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            • 1． 微生物与基因工程：
              以下是以大肠杆菌为材料的实验．下表是大肠杆菌培养基的配方．
              成分 蛋白胨 牛肉膏 NaCl 蒸馏水 pH
              含量 10g 5g 10g 1000ml 7.0
              （1）表中各项成分中，能承担生长因子作用的是 ______ 能提供氮源的是 ______
              利用转基因技术可以生产出更多廉价的胰岛素．如图为转基因实验过程示意图，其中中数字表示相应过程．
              天然大肠杆菌质粒一般含有lacZ基因而不含氨苄青霉素抗性基因；人工合成的大肠杆菌puc118质粒中含有lacZ基因外，还含有含氨苄青霉素抗性基因．

              若lacZ基因完整，便可表达出β-半乳糖苷酶，β-半乳糖苷酶能将培养基中含有的IPTG和X-gal水解成蓝色，形成蓝色菌落圈；若lacZ基因中插入了外源基因，带有puc118质粒的大肠杆菌便不能表达β-半乳糖苷酶，将形成白色菌落．此实验方法可以用于鉴别转基因实验是否获得成功．
              （2）目的基因是 ______
              （3）过程①②一般需要能产生 ______ 的限制性内切酶；过程③④需要 ______ 酶
              （4）用于目的基因受体的大肠杆菌质粒应选择不含氨苄青霉素抗性基因，原因是 ______
              （5）图中的培养基中除含有大肠杆菌必需营养成分外，还应加入 ______ 等物质，用以筛选导入了重组质粒的受体大肠杆菌．
              （6）将上述处理后的大肠杆菌置于图中培养皿内培养，为保证获得单个菌落，常用的接种方法是 ______
              （7）以检测受体大肠杆菌是否导入重组质粒．培养一段时间后出现三种类型：菌落处有蓝色、菌落处有白色、菌落不能生长．
              成功导入重组质粒的菌落圈的表现是 ______
              那些在培养基中不能生长的原因是 ______ ．
              难度：较易
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            • 2． 转基因重组酵母乙肝疫苗是一种乙肝表面抗原（HbsAg）亚单位疫苗，它采用转基因的方法将乙肝病毒表达表面抗原的基因进行质粒构建，转入啤酒酵母菌中，通过培养这种重组酵母菌来表达乙肝表面抗原亚单位．转基因酵母的产生过程如图1所示．质粒上有SnaBⅠ、AvrⅡ、SacⅠ、BglⅡ四种限制性酶切割位点，且酶切序列如表所示．请回答：
              限制酶 识别序列及酶切位点
              SnaBⅠ
              AvrⅡ
              SacⅠ
              BglⅡ
              （1）由于HBsAg基因序列已知，因此过程①可通过 ______ 得到大量HBsAg基因，此外也可将其连接在  
              ______ 上，通过大肠杆菌培养扩增．
              （2）构建含抗病基因的重组质粒时，应选用限制性核酸内切酶 ______ （不定项选择）（A．SnaBⅠB．AvrⅡC．SacⅠD．BglⅡ）对含HBsAg基因的DNA和质粒进行切割，切割一个含HBsAg基因的DNA分子需要消耗
              ______ 个水分子．
              （3）不同的微生物通常需要不同的培养基进行培养，已知酿酒酵母培养基配方为：酵母提取物10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，定容至1L，加入1.5%琼脂粉制成固体培养基．则其灭菌条件应为 ______ ．
              A．高压蒸汽灭菌法，且温度为121℃，压力为1kg/cm2，灭菌15分钟
              B．高压蒸汽灭菌法，且温度为95℃，压力为500g/cm2，灭菌30分钟
              C．将配好的培养基放在超净台中，打开紫外灯和过滤风，灭菌30分钟
              D．在超净台中，打开过滤风，在酒精灯火焰旁用G6玻璃砂漏斗过滤灭菌
              （4）将重组质粒导入酵母菌后，可用 ______ 法接种到固体培养基上．某同学在接种后得到如图2所示的菌落分布，推测该同学接种时可能的操作失误是 ______ ．若欲利用含卡那霉素的培养基筛选已导入HBsAg基因的酵母菌，则应使重组质粒中含有 ______ 作为标记基因，这种培养基属于 ______ 培养基．
              （5）已知酵母菌的最适培养温度是28℃，在培养时可将培养皿倒置并放入 ______ 进行培养．若不倒置培养将导致 ______ ．
              难度：较易
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            • 3． 如图表示运用基因工程技术生产胰岛素的三条途径．据图结合所学知识回答下列问题．
              （1）为了便于将含有目的基因的细胞筛选出来，所选择的质粒上应该具有 ______ 基因．
              （2）培育转基因羊的过程中，科研人员通过感染或 ______ 技术将重组质粒M转移到受体细胞A中，受体细胞A应该是 ______ 细胞
