3.
重叠延伸PCR技术是一种通过寡聚核苷酸链之间重叠的部分互相搭桥、互为模板,通过多次PCR扩增,从而获得目的基因的方法。利用该技术可以实现基因的定点诱变(如图)。它在需要诱变的位置合成两个带有变异基因碱基的互补引物(如图的引物b和引物c),然后分别与引物a和引物d做PCR,这样得到的两个PCR产物分别带有变异碱基,并且彼此重叠,在重叠部位经重组PCR就能得到诱变的PCR产物(如图的突变产物AD)。请回答下列问题:
(1)PCR与体内DNA复制相比,不需要 酶参与。
(2)引物中(G+C)的含量越高,引物与模板DNA结合的稳定性 。
(3)图中获得产物AB和CD,必须将引物a、引物b和引物c、引物d置于不同反应系统中,这是因为 。除图中所示外,在不同的反应体系中需要共同加入的物质是 。
(4)在引物a、引物b组成的反应系统和引物c、引物d组成的系统中均进行一次复制,共产生 种双链DNA分子。
(5)图中获得产物AB,至少要经过 轮循环,循环产物中含有引物a的DNA占有的比例为 。