[生物——选修3：现代生物科技专题]

    科学家利用现代生物技术培育出了转基因荧光克隆兔，培育原理如下图。请据图回答下列有关问题：

    （1）上述过程中将重组质粒导入甲兔的成纤维细胞时，通常用______________法。

    （2）为避免杂菌污染，②过程的培养环境要求__________________；培养的空气中通常需含5% CO₂，目的是___________________________。培养基中除加入一些基本的营养成分外，通常还需加入__________________等一些天然成分。此时还应该对所需细胞进行筛选，方法是_______________________________。

    （3）胚胎移植前必须对代孕母兔和供体母兔用激素进行____________处理。要获得核基因型相同的多个胚胎，常采取的方法是_________法，该方法对胚胎进行处理的时期是__________________。

1型糖尿病患者的另一种治疗方法是可以通过注射胰岛素的方法来缓解病情。利用微生物基因工程技术发酵生产可以获得大量胰岛素。现有一种可以作为目的基因运载体的普通质粒，用不同的酶切割质粒如图2所示[ 1kb即1000个碱基对，*表示EcoRV限制酶切割的一个黏性末端（单链片段）]。请将Mbol酶和EcoRV酶在图3中标注其所在位置和切割的长度。

（1）如用大肠杆菌作为受体细胞，则该大肠杆菌中不应含有青霉素抗性基因，请阐述其原因？                                   。

（2）培养导入了重组质粒的大肠杆菌时，需配制培养基。该培养基除含有大肠杆菌必需的葡萄糖、氮源、无机盐、水、生长因子等营养物质外，还应加入的物质有（    ）（多选）

A．细胞分裂素 B．琼脂 C．噬菌体 D．青霉素 

（3）培养基配制和灭菌时，灭菌与调节pH的先后顺序是         ；一般对配制的培养液采用

         法灭菌。

（4）微生物接种培养时，可采用两种方法。下图为接种后微生物培养的效果图，那么，获得图A效果的接种方法是______________，获得图B效果的接种方法是_____________。

（5）与大肠杆菌相比，嗜热菌具有的特点是         。（多选）

    下图表示的是“DNA的粗提取和鉴定”实验的实验步骤。请回答下列问题：

（1）取鸡血时，需要在容器中加入一定量的柠檬酸钠，目的是              。

（2）步骤①和步骤⑤中加蒸馏水的目的分别是               和             。

（3）步骤⑥应该弃去的是        ，步骤⑧加入冷酒精的作用是               。

（4）如果步骤⑩中的A试管加入含DNA的NaCl溶液和二苯胺，则B试管中加入的是

                                      。A试管的现象是                     。

40【生物——选修3：现代生物科技专题】（15）

    EPSPS是叶绿体中的一种酶，它能催化芳香族氨基酸的合成；草甘膦是一种除草剂，它能竞争性抑制EPSPS的作用，而使植物死亡，科学家将EPSPS基因转入大豆，使其在大豆细胞表达更多的EPSPS。下图为转基因大豆在研发过程中步骤和转化过程如图所示，回答相关问题：

（1）EPSPS基因导入大豆细胞的方法是                        。

（2）EPSPS基因应转移至土壤农杆菌的            ，将重组质粒导入土壤农杆菌时，一般要用         处理土壤农杆菌。然后在一定条件下将外植体接种在含              培养基上培养，EPSPS基因转入植物细胞并整合到植物基因组中。

（3）将上述过程获得的外植体接种在含            的培养基中培养形成抗性外植体，经过               形成愈伤组织。

（4）可用                方法测定EPSPS基因是否整合到大豆基因组中；如何检测转基因植株是否具有抗药性状                             。