[生物—选修1：生物技术实践]

   为研究酸奶中的乳酸杆菌数是否达标，某同学做了如图所示的实验。请回答下列问题：

（1）为避免样本中菌体浓度过高，需要对样本用无菌水进行________处理。

（2）培养乳酸杆菌的固体培养基中，除了含有________、水和无机盐等主要营养成分外，还应加入适量的________和琼脂，在灭菌前，还需调节培养基的________。接种后，培养基置于（填“25～28℃”或“30～37℃”）恒温箱中培养。

（3）如图，测定菌落数时，该同学涂布了5个平板，培养后的菌落数分别是20、110、116、134和120，可算出每毫升样品中的菌落数是________个。

（4）用这种方法测定的乳酸杆菌菌落数比实际活菌数量________，因为________。

(1)欲从多种微生物中分离某种细菌并抑制其他微生物的生长．应使用________培养基．纯化菌种时可采用比较简单的________法进行接种，接种操作应在________进行．

(2)纯化的菌种常采用固体斜面培养基临时保藏，该方法保存的时间较________，而且菌种易________．常用的凝固剂是________．

(3)从培养基所含的成分来看，从土壤中分离出固氮菌的培养基特点是________，从土壤中分离出纤维素分解菌的培养基特点是________．

（二）人组织纤溶酶原擞活物(htPA)是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得．流程如下：

(1)卵母细胞可以从活体________中采集，还可从已处死的雌羊卵巢中获取．对供体母羊用________处理，可以获取更多的卵(母)细胞．采集的精子需要经过________处理，才具备受精能力．

(2)欲用有限的早期胚胎获得多个转基用个体，可以利用________技术．由于代孕母羊对移入其子宫的外来胚胎________，才使早期胚胎能在代孕母羊体内存活．

(3)质粒上应有________，才能使htPA基因插入其中．在转htPA基因母羊的肌肉细胞中________(能、不能)检测到目的基因．若在其羊乳中检测到________，说明目的基因成功表达．

多氯联苯是一种有机致癌物质，容易累积在脂肪组织，造成脑部、皮肤及内脏的疾病并影响神经、生殖及免疫系统。多氯联苯为油状液体，污染土壤后，土壤呈现油状板结，很难清除。研究发现部分酵母菌具有分解多氯联苯的作用，为消除这种污染，科研人员计划从受污染的土壤中筛选出高效分解多氯联苯的菌株。

（1）筛选分解多氯联苯的菌株时，应将土壤样品稀释，接种到以             为唯一碳源的培养基上，从功能上讲，该培养基属于              。

（2）对初步提取到的菌株要进行      ，一般操作方法有两种，下图是利用                    法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。培养一段时间后，如果出现菌落且菌落周围           消失或减少，说明该菌落中的菌株具有降解多氯联苯的能力。

（3）若要测定培养液酵母菌的菌体数，可在显微镜下用                 直接计数。若用稀释涂布平板法统计菌落数，在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板进行培养一段时间，这样做的目的是                                          。

（4）将1ml酵母菌溶液稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1ml稀释液经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为42、43、44，据此可得出每升溶液中酵母菌活菌数为             。

[生物——选修 1：生物技术实践]

下表为培养某种微生物的培养基配方，请回答有关问题：

（1）该种培养基可用来培养 ________的细菌。从用途看，这种培养基称为_______培养基。

（2）如果要通过统计培养基中的菌落数来估算样品中的细菌数，则在上述培养基中还需要添加作为凝固剂，接种时应采用法才能达到目的。这种方法统计到的是样品中_______的数目，除了这种方法，还有也是测定微生物数量的常用方法。在用不同浓度的稀释液培养得到的平板中，为保证统计的数目结果较为准确，一般选择菌落数在_______的平板进行计数。

（3）某同学从土壤中分离出目的细菌以后，若要对其作进一步的鉴定，可在上述的培养基中加入_______指示剂，培养该菌后，如果指示剂变_______，可初步鉴定该种细菌能够分解尿素。

23.如图表示月季的花药离体培养过程，请回答：

（1）选择花药时，一般要通过_________来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期，一般来说，在_________期，细胞核由中央移向细胞一侧的时期，通常选择_______________的花蕾，花药培养成功率最高。

（2）在花粉的培养基中要加入一定的植物激素，常用的植物激素有____________________。

（3）从植物产生的途径来说，花粉植株产生的途径除了图中所示外，还可以通过_______阶段发育而来。

（4）图中的B过程需要_____，因为愈伤组织形成幼小植物后，植物需要叶绿素进行光合作用。

（5）某同学在培养过程中发现培养基上感染了几种细菌。若在以尿素为唯一氮源的培养基中加入_____________指示剂培养几种细菌后，指示剂变红就可以判断其中含有能够分解尿素的细菌；若在以纤维素为唯一碳源的培养基中加入______________染料，培养几种细菌后，培养基中出现透明圈，就可以判断其中含有纤维素分解菌。

