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            • 1． 硝化细菌包括亚硝酸菌和硝酸菌，广泛存在于通气性较好的土壤中，在自然界氮循环中具有重要作用．土壤或水体中的有机物（如动物的排泄物或动植物的尸体）在分解过程会产生对动物毒性很强的氨，硝化细菌可将氨或铵盐氧化为易被植物吸收的硝酸盐．具体过程如图1：

              （1）根据上述材料可知，硝化细菌在生态系统中的营养类型是 
              A．自养需氧型   B．自养厌氧型   C．异养需氧型   D．异养厌氧型
              （2）硝化细菌通常以方式增殖，当水体过于纯净时，硝化细菌会形成休眠体，这种休眠体被称为 ．
              （3）对于混有硝化细菌、蓝细菌和大肠杆菌的悬浮液，可利用选择培养基进行微生物筛选．在筛选硝化细菌时，其培养基成份包括 
              （以下材料供选择：H2O、葡萄糖、纤维素、牛肉膏、（NH4）2SO4、KNO3、无机盐、琼脂、伊红﹣美蓝染料），接种后并培养．制备培养基时，灭菌与调pH值的先后顺序是 ．如利用上述培养基筛选大肠杆菌菌落，则应另外添加的成份是 ， 菌落特征为 ．
              （4）将采集自养殖池中的水样1ml稀释100倍，然选取稀释后的水样1ml，接种于上述硝化细菌选择培养基上培养．该实验接种所使用的工具是 ．一段时间后观察菌落并计数，实验重复三次结果如图2，则该养殖池每毫升水含有硝化细菌 个．
              难度：中等
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            • 2． 植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解．刚果红（CR溶液）可以与纤维素形成红色复合物，但并不与纤维素降解产物纤维二糖和葡萄糖发生这种反应．用含有CR的培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的透明圈．
              为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了如下培养基（成分见下表）：注：“+”表示有，“﹣”表示无．
              酵母膏无机盐纤维素粉琼脂CR溶液水
              培养基+++﹣++
              （1）据表判断，培养基（“能”或“不能”）用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是 ；配制培养基时，在各种成分都熔化后灭菌前，要进行的是 ．实验结束后，使用过的培养基应该进行灭菌处理才能倒掉，这样做的目的是 
              （2）在样品稀释和涂布平板步骤中，下列选项不需要的是  （多选）．
              A．酒精灯        B．培养皿          C．显微镜         D．无菌水
              E．无菌滴管      F．接种环          G．玻璃刮铲
              （3）有同学在刚果红培养基平板上，筛到了几株有透明降解圈的菌落如图1． 图中降解纤维素能力最强的菌株是 
              （4）教师用筛选到的纤维素酶高产菌株J1和J4，在不同温度条件进行纤维素分解发酵，测得发酵液中酶活性的结果见图2，推测菌株 更适合夏季分解植物桔杆，理由是 
              难度：中等
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            • 3． 回答有关微生物的问题．
              人工瘤胃模仿了牛羊等反刍动物的胃，可用来发酵处理秸秆，提高秸秆的营养价值．为了增强发酵效果，研究人员从牛胃中筛选纤维素酶高产菌株，并对其降解纤维素能力进行了研究．请回答下列问题：
              （1）在样品稀释和涂布平板步骤中，下列选项不需要的是 （填序号）．
              ①酒精灯     ②培养皿     ③显微镜     ④无菌水
              （2）在涂布平板时，滴加到培养基表面的菌悬液量不宜过多的原因是  ．
              （3）为达到筛选的目的，应采用选择培养基，本项研究中培养基配置的关键在于 ．
              （4）刚果红可以与纤维素形成红色复合物，但并不与纤维素降解产物纤维二糖和葡萄糖发生这种反应．研究人员在刚果红培养基平板上，筛选到了几株有透明降解圈的菌落（见图1）．图中降解圈大小与纤维素酶的 有关．图中降解纤维素能力最强的菌株是 （填图中序号）．
              （5）研究人员用筛选到的纤维素酶高产菌株J1和J4 ， 在不同温度和pH条件下进行发酵，测得发酵液中酶活性的结果见图2．推测菌株 更适合用于人工瘤胃发酵，理由是 
              难度：中等
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            • 4． Ⅰ．细菌常被应用于生产生活中，如有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染．某同学欲从污染的土壤中筛选出能高效降解原油的细菌．