              （3）下列关于过程③的叙述，错误的是 ______ ．
              A．该过程需要用到胚胎体外培养和胚胎移植技术
              B．该过程中需要配置一系列含有不同成分的培养液
              C．该过程所需的培养基中须加入动物血清
              D．该过程可以完全在体外完成
              （4）受体细胞B应该是莴苣的 ______ （填“体细胞”“卵细胞”或“受精卵），导人该细胞后，需对该细胞进行培养，经 ______ 过程形成愈伤组织，以适当配比的 ______ 诱导愈伤组织，直到再生出新植株．
              （5）过程⑥常用的方法是用 ______ 来处理大肠杆菌，使其易于吸纳重组质粒M．
              （6） ______ 是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选 ______ 的最简便方法之一．若以接种环为工具，则应用 ______ 法进行接种．接种前需要检测培养基是否被污染，检测方法是 ______ ．接种后，须将培养皿摆放于恒温箱中培养．“细菌喜荤，霉菌喜素”，通常培养大肠杆菌的培养基要用 ______ 来配置，还要加入一定量的氯化钠，以维持一定的渗透压，还需调节培养基的 ______ ．
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            • 4． 嗜热土壤芽胞杆菌产生的β-葡萄糖苷酶（BglB）是一种耐热纤维素酶，为使其在工业生产中更好地应用，开展了以下试验：
              Ⅰ．利用大肠杆菌表达BglB酶
              （1）PCR扩增bglB基因时，选用 ______ 基因组DNA作模板．
              （2）图1为质粒限制酶酶切图谱．bglB基因不含图中限制酶识别序列．为使PCR扩增的bglB基因重组进该质粒，扩增的bglB基因两端需分别引入 ______ 和 ______ 不同限制酶的识别序列．
              （3）大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述建构好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为 ______ ．
              Ⅱ．温度对BglB酶活性的影响

              （4）据图2、3可知，80℃保温30分钟后，BglB酶会 ______ ；为高效利用BglB酶降解纤维素，反应温度最好控制在 ______ （单选）．
              A.50℃B.60℃C.70℃D.80℃
              Ⅲ．利用分子育种技术提高BglB酶的热稳定性
              在PCR扩增bglB基因的过程中，加入诱变剂可提高bglB基因的突变率．经过筛选，可获得能表达出热稳定性高的BglB酶的基因．
              （5）与用诱变剂直接处理嗜热土壤芽胞杆菌相比，上述育种技术获得热稳定性高的BglB酶基因的效率更高，其原因是在PCR过程中 ______ （多选）．
              A．仅针对bglB基因进行诱变     B．bglB基因产生了定向突变
              C．bglB基因可快速累积突变    D．bglB基因突变不会导致酶的氨基酸数目改变．
              难度：较易
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            • 5． 铁皮石斛是一种名贵中药材，有生津养胃、降血糖和增强免疫力等作用，有效成分为石斛多糖、石斛碱等，温州雁荡山素有“中国铁皮石斛之乡”的美誉．请回答：
              （1）用优良品种自然生长的茎快速繁殖铁皮石斛时，给茎消毒时无需使用的是 ______  （A．乙醇B．无菌水 C．甘露醇 D．次氯酸钠）．在细胞分裂素相对较多和生长素相对较少的培养基中培养茎的切段，待长出较多的 ______ ，将其进行 ______ （处理）后再转入 ______ 培养基中继续培养，直至长成幼苗．这种通过组织培养技术快速繁殖植物的方法，也称为 ______ ．
              （2）研究发现，铁皮石斛的生长发育与其体内的内生菌密切相关．为进一步研究内生菌作用，需要大量内生菌进行相关实验．分离内生菌时最好采用 ______  （A．G6玻璃砂漏斗过滤法 B．血细胞计数法 C．划线分离法 D．涂布分离法），再将纯化的内生菌转移到液体培养基中进行 ______ ．
              （3）研究发现，200mg/L浓度的卡那毒素能有效抑制铁皮石斛细胞的增殖与分化．科学家欲利用卡那霉素，采用农杆菌转化法对现有铁皮石斛品种进行基因改良．在基因工程操作中，导入受体细胞的 ______ 分子应同时带有目的基因和 ______ 基因，这样才能利用含有卡那霉素的培养基将成功导入目的基因的受体细胞筛选出来．
              （4）鉴定铁皮石斛的品质，可通过苯酚-浓硫酸法测定石斛多糖的含量．其原理是：石斛多糖水解成单糖并脱水生成糖醛衍生物后，与苯酚缩合生产橙黄色化合物，在490mm处测定光密度值，以不同浓度的葡萄糖溶液为标准溶液建立标准曲线，便可知道样品的石斛多糖含量．这种方法类似于泡菜汁中 ______ 含量的测定，称之为 ______ 法．
              （5）为高效提取石斛多糖，可在提取液中加入 ______ ，以提高铁皮石斛的出汁率．
