根据基因工程的有关知识，回答下列问题：

(1)cDNA文库属于_____基因文库，其构建方法是：用某种生物发育的某个时期的_____反转录产生的cDNA片段，与________连接后储存在一个受体菌群中。

(2)切割DNA分子的工具是_______________，它能使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的________________断开，形成黏性末端或平末端。

(3)基因工程中所使用的DNA连接酶有两类。既可以“缝合”黏性末端，又可以“缝合”平末端的是________DNA连接酶。

(4)如果受体细胞是大肠杆菌，需要用________处理细胞，使之成为感受态细胞，才能吸收DNA分子。

图1 表示含有目的基因D 的DNA 片段长度(bp 即碱基对)和部分碱基序列,图2 表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有Msp、BamHⅠ、Mbo、Sma 4 种限制性核酸内切酶,它们识别的碱基序列和酶切位点分别为

C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题:

(1)图1 的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由 脱氧核糖--_________--脱氧核糖 连接。

(2)若用限制酶Sma完全切割图1 中DNA 片段,产生的末端是 ______ _ 末端,其产物长度为__________________。

(3)若图1 中虚线方框内的碱基对被T-A 碱基对替换,那么基因D就突变为基因d。从杂合子中分离出图1 及其对应的DNA 片段,用限制酶Sma 完全切割,产物中共有_____种不同长度的DNA片段。

(4)若将图2中质粒和目的基因D 通过同种限制酶处理后进行连接,形成重组质粒,那么应选用的限制酶是 ________________。在导入重组质粒后,为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加_________     的培养基进行培养。经检测,部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D 不能正确表达,其最可能的原因是 _____________________________________________。

下列列出的材料供任意选用，实验用具充足。请回答有关问题。（注:答案中溶液可不写浓度）选：（以下未说明的百分浓度均为质量分数浓度，各溶液均新配制）2%淀粉酶溶液、20%肝脏研磨液、3%Fecl₃溶液、3%淀粉溶液、3%蔗糖溶液、体积分数为3%的过氧化氢溶液、5%HCl、5%NaOH、热水、蒸馏水、冰块、碘液、斐林试剂。

（1）酶的化学本质是_____________，酶催化作用的机理是__________________________。

（2）利用所供材料，_____________（能、否）通过实验验证“酶具有高效性”。

（3）要证明pH对酶活性的影响，为避免酸碱对反应物本身水解的影响，选用的反应物最好是_____________。

（4）研究淀粉酶的专一性，选用的反应物最好是_____________，最好用“加入_____________（试剂）观察是否出现________（颜色变化）”的方法来捕获实验结果。

（5）要证明温度对酶活性的影响，选用的反应物最好是_____________，实验结果的鉴定方法是 __________________________。

某生物研究小组在密闭恒温玻璃温室内进行植物栽培试验，连续48h测定温室内CO₂浓度及植物CO₂吸收速率，得到如图所示曲线（整个过程呼吸作用强度恒定），请回答下列相关问题：

（1）实验前3小时叶肉细胞产生ATP的场所有______________，图中植物呼吸速率与光合速率相等的时间点有______个．

（2）6h时CO₂的移动方向是_____________，由12时到18：时，叶绿体内C3含量变化是_____．

（3）叶绿体利用CO₂速率最大的时刻是____h时，前24小时比后24小时的平均光照强度_____．

（4）如果使用相同强度绿光进行实验，c点的位置将______（填“上移”、“下移”、“不变”，原因是________________________________．

（5）某同学要初步探究植物新鲜叶片中色素的种类及相对含量，可依据_____________原理提取色素，采用纸层析法分离色素．如果滤纸条上的色素带颜色较浅，其原因可能是_________________________________________（至少答2点）．

（6）若a点时温室内CO₂含量是88g，c点时温室内CO₂含量为44g,则48小时后该植物有机物的积累量是g。

（1）在做蛋白质鉴定实验时，向装有2mL豆浆的试管中加入1mL双缩脲试剂A液后，又加1mL双缩脲试剂B液，振荡均匀，溶液颜色呈蓝色，最可能的原因是   ▲   。

