请分析回答下列问题：(1)无菌技术主要通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。常用的灭菌方法有____________灭菌、干热灭菌和________灭菌。

(2)稀释涂布平板法分离纯化土壤中微生物的正确操作步骤是        (        )

①土壤取样  ②称取10 g土壤加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中制备土壤提取液 

③吸取0.1 mL溶液进行平板涂布  ④依次稀释至10¹、10²、10³、10⁴、10⁵ 、10⁶、10⁷稀释度

A．①②③④         B．①③②④     C．①②④③         D．①④②③

(3)利用酵母菌将葡萄汁发酵后是否有酒精产生，可以用重铬酸钾来检验，在酸性条件下，重铬酸钾与酒精反应呈______色。在发酵过程中，随着酒精度的提高，发酵液逐渐呈现深红色，原因是______________________．

(4)酵母菌适合生活在偏酸性环境，而放线菌则适合生活在偏碱性环境中，分离二者所用的培养基称为____________。

(5)在腐乳制作的过程中，起主要作用的微生物是____________。

(6)腐乳制作过程中影响其风味和品质的因素有哪些 (        )

①盐的用量  ②酒的种类和用量③发酵温度  ④发酵时间  ⑤香辛料的用量

A．①②③④⑤     B．①②③     C．①②⑤       D．③④

植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解。刚果红（CR溶液）可以与纤维素形成红色复合物,但并不与纤维素降解产物纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。用含有CR的培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的透明圈 。

为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了如下培养基（成分见下表）：注：“+”表示有，“－”表示无。

根据各类微生物的形态结构特点和新陈代谢类型，利用选择培养基和鉴别培养基，结合显微镜镜检以及菌落特征，可以把混杂在一起的大肠杆菌、硝化细菌、乳酸菌、酵母菌、金黄色葡萄球菌、圆褐固氮菌、尿细菌、纤维杆菌分离开来。下面是分离筛选的方法步骤，请根据各个步骤的条件，填写空格中的内容：

首先配制一系列不同性质的固体培养基，然后进行高温灭菌。再将上述微生物的混合液分别接种到各种培养基上培养。

(1)利用无氮培养基可筛选出________________。

(2)用不含有机碳源的选择培养基可筛选出_________________.

(3)酵母菌的筛选需要在常规培养基中另加人_______________。

(4)用含较高浓度NaCl的培养基可选择出________________。

(5)利用伊红一美蓝培养基培养混合菌，菌落呈黑色是____________，挑取该菌落单独培养，结合显微镜镜检和进一步用伊红——美蓝鉴别培养基来确定。

(6)在无氧环境下培养混合菌，同时加入一定浓度的乳酸，使培养基pH充分降低，利用菌落特征，结合显微镜镜检，选取生长优势的菌落，即可分离出________________。

(7)利用碳源为纤维素的液体培养基可筛选______________________。

(8)若筛选尿细菌，则配制的培养基特点是________________________。初步筛选后为了进一步验证分解尿素的细菌是否存在，常用的方法是        。

(9)在上述实验接种时可采用平板划线法，操作结束为什么仍需要灼烧接种环？                                                           。

（1）从生态系统的成分上看，大肠杆菌属于           。

（2）若根据用途划分，该培养基属于             （填“选择”或“鉴别”）培养基。若要用上述培养基来筛选出土壤中的尿素分解菌，培养基的营养成分必需怎样更改？                     ，并用        作为指示剂。

（3）在微生物培养的过程中，为防止杂菌污染，需要对培养基和培养皿进行       ；操作者的双手需要进行清洗和           。

（4）图1和图2是培养某细菌的结果图，其对应的接种方法分别是：           和             ，这两种方法接种后培养基上都可以得到由单个细胞繁殖所形成的           。图1所用的接种方法可用来对活菌进行计数。此外，测定微生物数目的另一种方法是             。

 下列是与微生物培养有关的问题，请回答：

(1)某细菌固体培养基的组成成分是KH₂PO₄、Na₂HPO₄、MgSO₄，葡萄糖、尿素、琼脂和蒸馏水，其中凝固剂是__________，碳源是           ，氮源是         ；已知只有能分解尿素的细菌才能在该培养基上生长，故该培养基属于       培养基。从同化作用类型看，用该培养基培养的细菌属于            。

