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            • 1. 固定化的高温淀粉酶被大规模用于工业生产。研究者从热泉中筛选了高效产生高温淀粉酶的嗜热菌,其筛选和固定过程如图1所示。菌株在含有淀粉的固体培养基上可释放淀粉酶分解淀粉,在菌落周围形成透明圈。请分析回答:

              (1)与大肠杆菌相比,嗜热菌DNA碱基组成的特点是                          

              (2)Ⅰ号、Ⅱ号培养基的配制主要包括如下步骤:a.溶化,b.调pH,c.灭菌,d.称量。正确的操作步骤顺序是                 。溶化过程中当琼脂完全熔化后,还需用蒸馏水                 

              (3)将配制好的培养基放入高压蒸汽灭菌锅内,加盖并将排气管插入内层灭菌桶内的排气槽内。拧紧固定盖子的螺栓时,应注意                ,以免漏气。

              (4)1号培养基中以淀粉为唯一碳源,从功能上讲该培养基属于                 。待菌落长出后,应选择                 的菌落接种到Ⅱ号培养基,第二次及以后的划线,总是从                 开始,实验中过程③的目的是                 

              (5)若要保证高温淀粉酶的活性在固定化处理时不受损失,且在多次重复使用后仍能维持稳定的酶活性,则最好选择图2中的                 固定化工艺(填图中字母)。

            • 2.

              为研究影响酶活性的条件,进行了以下实验:

              实验材料:2支20mL的注射器(除去针头),一段长5cm左右的硅胶管,镊子,培养皿,打孔器,滤纸,3%NaOH溶液,pH值分别为5.0、6.0、7.0、8.0、9.0的缓冲液,新鲜猪肝,H2O2 酶滤纸小圆片(将1g新鲜猪肝剪碎,置于研磨过滤器中充分研磨,加入10mL蒸馏水制成鲜肝液。用打孔器制作直径1.5厘米的滤纸小圆片,用鲜肝液浸泡1min后待用)。

              实验步骤:

              ①拉出A注射器的活塞,用镊子将1片H2O2 酶滤纸小圆片贴到活塞的顶端,将活塞推入注射器底。

              ②用A注射器吸取2mL pH为5.0的缓冲液。

              ③用B注射器吸取3% H2O2溶液。

              ④用硅胶管如下图连接A注射器与B注射器

              ⑤将B注射器中的3% H2O2溶液迅速推入A注射器,

              ⑥平放装置,观察注射器中活塞的变化。

              ⑦利用该装置重复上述实验,测量pH为6.0、7.0、8.0、9.0时的情况。

              (1)本实验的自变量为___________,因变量为____________,因变量可通过_______________________计算得出。

              (2)若上述步骤③改为:用A注射器吸取3% H2O2溶液,堵上注射器头部,通过刻度读出反应产生的气体量,与实际值相比,结果______________(填增大或减小),因为______________________。  

              (3)若利用上述装置研究酶浓度对实验的影响,实验的改进之处是_________________。

              (4)若利用上述装置研究温度对酶活性的影响,应在pH为________ 环境下设置合理温度梯度。该设计的不合理之处是__________________,实验误差随温度上升而___________。

            • 3. 为生产具有特定性能的α-淀粉酶,研究人员从某种海洋细菌中克隆了α-淀粉酶基因(1656个碱基对),利用基因工程大量制备α-淀粉酶,实验流程见下图。请回答下列问题:

              (1)利用PCR技术扩增α-淀粉酶基因前,需先获得细菌的______。
              (2)为了便于扩增的DNA片段与表达载体连接,需在引物的______端加上限制性酶切位点,且常在两条引物上设计加入不同的限制性酶切位点,主要目的是______。
              (3)进行扩增时,反应的温度和时间需根据具体情况进行设定,下列选项中______的设定引物有关,______的设定与扩增片段的长度有关。(填序号)
              ①变性温度②退火温度   ③延伸温度④变性时间⑤退火时间   ⑥延伸时间
               (4)下图表示筛选获得的工程菌中编码α-淀粉酶的mRNA的部分碱基序列:

              图中虚线框内mRNA片段包含______个密码子,如虚线框后的序列未知,预测虚线框后的第一个密码子最多有______种。
              (5)获得工程菌表达的α-淀粉酶后,为探究影响酶活性的因素,以浓度为1%的可溶性淀粉为底物测定酶活性,结果如下:

              缓冲液

              50mmol/L Na2HPO4-KH2PO4

              50mmol/L Tris-HCl

              50mmol/L Gly-NaOH

              pH

              6.0

              6.5

              7.0

              7.5

              7.5

              8.0

              8.5

              9.0

              9.0

              9.5

              10.0

              10.5

              酶相对活性%

              25.4

              40.2

              49.8

              63.2

              70.1

              95.5

              99.5

              85.3

              68.1

              63.7

              41.5

              20.8

              根据上述实验结果,初步判断该α-淀粉酶活性最高的条件为_________________。

            • 4.