              （1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以 为唯一碳源的固体培养基上．为筛选出高效菌株，可比较单菌落周围清晰区域的大小．一般情况下，如图中清晰区域越大说明 ．
              Ⅱ．另一同学将第一步筛选得到的甲、乙、丙三种细菌分别接种到A、B、C三种培养液中，经培养后分别测得它们繁殖一代所需的时间，结果如表所示：
              培养液成分繁殖一代所需的时间（分钟）
              甲乙丙
              A．葡萄糖、NaCl、PO43-、MgSO443100-
              B．葡萄糖、NaCl、PO43-、MgSO4、8种氨基酸2840-
              C．葡萄糖、NaCl、PO43-、MgSO4、19种氨基酸252580
              注：“﹣”表示细菌没有生长．
              （2）在A培养基中增殖较快的细菌是 ． 丙细菌可以在C培养液中繁殖却无法在B培养液中繁殖，原因是 
              （3）由于微生物的营养类型复杂，不同的微生物对营养物质的需求是不同的．如果培养能进行光合作用的微生物，培养基中的营养物质是 （多选题），
              A．碳源    B．氮源    C．生长因子    D．无机盐     E．水
              Ⅲ．下面是有关某细菌G的四项实验：
              实验1：将G接种于一般培养基上，结果出现菌落．
              实验2：用一定剂量的紫外线处理G，产生突变种g1．将g1接种于一般培养基后，不出现菌落；但在培养基内添加营养物质甲后，就出现菌落．
              实验3：用另一剂量的紫外线处理G，得突变种g2，将g2接种于一般培养基后，也不出现菌落；但在培养基内添加营养物质乙后，就出现菌落．
              实验4：将g1和g2一起接种于一般培养基上，数日后出现菌落．
              （4）细菌g1和g2分别接种于一般培养基，均不能生长．其原因是用紫外线处理导致细菌G发生了 ，从而缺乏合成营养物质甲或乙的酶．
              A．基因突变     B．基因重组     C．染色体畸变     D．不可遗传变异
              （5）实验1至3表明，物质甲和乙均是细菌G在代谢过程中产生的代谢产物．在实验2和3 中，它们是作为 加入一般培养基的．
              A．碳源     B．氮源        C．生长因子      D．无机盐
              （6）实验4中出现菌落的原因可能是 ．
              难度：中等
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            • 5． 已知某细菌的两种突变类型细菌Ⅰ和细菌Ⅱ的营养条件和菌落特征都相同，但细菌Ⅰ能分解有机物A而不能分解有机物B，细菌Ⅱ能分解有机物B而不能分解有机物A．现有这两种类型细菌的混合液样品，要将其分离，有人设计了一种方案，部分操作步骤如图．
              （1）步骤一使用的是牛肉膏蛋白胨培养基，其中含有细菌生长所需的水、等营养物质（至少写出3种）；该培养基是[ ]（多选）．
              A．固体培养基    B．液体培养基    C．通用培养基    D．选择培养基
              （2）步骤一采用 接种，此接种法可使接种细菌逐渐稀释，经适宜条件培养，可能形成单个、独立的 ， 最终可能得到纯种的细菌；步骤二各瓶中的培养基加入了A、B两种有机物的目的是 ．
              （3）无论是培养基（液），接种前除了要调节pH外，都必须对培养基进行；接种时必须在超净工作台及酒精灯火焰附近操作，原因是 
              （4）步骤三中，若对其中某瓶培养液中A、B两种有机物含量进行测定，预测可能的结果并推测结论：
              ①A与B两种化合物含量都明显下降，说明瓶中同时存在细菌Ⅰ和细菌Ⅱ，两者未分离．
              ② ．
              ③ ．
              （5）经步骤三后，若所有瓶中培养液的A、B化合物含量测定结果都如55题中①的情况，则应 ， 再测定各瓶中A、B两种化合物的含量，直到分别获得每种类型细菌为止．
              难度：中等
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            • 6． 为了筛选土壤中能够降解某除草剂的细菌（目的菌）．有人做了如图实验：

              A、B、C培养基中 是唯一氮源，若三次试验结果记录到的菌落数分别为55、56、57，则1ml土壤浸出液样中含目的菌数为 个．
              难度：中等
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            • 7． 回答有关微生物的问题．
              Ⅰ、凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶．培育产高酶活力凝乳酶微生物菌种是目前最有前途的发展方向．图1为产高酶活力凝乳酶的枯草芽孢杆菌培育过程．

              （1）枯草芽孢杆菌的芽孢是 ．
              A．休眠体    B．营养繁殖体    C．孢子        D．营养体
              （2）图1所示的b过程的目的是为 ， 接种用的平板培养基在制备时需注意的是 （多选）．