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            • 6． 家蚕细胞具有高效表达外源基因能力．将人干扰素基因导入家蚕细胞并大规模培养，可以提取干扰素用于制药．
              （1）进行转基因操作前，需用 ______ 酶短时处理幼蚕组织，以便获得单个细胞．
              （2）为使干扰素基因在家蚕细胞中高效表达，需要把来自cDNA文库的干扰素基因片段正确插入表达载体的 ______ 和 ______ 之间；若要检测干扰素基因在家蚕细胞中是否表达，可以采用的分子检测方法有 ______ 、 ______ ．
              （3）通过PCR技术可大量获取目的基因．PCR反应体系主要包括：扩增缓冲液（含Mg2+）、水，4种脱氧核糖苷酸、模板DNA、 ______ 和 ______ ．
              （4）培养家蚕细胞时，贴壁生长的细胞会产生接触抑制．通常将多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反应器中，这样可以 ______ ，增加培养的细胞数量，也有利于空气交换．
              （5）“桑基鱼塘”生态系统能充分利用废弃物中的能量，形成“无废弃物农业”，这主要是遵循生态工程的 ______ 原理．同时，通过饲养家禽、家畜，栽培食用菌，提高农民经济收入，使保护环境和发展经济相互协调，这又体现了生态工程的 ______ 原理．
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            • 7． 已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白为主要抗原，制备抗A蛋白抗体的部分流程如下图．

              请回答：
              （1）①代表的是 ______ 过程．为获得A基因表达载体，需用 ______ 酶对A基因和运载体进行切割．将A基因表达载体导入动物细胞常用的方法是 ______ ．
              （2）利用PCR技术扩增A基因时，设计引物序列的主要依据是 ______ ，加入引物的作用是 ______ ．
              （3）与体内DNA复制相比较，PCR反应要在一定的缓冲溶液中才能进行，并且要严格控制 ______ 等条件．
              （4）过程③采用的技术是 ______ ，获得的X叫 ______  细胞．
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            • 8． 下列相关酶的应用，错误的是
              A．胰蛋白酶——动物细胞培养
              B．酸性脂肪酶——加酶洗衣粉
              C．耐高温的Taq酶——PCR技术
              D．限制酶——基因工程
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            • 9． 现代生物技术在花椰菜遗传育种工作中得到广泛应用．育种技术人员已经利用分子标记技术对花椰菜种质资源进行遗传多样性分析，并绘制了主要的花椰菜品种核酸指纹，为品种测试、新品种以及种质资源评价利用提供了重要依据．请根据相关信息回答下列问题：
              （1）目前已经建立了花椰菜稳定的遗传转化技术体系，比如将抗虫基因、豇豆胰蛋白抑制剂以及抗黑腐病等目的基因导入到受体中，获得具有较高抗性的新种质，为育种提供了良好的材料．将其目的基因导入花椰菜植株细胞的方法通常为 ______ ．
              （2）为加快花椰菜育种纯化的速度，育种技术人员利用了花药和小孢子等细胞进行培养．从细胞到形成纯合子所用生物工程技术是 ______ ．
              （3）花椰菜的花为两性花，某二倍体花椰菜品种的正常体细胞中染色体数目为18条，在研究其核酸指纹（也是单倍体基因组）时，需测定 ______ 条染色体．
              （4）育种工作者发现，利用白菜（2N=20）与花椰菜（2N=18）进行杂交，可得到白菜-花椰菜二倍体植株，但是却不可育，育种技术人员再用 ______ （化学试剂）处理白菜-花椰菜植株的 ______ 后，便可得到可育的新品种．接着育种技术人员又尝试将该新品种与白菜（2N=20）杂交，仍然可以得到种子，由该种子发育成的植株为 ______ 倍体（用具体数字表示），其染色体数目为 ______ 条．
              （5）以花椰菜为材料也可提取DNA，常用的方法为研磨法，却不能像鸡血那样，用蒸馏水使其破裂，其原因是 ______ ．
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            • 10． 下列关于基因工程技术的叙述，错误的是（　　）
              A．切割质粒的限制性核酸内切酶均特异性地识别6个核苷酸序列
              B．PCR反应中温度的周期性改变是为了DNA聚合酶催化不同的反应
              C．基因工程的基本工具是：限制性内切酶、DNA连接酶
              D．抗虫基因即使成功地插入到植物细胞染色体上也未必能正常表达
              难度：较易
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