苯酚及其衍生物广泛存在于工业废水中，对环境有严重危害。小明同学准备依据下图操作步骤，从处理废水的活性污泥中分离筛选苯酚降解高效菌株。请回答下列问题:

（1）苯酚降解菌富集培养基含有蛋白胨、K₂HPO₄、MgSO₄、苯酚和水，其中可作为碳源的有_____________。

（2）将采集到的样品接种培养，苯酚用量应随转接次数增加而逐渐_____________，以达到富集苯酚降解菌的目的。若上图平板中菌落过于密集，应进一步_____________，以便于菌落计数与分离。制备平板培养基时除了需要水、营养物质外，还必须添加_____________。

（3）下图为连续划线法示意图，在图中_____________ （填图中序号）区域更易获得单菌落。

（4）采用比色测定法（使用苯酚显色剂）检测降解后的废水中苯酚残留量。先制作系列浓度梯度并进行显色反应，下表中1～5号比色管的苯酚浓度应分别为________________（单位省略）。

如果废水为50 mg/ L 苯酚溶液，降解后约有21%的苯酚残留，则需将残留液稀释____________（填序号：①5   ②10   ③20）倍后，再进行比色。

（每空1分，共5分）某些土壤细菌可将尿素分解成CO₂和NH₃，供植物吸收和利用。回答下列问题：

（1）能分解尿素的细菌不能以尿素的分解产物CO₂作为碳源，原因是_______________，但可用葡萄糖作为碳源，进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是___________________（答出两点即可）。

（2）为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择_________________（填“尿素”“NH₄NO₃”或“尿素 NH₄NO₃”）作为氮源，不选择其他两组的原因是_____________。

（3）用来筛选分解尿素细菌的培养基含有KH₂PO₄和Na₂ HPO₄，其作用有_______________（答出两点即可）。

人工瘤胃模仿了牛羊等反刍动物的胃,可用来发酵处理秸秆,提高秸秆的营养价值。

为了增强发酵效果,研究人员从牛胃中筛选纤维素酶高产菌株,并对其降解纤维素能力进行了研究。 请回答下列问题:

(1)在样品稀释和涂布平板步骤中,下列选项不需要的是     (填序号)。

①酒精灯 ②培养皿 ③显微镜 ④无菌水

(2)在涂布平板时,滴加到培养基表面的菌悬液量不宜过多的原因是                        。

(3)向试管内分装含琼脂的培养基时,若试管口粘附有培养基,需要用酒精棉球擦净的原因是   。

(4)刚果红可以与纤维素形成红色复合物,但并不与纤维素降解产物纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。研究人员在刚果红培养基平板上,筛到了几株有透明降解圈的菌落(见下图)。 图中降解圈大小与纤维素酶的       有关。 图中降解纤维素能力最强的菌株是           (填图中序号)。

(5)研究人员用筛选到的纤维素酶高产菌株J1和J4,在不同温度和pH条件下进行发测得发酵液中酶活性的结果见下图,推测菌株       更适合用于人工瘤胃发酵,理是                         。

生物技术实践]某生物兴趣小组试图探究牛和山羊的瘤胃中的微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能降解尿素的细菌（目的菌）.培养基成分如表所示，实验步骤如图所示。请分析回答：

（1）培养基中加入尿素的目的是        ，原理是                                  。

（2）实验需要振荡培养，原因是                             。转为固体培养时，常采用                的方法接种，获得单菌落后继续筛选。

（3）在实验过程中：①培养基、培养皿；②玻棒、试管、锥形瓶、吸管；③瘤胃中液体。其中需要灭菌是                 （填序号）。

（4）分离分解尿素的细菌实验时,甲同学从培养基上筛选出大约150个菌落,而其他同学只选择出大约50个菌落.甲同学实验结果差异的原因可能有        

①取样不同    ②培养基污染    ③操作失误    ④没有设置对照

（5）以上表培养基培养“目的菌”后，加入指示剂酚红后变红色，说明“目的菌”能分解尿素。得出该实验结论的理由是                    

（6）为进一步确定取自瘤胃中液体的适当稀释倍数,将接种的培养皿放置在37°C恒温培养箱中培养24h～48h,观察并统计具有红色环带的菌落数,结果如下表,其中           倍的稀释比较合适。

（2）图中所示方法为稀释培养法，理想情况下，培养一段时间后可在培养基表面形成菌落。运用这种方法统计的结果往往较实际值偏小，原因是___________________。

（3）消毒后的牛奶中绝大部分细菌被杀死，若继续用该方法检测消毒后的牛奶中细菌的数量，则在操作步骤上应做什么改动？________________________________    ___。

（4）人们利用酵母菌酿制果酒、醋酸菌制醋、毛霉制作腐乳，以及乳酸菌制作泡菜。

①没有经过严格的灭菌过程，却能够获得传统发酵产品。请说出两点理由：_________________________________；___________________________________。

[生物选修1：生物技术实践]

