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          共50条信息

            • 1． 以下是有关DNA粗提取实验的阅读材料：
              A．核酸极不稳定，在较为剧烈的化学、物理因素和酶的作用下很容易降解。在制备DNA时要加入DNA酶（水解DNA的酶）的抑制剂--柠檬酸钠，以除去Mg，防止DNA酶的激活。
              B．核酸中的DNA和RNA在生物体内均以核蛋白（由核酸和蛋白质组成）的形式存在，DNA核蛋白在2mol/L的NaCl溶液中溶解度很高，但在0.14mol/L的NaCl溶液中的溶解度很低；而RNA核蛋白易溶于0.14mol/L的NaCl溶液。
              C．用苯酚处理，可使蛋白质变性，且留在苯酚层内；在DNA溶液中加入2.5倍体积分数为95%的酒精，可将DNA分离出来。此时DNA十分黏稠，可用玻璃棒搅成团取出。
              D．DNA在强酸环境下，水解产生脱氧核糖等小分子，与二苯胺酸性溶液反应，生成蓝色化合物。
              E．实验材料与仪器：柠檬酸钠溶液、石英砂、0.14mol/L的NaCl溶液、2mol/L的NaCl溶液、蒸馏水、苯酚、体积分数为95%的酒精、二苯胺试剂、浓硫酸、花椰菜、研钵、烧杯、漏斗、玻璃棒、量筒、石棉网、酒精灯、吸管、试管等。
              F．实验步骤：研磨得匀浆→过滤得滤液→滤液稀释6倍→离心处理得沉淀物→沉淀物再溶解→加苯酚静置后去上层清液→提取出DNA→DNA鉴定。
              （1）研磨时，取10g花椰菜，加适量的石英砂和______、______。
              （2）将滤液稀释6倍，其目的是______。
              （3）取沉淀物，置于2mL______溶液中，使DNA核蛋白再次溶解，再加2mL______充分振荡后静置，待其分层后，弃去上层液。该步骤的目的是除去______。
              （4）如何将剩余溶液中的DNA提取出来？______。
              （4）如何证明提取的物质确实是DNA？______。
              难度：较易
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            • 2．

              为了获得较多、较纯、较完整的甜菜总DNA,科研人员比较了A方法(通过CTAB裂解细胞,并与蛋白质形成复合物)、B方法(通过SDS裂解细胞释放核DNA,使蛋白质变性)、C方法(通过高盐沉淀蛋白质)从嫩叶、块根中提取总DNA的效果,主要实验步骤和相关检测结果如下,其中氯仿—异戊醇不溶于水且密度均大于水,DNA不溶于氯仿—异戊醇,蛋白质等溶于氯仿—异戊醇。分析回答:

              主要提取过程
              ①将液氮冷冻的组织研磨成粉末
              ↓
              ②分别用A、B、C三种不同方法处理
              ↓
              ③DNA粗提液在65 ℃水浴保温60 min,搅拌均匀
              ↓
              ④加氯仿—异戊醇,离心取　?　,加冷酒精,收集沉淀
              ↓
              ⑤加入RNA酶,37 ℃水浴保温20 min,重复步骤④
              ↓

              ⑥将沉淀室温干燥后,溶于超纯水中,-20 ℃保存备用


              结果检测

              组织

              方法

              组别

              OD260/OD230

              OD260/OD280

              得率/(μg·mg-1)

              嫩叶

              A方法

              A1

              1.970

              1.821

              0.105

              B方法

              B1

              1.973

              1.719

              0.096

              C方法

              C1

              1.647

              1.568

              0.082

              块根

              A方法

              A2

              1.888

              1.888

              0.029

              B方法

              B2

              1.811

              1.682

              0.030

              C方法

              C2

              1.376

              1.320

              0.020

              注: ①纯净的DNA样品OD260/OD230值约为2.0,过低表明小分子物质残留较多;②纯净的DNA样品OD260/OD280值约为1.8,若比值大于1.8表示存在RNA残留,若小于1.8表示存在蛋白质残留。③得率是指每毫克组织所提取的DNA量。


              (1) 步骤③将DNA粗提液在65 ℃水浴保温60 min的目的是           。步骤④“?”表示       。步骤⑤中加RNA酶的作用是                　。 

              (2) 影响DNA纯度的物质主要有       。提取的DNA中RNA残留较多的方法是       。以嫩叶为材料提取DNA的得率较高,原因是            。 

              (3) 电泳可以直观对比DNA的完整性,分子大小不同的DNA在凝胶上迁移速率不同,从而产生不同的条带。下图是上述实验中提取到的总DNA凝胶电泳结果,其中M是已知大小的不同DNA的混合物。实验结果显示A、B方法提取的总DNA电泳结果只有一条带,而C方法有明显的“拖尾”现象。


              ①只出现一条带的原因是                        。 

              ②出现“拖尾”现象的原因是                    。 

              难度：难
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