下列有关生物技术实践操作的叙述，正确的是

回答下列(一)、(二)小题：

    (一)牛奶是微生物生长的良好培养基。生鲜牛奶中的微生物情况反映了奶牛的健康状况，也影响奶制品的运输和贮藏；牛奶在饮用前都要经过巴氏消毒，以杀死有害微生物。

    (1)为检测消毒前后牛奶中细菌含量变化情况，做如图操作。用无菌吸管从三角烧瓶中吸取1 mL生牛奶稀释液至盛有9 mL无菌水的试管中，如此重复3次，将10 mL生牛奶稀释到10^－4浓度后，取0.1 mL滴在培养基上。

    ①将牛奶稀释液滴加在培养基上进行涂布，应选择的涂布工具是_______________。

    ②该涂布工具最合适的灭菌方法是_______________________。

    (2)图中所示方法为稀释培养法，按此方法培养得到的3个培养皿中菌落数分别为25个、23个、24个，则生牛奶中每毫升含细菌数为______个。

    (3)消毒后牛奶中绝大部分细菌被杀死，若用稀释平板法检测消毒后牛奶是否含有细菌，则在操作步骤上应作什么改动?______________________。

    (4)涂布结束后将培养皿______，在37℃______________中培养。

    (5)细菌种群进化过程中，起主要作用的变异是______。

    A．环境条件    B．基因重组    C．基因突变    D．染色体变异

    (二)兔肝细胞中的基因E编码代谢甲醛的酶，拟利用基因工程技术将基因E转移入矮牵牛中，以提高矮牵牛对甲醛的代谢能力，请回答：

    (1)从兔肝细胞中提取mRNA，在_________酶的作用下形成互补DNA。然后以此DNA为模板在体外利用____________反应大量扩增，得到基因E。在相关酶的作用下，将基因E与Ti质粒连接在一起，形成___________，再导入用氯化钙处理的_______________，侵染矮牵牛叶片。将被侵染的叶片除菌后进行培养，最终得到转基因矮牵牛。其中培养过程正确的是________________(A．叶片在含合适浓度生长素的培养基上分化形成愈伤组织  B．愈伤组织在含细胞分裂素和生长素配比较高的培养基上形成芽  C．再生的芽在细胞分裂素含量高的培养基上生根  D．愈伤组织在含合适浓度植物生长调节剂的培养基上脱分化形成再生植株)。

    (2)取转基因矮牵牛叶片，放入含MS液体培养基和适量浓度甲醛且密封的试管中，将试管置于__________上，进行液体悬浮培养。一段时间后测定培养基中甲醛的含量，以判断基因E是否在转基因矮牵牛中正常表达。培养过程中液体培养基的作用：一是提供营养；二是__________，从而使叶片保持正常形态。

(1)泡菜制作时发挥主要作用的微生物是乳酸菌，常见的乳酸菌有________两类。泡菜具有独特的酸味，主要是因为________，该反应过程中，底物所含的稳定化学能的主要去向是________。

(2)实验室可采用________法进行乳酸菌菌种纯化，在对该菌种进行培养时，与常规微生物培养基相比还需要额外在培养基中添加________。实验室测定泡菜中亚硝酸盐的含量时，亚硝酸盐首先与________发生反应，随后再通过相关反应形成玫瑰红色染料，再与已知浓度的________进行比色。

(3)市场上购买的真空包装泡菜，在没有发生漏气的状态下发生了“胀袋”现象，甲同学怀疑是杂菌污染导致的，乙同学怀疑是乳酸菌大量繁殖导致的，说出你支持谁的观点并说明理由：________。

为了调查某学校附近河流的水质状况，该学校生物兴趣小组测定了河流水样中的细菌含量，并进行了细菌的分离等工作。回答下列问题：

（1）如图，该小组采用的是_______________分离水样中的细菌。操作时，接种环通过_________灭菌，在第二次及以后的操作时，总是从上一次的末端开始，这样做的目的是____________________________________。

（2）该实验组将接种好的培养皿在恒温箱中培养时倒置，其目的是_________________________；在培养基上产生的单个菌落在生态学中可以被称为 __________________。

（3）根据培养皿上菌落的平均数可以计算河水中该细菌的密度，但计算的数据要比实际活菌的数目少，原因是_____________________________________。除了上述的活菌计数法外，______________也是测定微生物数量的常用方法。

（4）该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：________________

苹果醋是指苹果汁经发酵而成的苹果原醋，再兑以苹果汁等原料而成的饮品。下图是苹果醋的制作流程简图，请据图回答下列问题：

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(1)过程①②所用的微生物在结构上最明显的区别是_______________。这两个过程所需发酵条件(环境因素)最明显的区别有__________、____________。

(2)过程①②中产物的检测，除了嗅味和品尝外，还可分别用____________和____________检测。

(3)若要在过程②的发酵产物中分离出所需菌种，需进行纯化培养。纯化培养的原理是：在培养基上得到____________________________，即可获得较纯的菌种。常用的接种方法有平板划线法和____________，配制固体培养基所用的凝固剂通常是________。

（每空1分，共7分）某化工厂的污水池中含有一种有害的难以降解的有机化合物A。研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功筛选到能高效降解化合物A的细菌（目的菌）。实验的部分步骤如下图所示。请回答下列问题：

（1）培养基中的化合物A能为目的菌的生长繁殖提供________，筛选过程中所用的培养基的常用灭菌方法是________。

（2）实验中“重复多次”的目的是________，为了达到分离纯化目的菌的目的，在固体培养基上接种的方法可以是________。

（3）实验过程中振荡培养，“振荡”的目的是________。

（4）实验结束后，使用过的培养基应该进行灭菌后才能倒掉，目的是________。

（5）某同学计划统计污水池中“目的菌”的数目，需要设计________作为对照组，此对照组的目的是证明培养基是否被污染。

（1）该小组采用稀释涂布平板法检测水样中细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是__________________________________________；然后，将1mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37, 据此可得出每升水样中的活菌数为___________。

（2）该小组采用平板划线法分离水样中的细菌，操作时，接种环通过___________灭菌，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线，这样做的目的是_____________________________________________________。

（3）示意图A和B中，________表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。

 （4）该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养，结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能提高培养液中________的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高________的利用率。

（4）为检测生产用水中的大肠杆菌含量，每次将200ml水样过滤后，取滤膜放在伊红美蓝培养基上，重复三次．将3个平板置于37℃恒温箱中培养24h后挑选 ______ 色的菌落进行计数．平板上目的菌菌落数分别为125、117和130，据此可计算出每升水样中的大肠杆菌数为 ______ 个．若采用显微镜直接计数法，计数结果会偏高，原因是______ 。

（5）桉树油对大肠杆菌有抑制作用，也可作为食品添加剂，其挥发性强，难溶于水，用桉叶提取桉树油常用______ 法。