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            • 1． 基因工程操作步骤中，需要从受体细胞群中筛选出已获得目的基因的细胞，如图中①-③示一种筛选方法的过程．pBR322质粒含有两个抗性基因，分别是Ampr（氨苄青霉素）抗性基因和Tetr（四环素）抗性基因，其中在Tetr抗性基因上有下列目的基因的插入位点（插入将导致Tetr抗性基因功能性失活），请回答：

              （1）如图中①过程所需的酶除DNA连接酶以外，需要的限制酶是    ．
              （2）经过①过程，pBR322质粒可能出现的两种结果：A1是     A2是    ．
              （3）经过导入过程，B（受体细菌）可能出现结果是    （多选）
              A．导入未成功的细菌                   B．含A1的细菌
              C．含A2的细菌                        D．含A1和A2的细菌
              （4）②过程表示用含四环素（使细胞停止生长，但不致死）和环丝氨酸（使生长的细胞致死）的培养基中培养细菌甲，则培养结果C表示在培养基中可能存活的细菌包括    ．
              （5）若要进一步筛选出符合要求的受体细胞D，则③过程需要做的处理是（请参照过程②的方法）    ．
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            • 2． 根据所学知识回答问题：
              （1）基因工程中基因表达载体除包括目的基因外，还必须有    及标记基因等．
              （2）若要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的    中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的    中．植物组织培养的主要原理是植物细胞具有    ，具体过程是在    和人工控制条件下，将离体的植物器官、组织、细胞培养在人工配制的培养基上，给予适宜的条件，诱导其经过    产生愈伤组织，最终形成完整的植株．
              （3）在哺乳动物的核移植实验中，通过一定的措施将受体细胞激活，使其进行细胞分裂和发育，当胚胎发育到    阶段时，将胚胎移入受体（代孕）动物体内．
              （4）生态工程是实现循环经济最重要的手段之一，请写出它遵循的基本原理（至少答两项）    ．
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            • 3． 以下是生物学技术制备抗体的两个途径模式简图．

              （1）在获取抗体之前，需要向健康人体注射特定抗原（如乙肝疫苗），图中细胞A在人体主要参与    免疫．
              （2）过程①的完成采用的主要方法是    ，依据的生物学原理是    ．过程④需要    酶．
              （3）在基因表达载体中，氨苄青霉素抗性基因的作用是    ，启动子的作用是    ．
              （4）如果想用棉花产生该种抗体，则⑥过程的受体细胞通常选用    ，经过筛选后再侵染棉花体细胞，转化成功后通过    技术获得能产抗体的转基因棉花植株．
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            • 4． 回答下列有关生物工程的问题．
              Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞．科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗，其技术流程如图1（图中数字序号表示的是相关过程）．

                                        图1

                                                图2 
              （1）在核移植前应去除    的细胞核．
              （2）过程②，重组胚胎培养到一定时期时，可从其    中分离出的ES细胞的特点是    ．
              （3）过程③中，需要构建含有Rag2基因的表达载体，具体过程如图2．图中Ampr表示青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因，限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ切割形成的末端均不相同．可以根据Rag2基因的    设计引物，利用PCR技术扩增Rag2基因片段．为了使目的基因和质粒定向连接并且有利于受体细胞的筛选，④过程采用的酶是    ，⑤过程采用的酶是    ．如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ同时对质粒进行切割，假设同时只有任意两个位点被切断且每次机会相等，则形成的DNA片段有    种，其中含有完整四环素抗性基因的DNA片段占    ．
              （4）在ES细胞培养液中加入    可以体外诱导定向形成造血干细胞．
              （5）为检测Rag2基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的    ，用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验．
              难度：较难
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            • 5． 科学家尝试使用Cre/loxP位点特异性重组系统，在检测目的基因导入成功后，删除转基因烟草细胞内的抗除草剂基因．其技术过程如下（图中的■代表基因前的启动子，启动子是基因（gene）的一个组成部分，控制基因表达（转录）的起始时间和表达的程度．启动子就像“开关”，决定基因的活动．），据图1回答：

