(2)为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物B的单菌落，可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样，并应选用以________为碳源的固体培养基进行培养。

(3)若要测定培养液中微生物B的菌体数，可在显微镜下用____________直接计数；若要测定其活菌数量，可选用________法进行计数。

(4)为了确定微生物B产生的脂肪酶的最适温度，某同学测得相同时间内，在35 ℃、40 ℃、45 ℃温度下降解10 g油脂所需酶量依次为4 mg、1 mg、6 mg，则上述三个温度中，________℃条件下该酶活力最小。为了进一步确定该酶的最适温度，应围绕________℃设计后续实验。

下图表示细胞融合技术的一些过程。阅读下列材料，并简要回答下列问题。

(注“十”代表有抗性，“-”代表无抗性）

材料一:近年来，细胞工程已进人高速发展阶段，已经成为生物学领域中一颗耀眼的明星。该工程可在细胞水平或细胞器水平上，按照人们的意愿获得新型生物或特种细胞产品。

材料二：微生物采油的关键技术是获得性能优异的菌种，应用原生质体融合技术将两种微生物进行融合，构建耐中高温采油微生物引起了科学家的广泛关注。宋绍富等人选用细菌I和细菌JD先后进行了各自抗生素抗性以及融合实验的相关研究。研究发现，I菌与JD菌对不同抗生素的抗性是不同的，测量结果见上表。

（1）上图中，若A细胞和B细胞均为植物细胞，细胞融合完成的标志是____________ ；形成的D细胞还要应用植物组织培养技术将其培养成植株。

（2）上图中，若A细胞和B细胞均为动物细胞，与植物细胞融合相比，从A细胞和B细胞到C细胞的过程中，______________是诱导动物细胞融合特有的诱导因素，该过程说明了细胞膜具有_______________。

（3）利用I菌和JD菌进行细胞融合时，首先应使用 _______________法去除菌体的细胞壁，将获取的______________保存在等渗溶液中待用。

（4）在对I菌和JD菌融合后的融合子进行筛选时，比较理想的是在培养基中添加3μg/ml红霉素（或3μg/ml利福平）与_______________两种抗生素,此种培养基称为_____________。             

(1)目的菌生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的____________。实验需要振荡培养，振荡培养的作用是__________________________________，由此推测目的菌的代谢类型是____________。

(2)培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量________的培养液，接入新的培养液中连续培养，使目的菌的数量增多。

(3)转为固体培养基时，常采用平板划线法或_____________ 进行接种。平板划线法所使用的工具称_______，这种工具操作时应采用的灭菌方法是_________。接种时，在第二次及其后的划线操作时，总是从__________________开始划线。

(4)某同学将污水样液制成了10¹〜10⁴的四个稀释样液，分别取0.1mL接种到4组(每组4个)固体选择培养基上，若在10³组的4个平板上，获得的菌落数是357、39、38和37，则每升污水样液中的活菌数约为____________个。

(5)在上述实验操作过程中，获得纯净目的菌的关键是_________________。

(1)酿酒所需的微生物是        ，产生的酒精可以与            (试剂)发生显色反应。

(2)在变酸的酒的表面观察到的菌膜是           在液面大量繁殖而形成的。若要对该菌进行初步分离纯化，比较便捷的操作是：采用            法(填“平板划线”或“稀释涂布平板”)把它们接种到          (填“固体”或“液体”)培养基上，经培养得到肉眼可见的           。

(3)实验室中常用                法对培养基及器皿进行灭菌。不同培养基的具体配方不同，但一般都含有水、            、           和无机盐。

已知微生物A可以产生油脂，微生物B可以产生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生产。回答有关问题：

(1)显微观察时，微生物A菌体中的油脂通常可用________染色。微生物A产生的油脂不易挥发，可选用__________(填“萃取法”或“水蒸气蒸馏法”)从菌体中提取。

(2)为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物B的单菌落，可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样，并应选用以________为碳源的固体培养基进行培养，培养基灭菌采用的最适方法是____________   法。

(3)若要测定培养液中微生物B的菌体数，可在显微镜下用________________直接计数；若要测定其活菌数量，可选用______________法进行计数。

(4)为了确定微生物B产生的脂肪酶的最适温度，某同学测得相同时间内，在35℃、40℃、45℃温度下降解10 g油脂所需酶量依次为4 mg、1 mg、6 mg，则上述三个温度中，______ ℃条件下该酶活力最小。为了进一步确定该酶的最适温度，应围绕________ ℃设计后续实验。

下表是培养某微生物的培养基的配方，请回答下列问题：

(1)培养基的类型很多，但培养基中一般都含有水、碳源、________和无机盐。上述培养基配方中能充当碳源的成分是____________________。培养基配制完成以后，一般还要调节pH并对培养基进行________处理。