(1)简述土壤中可分解尿素的细菌的鉴定方法及原理：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入________指示剂，细菌合成的________将尿素分解为________，pH升高，使指示剂变为红色。

(2)培养基中加入尿素的目的是筛选目的菌， 这种培养基属于_____培养基。

(3)“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的________和________，实验中需要振荡培养，原因是______________________。

(4)下图是利用________法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。

(5)关于下图的操作方法和结果，叙述正确的是    __。

A．操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌

B．划线操作须在火焰上进行

C．在5区域中才可以提到所需菌落

D．在1、2、3、4、5区域中划线前后都要对接种环灭菌

(1) 下图是利用              法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步       分散到培养基的表面。

(2) 分析下面培养基的配方：NaNO₃、KH₂PO₄、NaH₂PO₄、MgSO₄•7H₂O、KCl、H₂O。若此培养基用于培养分解尿素的细菌，则应除去上述        成分，并加入       物质，以补充       源。若用于培养纤维素分解菌，应加入            物质，为检测纤维素分解菌的存在与否，还应加入          染料，将呈            反应。

(3) 三位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中细菌数量。在对应稀释倍数为10⁶的培养基中，得到以下统计结果：

甲同学涂布了两个平板，统计的菌落数是236和260，取平均值248；

乙同学涂布了三个平板，统计的菌落数是210、240和250，取平均值233；

丙同学涂布了三个平板，统计的菌落数是21、212和256，取平均值163；

 在三位同学的统计中，只有一位同学的统计是正确的，指出另两位同学的统计为什么不正确？

                                                                                                                                         。

(1)当糖源充足或缺少糖源时，醋酸菌分別能将                  物质最终转变成醋酸。

(2)为了分离和计数土壤中分解尿素的细菌，配制如下培养基进行实验:

若在上述培养基中加入酚红指示剂，该培养基能对培养的细菌起到                 的作用。若取土样4g,应加入          ml的无菌水配制成稀释10倍的土壤溶液。因土壤中细菌密度很大，需要不断加以稀释，将10⁴-10⁷倍的稀释液分别吸取0.2mL加人到固体培养基上，在对应稀释倍数为10⁶的培养基中统计3个平板上的菌落数分別为:219、212、256，则每克该土壤样品中的菌株数为        (小数点后保留一位小数)。

(3)若为了获得更多青蒿素，需将青蒿离体的细胞或组织培养成愈伤组织。青蒿的细胞分裂、组织分化能力比菊花困难一些，需要借助外源激素才能更好的分裂和分化。若上述培养基用来进行青蒿细胞、组织的组织培养，还应加入的具体植物激素是                        。碳源可以用            代替。

(4) 胡萝卜素粗品用            法进行鉴定，鉴定过程中需用              作为对照。

（一）、为了获得植物次生代谢产物,先用植物外植体获得愈伤组织,然后在液体培养基中悬浮培养。 请回答下列问题:

(1)外植体经诱导后形成愈伤组织的过程称为               。

(2)在愈伤组织悬浮培养时,细胞干重、蔗糖浓度和 pH 的变化如右图所示。 细胞干重在 12 d 后下降的原因有            ;培养液中蔗糖的作用是            、             。

(3)多倍体愈伤组织细胞产生的次生代谢产物量常高于二倍体。 二倍体愈伤组织细胞

经              处理,会产生染色体加倍的细胞。 为检测愈伤组织细胞染色体数目,压片前常用纤维素酶和           酶解离愈伤组织。 若愈伤组织细胞(2n)经诱导处理后,观察到染色体数为8n 的细胞,合理的解释是                     、                    。

（二）、为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌的分离等工作。

该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空平板先行培养了一段时间，这样做的目的是检测培养基平板灭菌是否合格；然后，将1mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升水样中的活菌数为             。

(1)自然界中纤维素的来源是____________________________。它是________的基本组成成分。纤维素酶能使布料柔软的原因是____________________________________________________________________________________________________________________（2分）。

(2)某研究性学习小组同学，为了从土壤中筛选纤维素分解菌，利用下列材料和用具进行了实验，请完善下列实验步骤。

材料用具：采集的土样，研钵，配制纤维素分解菌培养基的各种原料，琼脂，纤维素粉，刚果红溶液，培养箱，无菌水。

实验步骤：

①利用培养纤维素分解菌培养基的各种原料、琼脂及_______（2分）配制固体培养基，灭菌。

②将采集的土壤样品在研钵中研碎后________，制成土壤匀浆。

③利用无菌操作方法把土壤匀浆________到培养基上，放在培养箱内培养一段时间。

④用显微镜观察纤维素分解菌时，要从________挑取材料制成临时装片。

(3)在用稀释涂布平板计数法对纤维素分解菌数目进行统计时，统计的菌落数往往比活菌的实际数低，这是因为______________________________________________ ____________________________________________________________________（2分）。

(4)如果探究温度对纤维素酶活性的影响，自变量是________，应该保持________（2分）等不变(至少答两项)。