              （1）loxP是一种只有34个碱基对构成的小型DNA片段，是有两个13个碱基对反向重复序列和中间间隔的8个碱基对序列共同组成，自身不会表达，插入质粒后也不影响原有基因的表达，其碱基序列如下：

              Cre酶能特异性地识别此序列并在箭头处切开loxP，其功能类似于基因工程中的    酶．从遗传学角度分析，Cre酶改变质粒产生的结果相当于可遗传变异中的    ．
              （2）将重组质粒导入到植物细胞后，通过    和    两个过程可以形成完整的植株．作为标记基因，抗除草剂基因用于检测目的基因是否导入成功的原理是    ．
              （3）经检测成功后，抗除草剂基因已没有用途，继续留在植物体内可能会造成的安全问题是    ．经Cre酶处理后，质粒中的两个loxP序列分别被切开后，可得到如上图右侧的这两个DNA分子．由于    _的原因，抗除草剂基因不再表达，之后会在培养过程中消失．
              （4）loxP序列是有方向性的．如果经Cre酶处理后，发现抗除草剂基因反向连接在质粒一上，则原来质粒一中这两个loxP序列的方向是    ．
              A．两个都是正向  B．两个都是反向 C．一个正向一个反向  D．与方向无关．
              难度：较难
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            • 6． （2016•黄浦区一模）如图所示，质粒PBR322上含有青霉素抗性基因（XR）和四环素抗性基因（YR）．其中，XR内部含有限制酶KasI识别序列，YR内部含有限制酶FseI、HpaII、
              NaeI、NgoMIV识别序列，且这些识别序列在整个质粒上均仅有一处，目的基因内部不存在这些识别序列．
              （1）质粒PBR322的本质是    ．
              FseI、HpaII、NaeI、NgoMIV中限制酶的作用特点是    ．
              （2）NaeI酶切目的基因和质粒，加入DNA连接酶连接后，进行大肠杆菌受体细胞导入操作．之后，受体细胞的类型包含    （多选）
              A．抗青霉素、抗四环素         B．抗青霉素、不抗四环素
              C．不抗青霉素、抗四环素        D．不抗青霉素、不抗四环素
              （3）若用KasI和FseI联合酶切上述重组质粒，则可能产生的酶切片段数    ．
              A.2             B．3            C．4              D．5
              （4）动物基因工程通常以受精卵作为受体细胞的根本原因是    ．
              A．受精卵能使目的基因高效表达B．受精卵可发育成动物个体
              C．受精卵基因组更易接受DNA的插入D．受精卵尺寸较大，便于DNA导入操作
              （5）若目的基因模板链中的TGA序列对应1个密码子，翻译时识别该密码子的tRNA上相应的碱基序列是    ．通过筛选出的受体细胞内，目的基因能成功表达的原因是    ．
              难度：较难
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            • 7． 图1中①～③分别表示人体细胞中发生的3种生物大分子的合成过程．请回答下列问题．
              （1）细胞中过程②发生的主要场所是    ．
              （2）已知过程②的α链中鸟嘌呤与尿嘧啶之和占碱基总数的54%，α链及其模板链对应区段的碱基中鸟嘌呤分别占29%、19%，则与α链对应的DNA区段中腺嘌呤所占的碱基比例为    ．