(2)在配制培养基时，除考虑营养条件外，还要考虑________、____________和渗透压等条件。

(3)在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养器皿进行________(填“消毒”或“灭菌”)；操作者的双手需进行清洗和________；空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质________，还能损伤DNA的结构。

(4)分离纯化微生物最常使用的接种方法是__________和________________。

回答下题：

（一）酵母膏胨葡萄糖（YPD）培养基是一种常用的酵母菌培养基，其基本配方是：1%酵母膏，2%蛋白胨，2%葡萄糖。某兴趣小组欲用超市购买的干酵母进行系列生物技术实践尝试，请回答下列问题：

（1）干酵母处于休眠状态，为迅速活化酵母菌，应将干酵母放在小烧杯中，加入少量温水和极少量  ______  ，混匀。

（2）为防止YPD培养基中的葡萄糖分解碳化，要选用以下选项中的 ______ 灭菌条件。

A．121℃、lkg/cm²压力、15min         B．121℃、500g/cm²压力、15min

C．90℃、500g/cm²压力、30min         D．90℃、500g/cm²压力、15min

有些培养基成分中含不能加热灭菌的化合物，如尿素等，应该用  ______  除菌。

（3）若要对酵母菌进行划线分离培养，则应在培养基中添加  ______  ，并用  ______  蘸取菌液，进行划线。

（二）下图为转基因奶牛的克隆过程，据图回答问题。

（4）动物细胞培养基的营养成分中，应该添加  ______ 等一些天然成分。不管是原代培养还是传代培养过程中一般都需要用  ______酶处理使细胞分散。

（5）③操作过程称为  ______  技术，图中早期胚胎的外表一层扁平细胞B称为  ______  。

（6）在④操作前应对受体母牛进行 _______  处理。

乙醇等“绿色能源”的开发备受世界关注。利用玉米秸杆生产燃料酒精的大致流程为：

 (1)玉米秸杆经预处理后，应该选用_________酶进行水解，使之转化为发酵所需的葡萄糖。这种酶由_____酶、_____酶和__________酶组成。

 (2)从以下哪些微生物中可以提取上述预处理所需的酶 （    ）

A.酿制果醋的醋酸菌   B.生长在腐木上的霉菌 

C.制作酸奶的乳酸菌   D.生产味精的谷氨酸棒状杆菌    

(3)若从土壤中分离产生这种酶的微生物，培养基中的碳源为___________。 

(4)发酵阶段需要的菌种是__________，在产生酒精时要控制的必要条件是_________、________。发酵产生酒精的反应式为_____________________。    

苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如下图所示，①为土壤样品。请回答下列问题。

(1)②中培养目的菌株的选择培养基中应加入________作为碳源，②中不同浓度碳源的培养基________(A.影响;B.不影响)细菌的数量，如果要测定②中活细菌数量，常采用________法。

(2)④为对照，微生物在④中不生长，在⑤中生长，④与⑤培养基的主要区别在于________;使用________法可以在⑥上获得单菌落。

(3)采用固体平板培养细菌时为什么进行倒置培养? ______________________。

(4)实验过程中如何防止其他微生物的污染?__________________________。

分析有关资料，回答问题。

I.下表是某培养基的配方。

（1）将幽门螺杆菌接种到pH适宜的该培养基中，最常用的接种方法有__________和稀释涂布平板法。然后置于37℃下培养一段时间后，在该培养基中幽门螺杆菌的数目比刚接种时少，主要原因是____________________________。

（2）纯化细菌时使用的培养基一般用_____________法灭菌，_________________（填“可”或“不可”）用加入抗生素的方法防止杂菌感染。

（3）某小组采用平板划线法分离该细菌。在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是____________________________________________。

II.下列是提取胡萝卜素的操作，请回答有关的问题：

（4）工业生产上，用养殖的岩藻作为原料提取胡萝卜素时，_____________（填“需要”或“不需要”）将新鲜的岩藻干燥。

（5）现有乙醇和乙酸乙脂两种溶剂，应选用其中的________作为胡萝卜素的萃取剂，不选用另外一种的理由是____________________________________________。

Ⅲ.   下图表示利用小鼠胚胎干细胞(ES细胞)做的两项研究，请分析回答下列问题。

(2)a过程构建基因表达载体所使用的工具酶有______________________________，将基因表达载体导入ES细胞的方法是______________。

(3)完成c、d过程的胚胎工程技术分别是________________、_________________。

(4)正常情况下癌细胞的产生是__________导致的；用特定癌细胞的抗原刺激B淋巴细胞，再与骨髓瘤细胞融合后获得________________，与抗癌药物结合制成“生物导弹”，从而定向杀死小鼠癌症模型体内的癌细胞。