下图是利用生物工程技术生产人生长激素的示意图。质粒上的Amp^r表示青霉素抗性基因，Tet^r表示四环素抗性基因，限制酶PstI、EcoR I和Hind Ⅲ切割形成的末端均不相同。请据图回答：

（1）将人生长激素基因导入小鼠体内来生产生长激素。图中对供体雌鼠甲用促性腺激素处理一段时间后与雄鼠乙交配，然后通过手术的方法从雌鼠甲的___________中取出受精卵。

（2）①过程不能利用人的皮肤细胞，其根本原因是_____________________________。

（3）为了使目的基因和质粒定向连接并且有利于受体细胞的筛选，切割质粒时应选用的酶是_________________________________。

（4）大肠杆菌细胞内应不含_________________基因，以利于筛选出含重组质粒的受体菌。

（5）如果从限制酶Pst I、EcoR I和HindⅢ任选两种酶对质粒进行切割，均会将质粒切成两段，则形成的DNA片段有____________种，其中含有完整四环素抗性基因的DNA片段占___________。

（6）按照图示的操作，将三角瓶中的大肠杆菌先接种到甲培养基上，然后分别接种到乙和丙两个培养基的相同位置，一段时间后，菌落的生长状况如乙、丙图所示。据图分析丙培养基中含人生长激素基因的菌落有_________个。

荧光原位杂交可用荧光标记的特异DNA片段为探针，与染色体上对应的DNA片段结合，从而将特定的基因在染色体上定位。请回答下列问题：

                   图1                                      图2

（1）DNA荧光探针的制备过程如图1所示，DNA酶Ⅰ随机切开了核苷酸之间的             _______键从而产生切口，随后在DNA聚合酶Ⅰ作用下，以荧光标记的____________为原料，合成荧光标记的DNA探针。

（2）图2表示探针与待测基因结合的原理。先将探针与染色体共同煮沸，使DNA双链中      ________键断裂，形成单链。随后在降温复性过程中，探针的碱基按照___________原则，与染色体上的特定基因序列形成较稳定的杂交分子。图中两条姐妹染色单体中最多可有______条荧光标记的DNA片段。

（3）A、B、C分别代表不同来源的一个染色体组，已知AA和BB中各有一对同源染色体可被荧光探针标记。若植物甲（AABB）与植物乙（AACC）杂交，则其F1有丝分裂中期的细胞中可观察到____个荧光点；减数第一次分裂形成的两个子细胞中分别可观察到_______个荧光点。

下列关于生物工程相关知识的叙述，正确的项数是

①植物组织培养过程中愈伤组织的代谢类型是自养需氧型

②B淋巴细胞与骨髓瘤细胞混合，在聚乙二醇的诱导下，发生融合的细胞即为杂交瘤细胞

③若要生产转基因抗病棉花，可将目的基因先导入到T-DNA上，让T-DNA感染棉花细胞，实现目的基因的导入

④用于基因治疗的基因可以是从健康人体细胞中分离得到的功能正常的基因，也可以是反义基因或者自杀基因

⑤在植物体细胞杂交中，可采用质壁分离实验检测制备的原生质体的活性情况

图1

(1) 过程②中常用____技术将目的基因导入受精卵,受精过程中精子头部接触卵细胞膜时产生____反应,以防止多精入卵。 

(2) 过程⑤在精核与卵核融合之前,用微型吸管吸除雄核,再用细胞松弛素B处理(作用类似于用秋水仙素处理植物细胞),处理后的受精卵可发育成猕猴。这种方法在动物新品种选育中的显著优点是_________________。 

(3) ⑦过程通过____技术实现,在个体水平上检测GFP基因是否表达的方法是______________。 

(4) 胚胎工程中通常需要鉴定胚胎性别,如利用SRY—PCR技术鉴定,鉴定时需以Y染色体上的SRY基因(性别决定基因)的一段序列设计引物,用被测胚胎DNA作模板进行PCR扩增。根据SRY基因序列设计的引物长度一般为20~24个核苷酸,其不宜过短的原因主要是_。 

图2　　　　　　　　　　　　

农业科技工作者在烟草中找到了一抗病基因，现拟采用基因工程技术将该基因转入棉花，培育抗病棉花品系。请回答下列问题。

（1）为了能把该抗病基因转入到棉花细胞中，常用的载体是__________。

（2）要使载体与该抗病基因连接，首先应使用限制性内切酶（限制酶）进行切割。假如载体被切割后，得到的分子末端序列为，则能与该载体连接的抗病基因分子末端是（    ）

（3）切割完成后，采用DNA连接酶将载体与该抗病基因连接，连接后得到的DNA分子称为_____。

（4）再将连接得到的DNA分子导入农杆菌，然后用该农杆菌去_________棉花细胞，利用植物细胞具有的_________性进行组织培养，从培养出的植株中筛选（选择）出抗病的棉花。

（5）转基因棉花获得的_______________是由该表达产物来体现的。

（1）打靶载体中含有的目的基因是     ，需将该目的基因和与细胞内靶基因同源的DNA片段都重组到质粒上，整合时用到的酶有      。

（2）图中的同源重组位点是指打靶载体和小鼠基因组DNA中具有     的DNA片段。

（3）将打靶载体线性化是选择的限制性核酸内切酶的识别序列不能位于    等中。线性化的打靶载体可采用    法导入小鼠细胞。将小鼠细胞培养在含     的培养液中，可以成功筛选出打靶成功的小鼠细胞，经细胞培养后可以获得大量的具有目的基因的细胞。

（4）可以通过动物细胞克隆技术获得含人胰岛素基因的小鼠，其过程是将打靶成功的小鼠细胞的细胞核移植到     中，培养到     期移植到代孕母鼠子宫内进行发育。

下列有关基因工程的叙述，错误的是（　　）

    ①目的基因与运载体相结合        ②将目的基因导入受体细胞

    ③检测目的基因的表达           ④提取目的基因