5.
(14分)
Ⅰ.转基因克隆猪已在我国培育成功。研究组首先从猪胚胎皮肤细胞中分离出纤维细胞,进行体外培养。通过电穿孔的方法将构建好的基因表达载体转入纤维细胞,经筛选后将转基因纤维细胞进行体细胞克隆,再将重组胚胎移入代孕母猪子宫内,最终获得转基因克隆猪。请回答:
(1) 在对猪纤维细胞进行培养时,需要在细胞培养液中添加一定量的 ,以防止培养过程的污染。此外,应定期更换培养液,防止 对细胞自身造成危害。
(2) 筛选转基因细胞时,需要用到基因表达载体中的 。
(3) 在进行体细胞克隆前,先要从屠宰场收集猪卵巢,采集 ,并在体外培养成熟。然后将转基因纤维细胞核注入 中,再经过一系列过程获得含有目的基因的重组胚胎。
(4) 为了提高重组胚胎的利用率,可对处于 阶段的胚胎进行均等分割,再将重组胚胎移入代孕母猪子宫中继续发育成转基因克隆猪。一般地,代孕母猪需要用激素处理,促使其 以利于受孕。
Ⅱ.土壤中有些细菌含有脲酶,可通过降解尿素作为其生长的氮源。现对土壤中的这类细菌进行分离实验,请回答:
(1) 分离培养细菌时必须进行无菌操作,包括培养基和各种器皿都必须是无菌的,常用的灭菌方法有 (至少答2种)。
(2) 可用 法分离纯化得到能降解尿素的菌种。在接种活菌的过程中,要在 旁进行操作,接种后的培养皿 于37℃的 中培养。
(3) 用含有酚红指示剂的培养基筛选能分泌脲酶的细菌,若培养基中存在分解尿素的细菌,其菌落周围会出现红色环带,这是由于尿素被分解产生的 使PH升高,使酚红指示剂产生颜色变化,从而证明这一菌株以尿素为氮源。变色区域越大,表明该菌株利用尿素的能力 。