              A．待培养基冷却至50℃左右时进行倒平板
              B．倒好的培养基和培养皿要进行高压灭菌处理
              C．等到平板培养基冷却凝固后才可以盖上培养皿的皿盖
              D．待平板冷却凝固约5﹣10min后将平板倒过来放置
              Ⅱ、在35℃、40分钟内能凝固1mL10%奶粉所需的酶量为一个酶活力单位（U）．图2表示图1中提取得到的各种凝乳酶活力检测结果．
              （3）据图2所示，酶催化能力最强的是 组，而各组酶催化能力存在差异的原因是 
              （4）A2、A5组酶活力与A0组芽孢杆菌相同，两位同学对此做出了推测：．
              ①同学甲：A2、A5组芽孢杆菌可能未发生基因突变，用 技术检测即可证实．
              ②同学乙：A2、A5组与A0组酶活力虽然相同，但也可能存在不同的基因突变，理论上的解释是 ．
              难度：中等
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            • 8． 某实验小组欲从豆油污染的土壤中筛选出能高效降解脂肪的菌株．请回答：
              （1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以 为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于 培养基．
              （2）为避免培养皿污染，需将培养皿呈 状态放置．为避免培养液中菌体浓度过高，需将培养液进行 处理．为了排除 ，需设置接种等量无菌水的培养基作为空白对照．
              （3）为了筛选出菌株，可将适量的 试剂滴加在平板中的菌落周围，洗去浮色后，如果菌落周围的现象是 ，则说明此种菌能够分泌脂肪酶．
              （4）纯化菌种时，为了得到单菌落，可采用 法接种于新的培养基平板上．
              难度：中等
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            • 9． （1）传统发酵技术是我们酿酒、酿醋、制作腐乳、制作泡菜的常用技术，以上技术应用到的主要菌种名称依次是酵母菌、醋酸菌、 、 ．制作腐乳与制作泡菜的菌种在细胞结构上的本质区别是  ．
              （2）在微生物计数方法中，若不需要区分死菌和活菌，可利用特定的细菌计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量．若只对活菌计数，常用的活菌计数方法是 法，计数原则一般选择菌落数在30﹣300的平板计数．在微生物的实验室培养中，必须在无菌条件下完成的操作是 （多项选择）
              A．配制培养基        B．倒平板        C．接种           D．培养
              （3）植物激素在组织培养中具有重要作用，启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键激素是 ．
              （4）提取玫瑰油、薄荷油可以利用 把挥发性强的芳香油携带出来；橘皮中的芳香油可以使用压榨法，但要用 充分浸泡原料，破坏细胞结构，分解其细胞壁的果胶，防止橘皮压榨时滑脱．如果提取柠檬油的原料柠檬花在蒸馏过程中，精油易被水蒸气分子破坏，宜采用 法．
              难度：中等
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            • 10． 研究人员成功地从土壤中筛选到能产生纤维素酶的微生物．请就如何从土壤中获得纤维素分解菌回答以下问题：
              （1）纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即 
              （2）若获得纯净的菌株，常采用 进行接种，此过程所用的接种工具是接种环，操作时采用 灭菌的方法．
              （3）刚果红可以与纤维素等多糖物质形成红色复合物，但并不和水解后的 和葡萄糖发生这种反应．常用的刚果红染色法有两种：第一种是先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应；第二种是在 时就加入刚果红．  （填“第一种”或“第二种”）方法会使菌落之间发生混杂．
              （4）如果观察到产生 的菌落，说明可能获得了纤维素分解菌．为了确定是纤维素分解菌，还需要进行发酵产纤维素酶的实验．
              （5）如图为实验室培养和纯化菌种过程中的部分操作步骤，下列说法错误的是 

              A．①②③步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行
              B．步骤③中，每次划线前后都需对接种环进行灼烧处理
              C．步骤①中待倒入的培养基冷却后盖上培养皿的皿盖
              D．划线接种结束后，将图④平板倒置后放入培养箱中培养．
              难度：中等
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