              （3）由于基因中一个碱基对发生替换，而导致过程③合成的肽链中第8位氨基酸由异亮氨酸（密码子有AUU、AUC、AUA）变成苏氨酸（密码子有ACU、ACC、ACA、ACG），则该基因的这个碱基对替换情况是    ．
              （4）在人体内成熟红细胞、浆细胞、记忆细胞、效应T细胞中，能发生过程①②③的细胞是    ．
              （5）人体不同组织细胞的相同DNA进行过程②时启用的起始点     （填“都相同”“都不同”或“不完全相同”），其原因是    ．
              （6）图2为某病毒的遗传物质，上有两个限制酶酶切位点（标为P和Q），用相关酶完全切割后得到的每个DNA片段的长度如表格所示．下列说法错误的是    （多选）
              切割位置限制酶得到的每个DNA片段的长度
              QEcoRⅠ3，7
              PBamHⅠ8，2
              A．该病毒的遗传物质是DNA或RNA
              B．该病毒的中心法则是DNA→RNA→蛋白质
              C．若用EcoRⅠ和BamHⅠ完全切割该病毒DNA，新形成了8个游离的磷酸基团
              D．若用EcoRⅠ和BamHⅠ完全切割该病毒DNA，得到的各种长度的DNA片段有3、5、2．
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            • 8． 限制性内切酶SalⅠ识别的序列是GTCGAC，并在CG之间酶切，限制性内切酶Xhol识别的序利是CTCGAG，酶切也在CG之间．如果将SalⅠ酶切过的插入片段与Xhol酶切过的质粒混合，再进行连接反应，那么产生的重组质粒所具有的性质是（　　）
              A．使用SalⅠ或Xhol处理，插入物都会释放出来
              B．SalⅠ处理可以使插入物释放出来，但Xhol不行
              C．Xhol处理可以使插入物释放出来，但SalⅠ不行
              D．无论使用SalⅠ或Xhol处理，插入物都不会释放出来
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            • 9． 内皮素（ET）是一种含21个氨基酸的多肽，它有强烈的血管收缩和促进平滑肌细胞增殖等作用．研究发现内皮素功能异常与高血压、糖尿病、癌症等有着密切联系．内皮素主要通过与靶细胞膜上的内皮素受体结合而发挥生物学效应．ETA是内皮素的主要受体，科研人员试图通过构建表达载体，实验ETA基因在细胞中高效表达，为后期ETA的体外研究以及拮抗剂的筛选、活性评价等尊定基础．其过程如下（图中SNAP基因是一种荧光蛋白基因，限制酶ApaⅠ的识别序列为C↓CCGGG，限制酶XhoⅠ的识别序列为C↓TCGAG）．请分析回答：

              （1）完成过程①需要的酶是    ；与过程②相比，过程①特有的碱基配对方式是    ．
              （2）过程③中，限制酶XhoⅠ切割DNA；使    键断开，形成的黏性末端是    ．用两种限制酶切割，获得不同的黏性末端，其主要目的是    ．
              （3）过程⑥中，要用    预先处理大肠杆菌，使其处于容易吸收外界DNA的感受态．
              （4）利用SNAP基因与ETA基因结合构成融合基因，目的是    ．
              （5）人皮肤黑色素细胞上有内皮素的特异受体，内皮素与黑色素细胞膜上的受体结合后，会刺激黑色素细胞的分化、增殖并激活酪氨酸酶的活性，从而使黑色素急剧增加．美容时可以利用注射ETA达到美白祛斑效果，试解释：    ．
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            • 10． 图示方案为人们获得生物新品种的过程，请回答下列问题：
              方案Ⅰ：抗冻蛋白基因
              导入
              烟草细胞→抗冻烟草
              方案Ⅱ：A基因
              导入
              免疫过的B细胞→体外培养→单克隆抗体
              方案Ⅲ：人的生长激素基因
              导入
              牛的受精卵→早期胚胎
              移植
              受体母牛→转生长激素牛
              （1）基因工程的核心步骤是    ．方案Ⅰ中，将抗冻蛋白基因导入烟草受体细胞常用的方法是    ．从分子水平检测抗冻烟草是否培育成功的方法是：    ．
              （2）推测方案Ⅱ中A基因所起的作用是    ．
              （3）方案Ⅲ中的转基因牛可以通过分泌乳汁来生产人的生长激素．人的生长激素基因在导入受体细胞前，基因的首段必须含有使其仅能在山羊    细胞中特异性表达的    ．
              （4）方案Ⅲ中的早期胚胎在移植入受体母羊子宫之前，必须对胚胎进行性别鉴定，一般是取处于    时期的    细胞进行检测．
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