(2)在以尿素为唯一氮源的培养基中加入              ，细菌合成的       将尿素分解为氨，pH增高，使指示剂变红色。

(3)某同学在实验时得到了如图所示的结果，则尿素分解菌位于 (　 　)

A．③               B．①②           

C．②③             D．①②③

①按以下配方配制培养基：

②将培养基在121℃下高压蒸汽灭菌20min。

③倒平板，冷却备用。

④用稀释涂布平板法接种。 

⑤将平板倒置，与28℃下培养7天。 

据此回答问题：

（1）培养基中为链霉菌提供碳源的物质是            ，提供氮源的物质是            。培养基中的重铬酸钾能够减少细菌、真菌的数量，故该培养基属于        培养基。

（2）培养基pH的调节是在培养基灭菌            （填之前或之后）进行。

（3）在倒平板之前，应将培养基冷却至       ℃左右才能进行；冷却凝固的平板要倒过来放置，原因是                                    。

（4）从稀释倍数为10⁴的稀释液中取0.1mL，涂布一个平板，某同学共涂布了3个这样的平板，统计的菌落数分别是201个、212个和256个，那么每克样品中的菌株数是         个。

（5）下图所示的四种菌落分布图中，不可能由稀释涂布平板法得到的是__      _____。

31.高温淀粉酶在大规模工业生产中有很大的实用性。研究者从热泉中筛选了高效产生高温淀粉酶的嗜热菌，其筛选过程如下图所示。

（1）从用途上来说，Ⅰ号培养基属于________培养基，仅以淀粉作为________源；从物理状态上来说，Ⅱ号培养基属于固体培养基，配制时一般加入________作为凝固剂。

（2）进行①过程的目的是________；②过程所使用的接种方法是________法。

（3）Ⅰ、Ⅱ号培养基配制和灭菌时，灭菌与调节pH的先后顺序是________；一般对配制的培养基采用________法灭菌。

（4）部分嗜热菌在Ⅰ号培养基上生长时可释放________分解培养基中的淀粉，在菌落周围形成透明圈；应挑出透明圈________（大或小）的菌落，接种到Ⅱ号培养基。

  
（1）苹果压榨过程中加入_________酶可提高榨汁率；在图甲的发酵罐I中，酵母菌进行酒精发酵的反应式为________________________________；发酵罐II需接种________菌，与发酵罐I相比，需要不断通入_____________。

（2）图乙表示发酵罐I、II中主要物质的变化，曲线__________代表酒精的变化。可用___________________试剂检测酒精的有无。

（3）为获得用于生产的理想的酵母菌菌种，需向平板内的固体培养基中加入一定量的_________进行选择培养；培养时平板须倒置，可防止_____________________________________；用稀释涂布平板计数法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，这是因为_______________________________________________________________________。

(1)显微观察时，微生物A菌体中的油脂通常可用________染色。

(2)为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物B的单菌落，可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样，并应选用以________为碳源的固体培养基进行培养。

(3)若要测定培养液中微生物B的菌体数，可在显微镜下用____________直接计数；若要测定其活菌数量，可选用________法进行计数。

(4)为了确定微生物B产生的脂肪酶的最适温度，某同学测得相同时间内，在35 ℃、40 ℃、45 ℃温度下降解10 g油脂所需酶量依次为4 mg、1 mg、6 mg，则上述三个温度中，________℃条件下该酶活力最小。为了进一步确定该酶的最适温度，应围绕________℃设计后续实验。

(1)从此培养基的配方来看，最适合培养下列哪种微生物？
A．酵母菌                                      B．硝化细菌

C．纤维素分解菌                             D．大肠杆菌

(2)微生物培养的培养基按照用途可以分为        和________，两种培养基的配方中一般都含有水、无机盐、________和________，培养基还需要满足微生物生长对特殊营养物质（如生长因子等）、________以及氧气的要求。

(3)稀释涂布平板法是微生物接种常用的方法之一，该法是将菌液进行________，然后将不同稀释度的菌液分别涂布在琼脂固体培养基的表面，进行培养。稀释条件足够时，可形成由单个细胞形成单个      ，因此可用于微生物的                                          。

(4)如果要进行土壤中分解尿素的细菌的分离，培养基中必须含有的成分是________，验证分解尿素的细菌是否存在，常用的方法是                                 。

(5)微生物接种的方法很多，在用平板划线法操作结束时，为什么仍需要灼烧接种环？
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