了统计样品中微生物的数目，他选用10^－4，10^－5、10^－6稀释液进行涂布，每种稀释液都设置了3个培养皿。然后选择________的平板进行计数，但是统计的菌落数往往比活菌的实际数目________，这是因为________。

我国家电研究院的洗衣机专家指出，洗衣机内部的环境非常潮湿，洗衣机使用时间越长，内部滋生微生物的机会就越大。看似干净的洗衣机其实内部隐藏着一个健康的隐形杀手。某生物兴趣小组的同学，利用内桶背面的污垢进行了相关实验。如图是某同学分离和培养洗衣机中微生物的部分操作步骤和实验结果示意图。

（5）实验结束后，使用过的培养基应该进行灭菌处理才能倒掉，此目的是_____    _。

幽门螺杆菌(Hp)感染是急慢性胃炎和消化道溃疡的主要致病因素。在患者体内采集样本并制成菌液后，进行分离培养。实验基本步骤如下：

             配制培养基→灭菌、倒平板→X→培养→观察

请回答：

(1)在微生物学中，选择培养基是指允许特定种类的微生物生长，同时____________其他种类微生物生长的培养基。

(2)在配制培养基时，要加入尿素和_____________指示剂，这是因为Hp含有________，它能以尿素作为______源；若有Hp，则菌落周围会出现________色环带。

(3)步骤X表示________。在无菌条件下操作时，先将菌液稀释，然后将菌液________到培养基平面上。菌液稀释的目的是为了获得________菌落。

(4)临床上用¹⁴C呼气试验检测人体是否感染Hp，其基本原理是Hp能将¹⁴C标记的________分解为NH₃和¹⁴CO₂。

(5)测定菌数时，在对应稀释倍数为10⁶的培养基中，得到以下几种结果，其中正确可信的是（   ）

A.一个平板，统计的菌落数是23

B.两个平板，统计的菌落数分别是22和26，取平均值24

C.三个平板，统计的菌落数分别是21、5和52，取平均值26

D.四个平板，统计的菌落数分别是21、30、24和25，取平均值25

(6)一同学在对应稀释倍数为10⁶的培养基中测得平板上菌落数的平均值为23.4，那么每毫升样品中的菌株数是______________。（涂布平板时所用稀释液的体积为0.2ml）

随着柑橘加工业的发展，柑橘皮渣的处理问题日益引起人们的关注。回答下列问题：

(1)提取橘皮精油的常用方法是________。为了提高出油率，需要将橘皮干燥去水，并用________浸泡10h以上，要得到最终的橘皮精油，压榨后还需过滤________次。

(2)柑橘皮渣可用于生产有机肥，但纤维素、果胶降解难、堆肥时间过长，可筛选出纤维素分解菌来用于有机肥的生产，缩短堆肥时间。在样品稀释涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基之前，可以先通过选择培养增加纤维素分解菌的浓度，其原理是________。

(3)配制培养基时加入CR(刚果红)，则产生纤维素酶的菌落周围将会出现明显的________，

但该现象也可能是因为________。

(4)在微生物培养过程中常用的灭菌方法有________(写3种)。

临床使用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量样本（如痰液、粪便等），然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。回答下列问题：

⑴为了从样本中分离并获取某种致病菌单菌落，可用             法或             法将人体样本接种于固体培养基表面，再经过选择培养、鉴别等步骤实现。

⑵为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，取该单菌落适当稀释，接种于固体培养基表面，在37℃培养箱中培养24h，使其均匀生长，布满平板。将分别含有A、B、C、D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板的不同位置，培养一段时间后，在四个滤纸片周围出现透明圈由大到小依次是A＞C＞D＞B。由此推断，该病人目前适合使用的是抗生素        。含D的滤纸片周围的透明圈比含A、C的小，但透明圈中出现了一个菌落，这种菌落的出现可能是由于杂菌污染导致的，也可能是由于该致病菌发生了突变；若发生了基因突变，这种突变一般是否由抗生素诱发的？         ，若要证明这种致病菌发生了基因突变，可检测和比较这类细菌细胞中        （“DNA 的碱基组成”“mRNA 的含量”“ DNA 的碱基序列”）。

⑶为防止杂菌污染，培养基的灭菌方法是         灭菌，接种环的灭菌方法是         灭菌，接种过程应该在               旁进行。