抗凝血酶Ⅲ蛋白是一种血浆糖蛋白，临床上主要用于血液性疾病的治疗。凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶。下列是生产这两种酶的相关思路，请回答下列问题：

（1）图1为通过培育转基因奶牛获得抗凝血酶Ⅲ蛋白的流程。

①图中过程a指的是利用________法将目的基因导入受精卵，受体细胞不选用体细胞的理由是________________。

（2）从牛胃液中分离得到的凝乳酶以其催化能力强而被广泛应用，研究人员运用基因工程技术，将编码该酶的基因转移到了微生物细胞中。

①从牛胃细胞中提取目的基因。以此DNA为模板进行PCR扩增，还需要____________、____________、____________等。

②为提高重组DNA分子的比例，在构建重组DNA分子（如图2所示）时最好选用______________作限制酶。

③经研究发现，如果将该凝乳酶的第20位和24位氨基酸变为半胱氨酸，则其催化能力将提高2倍。现已知通过蛋白质工程可生产高效凝乳酶，请写出有关制备步骤：________________________。

下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1和图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：

(1)一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有________个游离的磷酸基团。

(2)若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越________。

(3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是____________________________________________________________________。

(4)与只使用EcoR Ⅰ相比较，使用BamH Ⅰ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止_____________________________。

(5)为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入___________酶。

(6)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了_____________________。

(7)蛋白质工程也被称为第二代基因工程，其基本途径是从预期蛋白质功能出发，通过_____   ___和________________，进而确定相对应的脱氧核苷酸序列，据此获得基因，再经表达、纯化获得蛋白质。

(8)将重组DNA分子导入植物受体细胞的常用方法为               法。 为了确定转基因是否培育成功，要用放射性同位素标记的                         作探针进行分子杂交检测。

[生物——选修3：现代生物科技专题]

为增加油葵种子中的含油量，科学家尝试将花生中的酶A基因导入油葵细胞．获得转基因油葵新品种。

(1)为获取目的基因，可从花生细胞中提取_____________，经逆转录形成cDNA。以此cDNA为模板通过PCR技术扩增目的基因。

(2)构建重组DNA分子(如图所示)最好选用__________________________限制酶，目的是可避免________________________________。

(3)普通大肠杆菌细胞中没有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因，将构建的重组DNA分子导入农杆菌中，将获得的农杆菌接种在含_______________的固体平板上培养得到含重组质粒的单菌落，再利用培养基震荡培养，可以得到用于转化的浸染液。

(4)剪取油葵的叶片放入浸染液中一段时间后，经过筛选获得转基因油菜细胞。最后经过__________________培育成转基因油葵植株。此种技术的原理是______________。

(5)研究发现，如果将该酶A的20位和24位氨基酸变为半胱氨酸，其催化能力将提高2倍。通过蛋白质工程对酶A进行改造，所需步骤有                 

a．蛋白质的结构设计                   b．蛋白质的结构和功能分析

c．蛋白质结构的定向改造               d．酶A基因的定向改造

e．将改造后的酶A基因导入受体细胞     f．将定向改造的酶A导入受体细胞

(6)经过种植转基因油葵发现，虽然转基因油葵种子中含油量上升，但是抗灰霉菌的能力丢失，其原因是_____________________。

【生物——选修3：现代生物科技专题】阅读如下资料：

资料甲：科学家将牛生长激素基因导入小鼠受精卵中，得到了体型巨大的“超级小鼠”；科学家采用农杆菌转化法培育出转基因烟草。

资料乙：T₄溶菌酶在温度较高时易失去活性。科学家对编码T₄溶菌酶的基因进行了改造，使其表达的T₄溶菌酶第3位的异亮氨酸变为半胱氨酸，在该半胱氨酸与第97位的半胱氨酸之间形成了一个二硫键，提高了T₄溶菌酶的耐热性。

回答下列问题：

（1）资料甲属于基因工程的范畴。将基因表达载体导入小鼠的受精卵中常用             法。在培育有些转基因植物时，常用农杆菌转化法，农杆菌的作用是：农杆菌感染植物后，将             转移到受体细胞中。

（2）资料乙属于           工程的范畴。该工程是指以分子生物学相关理论为基础，通过基因修饰或基因合成，对              进行改造，或制造一种新蛋白质的技术。在该实例中，引起T₄溶菌酶空间结构改变的原因是组成该酶肽链的            序列发生了改变。

蛋白质工程是指根据人们对蛋白质功能的特定需求，对蛋白质的结构进行分子设计、生产的过程。下图是蛋白质工程的基本途径，试回答下列有关问题：

(1)图中③过程的主要依据是每种氨基酸都有其对应的________，后者位于________分子上，其上的核苷酸序列与基因中的脱氧核苷酸序列之间存在着________关系。