β－胡萝卜素可用来治疗夜盲症等疾病，也是常用的食用色素。下图为从产胡萝卜素的酵母菌中提取胡萝卜素的基本过程：

（1）培养酵母菌的培养基中一般含有______________等营养成分。要获得大量的酵母菌用于胡萝卜素的提取，应选择__________（填“液体”或“固体”）培养基培养酵母菌。

（2）胡萝卜素萃取过程中，萃取的效率主要取决于_________________________；萃取过程宜采用___________方式加热以防止温度过高；萃取液浓缩前需进行过滤，其目的是____________________________________；提取的胡萝卜素粗品可通过_________________________进行鉴定。

（3）果酒的制作也离不开酵母菌，酒精发酵时一般要将温度控制在___________℃，可用__________________________________检测酒精的产生与否。

将没有吃完的西瓜，盖上保鲜膜后放入冰箱，是很多人日常储藏西瓜的办法。但事实上，有时候盖上保鲜膜储藏的西瓜中的细菌种类和数目反而比没用保鲜膜的多。某生物研究小组用保鲜膜保存三天的西瓜表面的瓜瓤制备浸出液，研究细菌的种类和数量。

(1)该研究小组需配制用于培养微生物的培养基，配制的培养基一般都含有水、碳源、          和         。一般采用            法对培养基进行灭菌。

(2)为了避免培养基污染，在培养过程中，需将平板           (填“正置”或“倒置”)。为了观察浸出液中微生物的种类和数量，采用          法接种。接种时，为了避免环境中微生物的污染，实验操作应在         附近进行。

(3)在培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，说明西瓜的浸出液中有                    （填“一种”或“多种”）细菌。细菌总数越多，说明西瓜被细菌污染的程度越         （填“高”或“低”）。

（选修1：生物技术实践）

水污染是全球性的环境问题，微生物降解是水污染治理的有效手段之一。聚乙烯醇（PVA）是存在于化工污水中的一种难以降解的大分子有机物，PVA分解菌能产生PVA酶分解PVA，PVA与碘作用时能产生蓝绿色复合物，当PVA被分解时蓝绿色复合物消失，形成白色透明斑，请回答下列问题：

（1）上表是筛选出能高效分解PVA的细菌的培养基配方，从物理性质来看，该培养基为         培养基，表中X物质最可能为_______________。实验中还应设置完全培养液对照组，将菌液稀释相同的倍数，选择培养基上生长的菌落数目应明显__________（填“多于”或“少于”）对照组培养基上的数目，从而说明选择培养基具有筛选作用。

（2）要测定土壤稀释液中微生物的数目，可在显微镜下用___________计数板直接计数。若将100mL含有PVA分解菌的土壤样品溶液稀释10⁵倍后，取0.1mL稀释液均匀涂布在选择培养基表面，测得菌落数的平均值为160个，空白对照组平板上未出现菌落，则100mL原菌液中有PVA分解菌_______个，该方法的测量值与实际值相比一般会_______（填“偏大”、“偏小”或“相等”），原因是                       

                  。

（3）要鉴定分离出的细菌是否为PVA分解菌，培养PVA分解菌的培养基中除了加入必需的营养物质外还需要加入_________________用于鉴别PVA分解菌。

I、根据下面的实验装置图（图甲、乙）和果酒的生产工艺流程简图（图丙）回答问题：

(1)图甲所示装置可用于提取____________（填“橘皮精油”、“玫瑰精油”或“胡萝卜素”），此方法称为_______________。

(2)制作果酒时可选用图乙的装置。为适当提高果酒的生产速率，进气口应____________；

II、在培养菌种时，为了检测菌种，以无菌操作技术进行以下实验操作：

①将1g样品溶于无菌水，定容为10ml。

②对上述菌液进行4次梯度稀释：取1ml前一种稀释菌液＋9ml无菌水，摇匀。

③吸取0.1ml最后一次稀释所得菌液涂布于细菌培养基平板上。

④将平板放在37ºC恒温环境中培养24h后，计数平板上菌落数目。假如计数得平板菌落数为5。

(1)由实验可知样品含活菌数约为________个/g。样品的实际含菌数比这个数据多，原因是当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。

(2)要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种______作为对照进行实验

某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而开展了一个探究实验，实验过程包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察与计数等。请回答下列问题：

（1）制备培养基时，配方一般都含有水、碳源、氮源和________。

（2）接种环在接种前必须________灭菌，然后待其冷却后在进行接种，冷却的目的是________。

（3）用稀释涂布平板法计数细菌个数时，为使估计值更接近实际值，应保持待测样品稀释度足够高，原因是________。

（4）将1mL水样稀释100倍后在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为46、40、37。据此可得出每升水样中的活菌数为________。统计的菌落数往往比活菌的实际数目________。

（5）可通过观察平板上菌落的特征，如________（写两个），来判断湖水样品中细菌的种类。

（6）为了使实验结果可靠，应同时在另一灭菌的空白平板上接种________作为对照组.