9.
(11分).(1)某同学在做微生物实验时,不小心把圆褐固氮菌和酵母菌混合在一起。请你完成分离得到纯度较高的圆褐固氮菌和酵母菌的实验步骤,并回答有关问题:
⑴主要步骤:
①制备两种培养基:一种是____培养基,另一种_____的培养基。分别分成两份,依次标上A,A/的B,B/,备用。
②分别向A、B培养基中接种______。
③接种后,放在恒温箱中培养3~4天。
④分别从A、B培养基的菌落中挑取生长良好的菌种,接种到A/、B/培养基中。
⑤接种后,把A/、B/培养基放入恒温箱中培养3~4天。
⑵回答问题:
在步骤①中,为保证无杂菌污染,实验中应采用的主要措施有__________、______________、_____________。
第④⑤两个步骤的目的是_____________________。
(2)用基因工程技术从经过分离、提纯的圆褐固氮菌中获取固氮基因,然后进行PCR扩增。下列表1和表2分别表示用PCR扩增固氮基因的反应体系及反应条件。
PCR反应体系 |
50ul |
缓冲液 |
5ul |
脱氧核苷酸 |
1ul |
引物A |
0.5ul |
引物B |
0.5ul |
DNA聚合酶 |
0.5U |
模板DNA |
1-2ul |
加去离子水补足至50 ul |
反应条件 |
|
温度 |
时间 |
变 性 |
95 ℃ |
30s |
复 性 |
55 ℃ |
30s |
延 伸 |
72 ℃ |
1min |
30个循环后 |
适宜 |
5-10min |
保 温 |
4 ℃ |
2h |
①从上表中可得出,PCR技术与DNA复制相比较,主要区别之一是 。
此外,从反应条件看,所使用的DNA聚合酶应具有__________的特点。每次循环都需要2种引物的主要原因是_______________ ________________。
②下图为第1轮循环产生的产物。请绘出以a链和b链为模板经PCR扩增的产物。