(2)通过③过程获得的脱氧核苷酸序列不是完整的基因，要使这一序列能够表达、发挥作用，还必须在序列的上、下游加上________和________，完成④过程需要涉及________技术。

如图是利用影印培养技术证明大肠杆菌产生抗链霉素突变基因的实验。具体方法是：

①首先把大量对链霉素敏感的大肠杆菌涂布在不含链霉素的平板1的表面，待其长出密集的小菌落后，用影印法接种到不含链毒素的培养基平板2上，随即再影印到含有链霉素的培养基平板3上。经培养后，在平扳3上出现了个别抗链霉素的菌落。

②对培养皿2和3进行比较，在平板2上找到平板3上那几个抗性菌落的“孪生兄弟”。

③把平扳2上与平板3上菌落相应的—个部位上的菌落挑至不含链霉素的培养液4中，经培养后，再涂布在平板5上。

④重复以上各步骤，最后在试管12中获得了较纯的抗性菌落。

请根据以上材料回答下列问题：

(1)大肠杆菌的同化作用类型为________，与酵母菌相比，大肠杆菌细胞在结构上的主要特点是____________________________。

(2)从培养基的功能上看，含有链霉素的培养基属于________培养基。若在培养皿的培养基中加入伊红和美蓝，则培养皿中长出的菌落颜色表现为________________________。

(3)大肠杆菌抗链霉素基因存在于细胞的________结构上，而与生长、繁殖和遗传有关的基因主要存在于________中。

(4)3号、7号、11号培养基中加入链霉素的作用是_____________________________________________________，3号培养皿中的菌落比1号、2号中的菌落少很多，这说明了________________________________________。

40[生物——选修3：现代生物科技专题]

白细胞介素－2(IL－2)，在人体中是由免疫细胞合成并分泌的一种糖蛋白，对机体的免疫应答和抗病毒感染等有重要作用。传统生产方法成本高、产量低，获得的IL－2在体外不易保存。用生物技术手段可以解决这些问题。请回答相关问题：

(1)利用基因工程生产IL－2，过程是：

①从建立人体外围静脉血分离能合成IL－2的免疫细胞，从中提取________，经逆转录获取目的基因，此过程需要的原料是________________。

②用限制酶处理载体和目的基因后，用DNA连接酶处理，形成重组载体，该载体的化学本质是________。该步骤是基因操作的核心，称为________________。

③若选择大肠杆菌作为受体细胞，常用的转化方法是用Ca^2＋处理，使其成为________________，再在一定温度下完成转化。

④在培养液中培养一段时间后，经进一步处理获得产物，进行产物鉴定时可采用________________技术。

(2)利用蛋白质工程对IL－2进行改造，基本途径是：预期蛋白质功能→________________→________________→找到对应的脱氧核苷酸序列。

(3)利用细胞工程生产IL－2，思路是：将相应免疫细胞和瘤细胞融合，筛选出________________细胞，经细胞培养可获得大量IL－2。

（1）图中a、b所示获得目的基因的方法是          。

（2）据图分析，在构建c的过程中，需用               (填“限制酶Ⅰ”或“限制酶Ⅱ”)切割目的基因，为检验重组质粒是否导入受体细胞，需要利用的标记基因是             。（3）过程e运用了细胞工程中的                     技术，该技术的理论依据是        。

(4)若希望该转基因水稻生产的“金色大米”含维生素A含量更高、效果更好，则需要通过              工程手段对合成维生素A的相关目的基因进行设计

（1）传统制备抗体的方法是向动物体内反复注射某种抗原，使 ____           __ 增殖、分化为浆细胞，浆细胞产生抗体，然后从动物 ____   __ 中分离所需抗体．
（2）与诱导植物原生质体融合不同的是，②过程还可以使用 ___          ___ 进行诱导融合．②过程诱导后，用选择性培养基筛选出杂交瘤细胞，杂交瘤细胞的特点是 ______                               ．
（3）给某患者连续隔周注射某种鼠源性单抗治疗一种病毒感染性疾病，开始时病毒量明显减少，一段时间后，病毒量又开始上升，上升的原因可能是病毒发生了 _____         _ ，也可能是人体产生了能与鼠源性单抗特异性结合的 _____          ，使鼠源性单抗不能发挥抗病毒作用．
（4）研究人员可应用 _____          _ 技术，改造鼠源性单抗分子的结构，降低人体对鼠源性单抗的免疫反应．

（1）与基因工程相比较，蛋白质工程产物具备的特点是:                  。

（2）图中的步骤①和②分别为            、分子设计。

（3）如果已知mRNA的碱基序列是-A-U-C-C-A-G-G-U-C-,要合成对应的DNA,需要的原料是四种     ,所用的酶是        ；合成DNA的对应碱基对序列是           。

（4）由图可知,要改造蛋白质结构,最终是通过改造基因来实现的。请说明原因:                                               。