（2）在“探究温度对α-淀粉酶活性影响”的实验中，将淀粉与淀粉酶混合后，然后分别放入 0 ℃、 60 ℃和 100 ℃的水浴锅中保温一段时间，最后用碘液检测结果，发现三组实验的结果相似，原因可能是   ▲   。

（3）在验证淀粉酶具有专一性的实验中，底物用的是淀粉和蔗糖，如果检测试剂是碘液，有人认为这不足以证明淀粉酶具有专一性，原因是   ▲   。

（4）固定化酵母细胞实验中，将已活化的酵母细胞加入刚熔化的海藻酸钠溶液中，结果制得的凝胶珠不能用于发酵，原因是   ▲   。

（5）鉴定还原性糖的实验中，使用甘蔗汁与斐林试剂在水浴加热的条件下反应，结果未出现砖红色沉淀，其原因是   ▲   。

（6）在“比较过氧化氢在不同条件下的分解”实验中，滴加了肝脏研磨液的试管与滴加等量蒸馏水的试管现象一致，原因可能是   ▲   。

（7）在“动物细胞培养”过程中，使用胃蛋白酶处理贴壁生长的细胞使其分散成单个细胞，不能成功，其原因是   ▲   。

（1）选用的材料合适与否是成功诱导出花粉植株的重要因素，一般来说选用          期的花粉可提高成功率。培育花粉植株的两条途径之间并没有绝对的界限，主要取决于        _         _。不管哪种途径，最终获得完整植株后须对其进行             ，才能使其结实产生后代。

（2）剥离花药时，要尽量不损伤花药，否则接种后容易从受损部位长出              ，形成的花粉植株          数目会发生变化，所以需对培养出的植株作进二步的鉴定和筛选。

（3）过程②中脱分化和再分化所用培养基有差异，主要是              的差异。通过②过程产生的细胞与枝条韧皮部细胞形态结构      （相同/不同），其根本原因是              。

（4）无菌技术也是成功诱导出花粉植株的重要因素，请说明下列各项中需要灭菌的有           （填编号）。

①  养基 ②培养皿 ③接种环  ④花蕾 ⑤实验操作者的双手  ⑥三角锥形瓶

重叠延伸PCR技术是一种通过寡聚核苷酸链之间重叠的部分互相搭桥、互为模板，通过多次PCR扩增，从而获得目的基因的方法。利用该技术可以实现基因的定点诱变（如图）。它在需要诱变的位置合成两个带有变异基因碱基的互补引物（如图的引物b和引物c），然后分别与引物a和引物d做PCR，这样得到的两个PCR产物分别带有变异碱基，并且彼此重叠，在重叠部位经重组PCR就能得到诱变的PCR产物（如图的突变产物AD）。请回答下列问题：

（1）PCR与体内DNA复制相比，不需要                酶参与。

（2）引物中（G+C）的含量越高，引物与模板DNA结合的稳定性                   。

（3）图中获得产物AB和CD，必须将引物a、引物b和引物c、引物d置于不同反应系统中，这是因为                   。除图中所示外，在不同的反应体系中需要共同加入的物质是                 。 

（4）在引物a、引物b组成的反应系统和引物c、引物d组成的系统中均进行一次复制，共产生                 种双链DNA分子。

（5）图中获得产物AB，至少要经过                    轮循环，循环产物中含有引物a的DNA占有的比例为                         。

据图回答下列问题：

（1）过程①所需的酶是           。过程②中PEG还可以用               等物理方法替代，全部过程用到的生物技术的原理是                         。

（2）过程②后，在显微镜下观察融合的活细胞中有供体的                存在，这一特征可作为初步筛选杂种细胞的标志。原生质体经过            再生，进而分裂和脱分化形成愈伤组织。

（3）若分析再生植株的染色体变异类型，应剪取再生植株和                 植株的根尖，通过解离、漂洗、染色和制片等过程制成装片，然后在显微镜下观察比较染色体的形态和数目。

（4）采用特异性引物对花椰菜和黑芥基因组DNA进行PCR扩增，得到两亲本的差异性条带，可用于杂种植株的鉴定。下图是用该引物对双亲及再生植株1—4进行PCR扩增的结果。据图判断，再生植株1—4中一定是杂种植株的有              。