              为了研究温度对某种酶活性的影响,设置三个实验组:A组(20℃)、B组(40℃)和C组(60℃),测定各组在不同反应时间内的产物浓度(其他条件相同,底物充足),结果如图。回答下列问题:

              (1)该实验选择的酶比较合适的是________(过氧化氢酶、唾液淀粉酶)

              (2)从实验结果分析,在________℃条件下该酶活性最弱。

              (3)在时间t1之前,如果A组温度提高10℃,那么A组酶催化反应的速度会________。

              (4)如果在时间t2时,向A组反应体系中增加2倍量的酶,其他条件保持不变,那么在t2-t3时,A组产物总量________,原因是________。

              (5)生物体内酶的化学本质是________。

              (6)该实验需要控制的无关变量有________(写出两点即可)

            • 5.

              某同学利用新鲜的莴笋、菠菜、白菜中酶的提取液和过氧化氢为主要原料,进行了探究实验,结果如下表。请回答:

                           

              (l)该实验的探究目的是:______________________________________________

              (2)若进行三次独立重复的实验,该同学至少用了______个试管来探究此命題;每组试管内的反应时间属于该实验的__________变量,实验采集的数据属于该实验的_________变量。

              (3)该实验的结论有:

              ①酶提取液催化过氧化氢的分解有最适pH且都相同;

              ②pH偏高或者偏低,同一植物的酶提取液活性都会降低;

              ③____________________________________________________

            • 6.

              回答下题:

              (一) 酿酒、造醋是我国的传统技艺,为了探究与改进制造工艺,进行了相关研究。请回答有关问题:

              (1)目的菌株筛选后应该利用     培养基进行扩大培养,       是消除污染杂菌的通用方法。

               (2)制作葡萄酒过程中,为了酵母菌迅速发生作用,可加少量      混匀。将葡萄浆放入发酵瓶,装量不超过      (A.1/2 B.2/3 C.3/4 D.100%),当发酵瓶       表示发酵完毕。

               (3)醋的制作中发酵瓶中装锯末至       ,将适量的醋化醋杆菌培养物加在酒-水混合物中,混匀,并调PH至       后,倒入发酵瓶。

              (二)毛角蛋白Ⅱ型中间丝(KIF Ⅱ)基因与绒山羊的羊绒质量密切相关。获得转KIF Ⅱ基因的高绒质绒山羊的简单流程如图。请回答相关问题:



              (1)过程①中构建重组表达载体所需要的酶是限制性核酸内切酶和      。(A.DNA聚合酶B.DNA连接酶C.逆转录酶D.解旋酶)

              (2)在过程②中,用       处理将皮肤组织块分散成单个成纤维细胞,置于    中培养。

              (3)在过程③中,一般用     激素处理供体母牛,使其超数排卵;对供体母牛和代孕母牛进行           处理。

               (4)从重组细胞到早期胚胎过程中所用的胚胎工程技术是          。在胚胎移植前,通过                技术可获得较多胚胎。

            • 7.

              日本科学家大隅良典凭借“细胞自噬作用的发现与机制探索”获得2016年诺贝尔生理学或医学奖,人体细胞内的溶酶体是一种含有多种水解酶的细胞器,其内部的pH为5左右,溶酶体的作用存在胞吞和自噬两种途径,下图表示吞噬细胞内溶酶体的产生和作用过程,据图回答下列问题:



              (1)从图中可以看出,与溶酶体产生直接相关的细胞结构是___________,与水解酶合成和加工有关的细胞器有__________________(至少答3种)。

              (2)细胞能识别病原体主要依赖于细胞膜上的_____________(结构)该过程体现了细胞膜的_________________________功能。

              (3)已知酶在不同pH下的催化活性不同,研究表明,少量的溶酶体内的水解酶泄露到细胞质基质中不会引起细胞损伤,其主要原因可能是__________________________,导致酶活性降低或失活。

              (4)从图示中可以看出,溶酶体的功能有________________________________________________。

            • 8. (9分)大菱鲆是我国重要的海水经济鱼类,研究性学习小组尝试对大菱鲆消化道中的蛋白酶的活性进行研究。

              (1)查询资料得知,18℃时,在不同pH条件下大菱鲆消化道各部位蛋白酶活性如图1。由图可知,在各自最适pH下,三种蛋白酶催化效率最高的是  ▲   。

              (2)资料表明大菱鲆人工养殖温度常年在15—18℃之间。学习小组假设:大菱鲆蛋白酶的最适温度在15—18℃间。他们设置15℃、16℃、17℃、18℃的实验温度,探究三种酶的最适温度。

              ①探究试验中以干酪素为底物。干酪素的化学本质是  ▲  ,可用  ▲  试剂鉴定。

              ②胃蛋白酶实验组和幽门盲囊蛋白酶实验组的pH应分别控制在   ▲   

              ③为了控制实验温度,装有酶和底物的试管应置于 中以保持恒温。单位时间内 可以表示蛋白酶催化效率高低。

              ④实验结果如图2,据此能否确认该假设成立? 。理由是:

              (3)研究还发现大菱鲆消化道淀粉酶和脂肪酶含量少、活性低,所以人工养殖投放的饲料成分中要注意降低 的比例,以减少对海洋的污染。

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