​（5）如果利用上述方法培育出的蕃茄不具抗软化性状，经分子杂交技术检测，发现细胞内有抗PG存在，但检测不到mRNA2分子，可能原因是目的基因（抗PG）上游缺少___________。

下面是将乙肝病毒控制合成病毒表面主蛋白的基因HBsAg导入巴斯徳毕赤酵母菌生产乙肝疫苗的过程及有关资枓：

资料1：巴斯德毕赤酵母菌可用培养基中甲醇作为其生活的唯一碳源，此时AOX1基因受到诱导而表达（5′AOX1和3′AOXl（TT）分别是基因AOX1的启动子和终止子）。

资料2：巴斯德毕赤酵母菌体内无天然质粒，所以改造出了图1所示的pPIC9K质粒用作载体，其与目的基因形成的重组质粒经酶切后可以与酵母菌染色体发生同源重组，将目的基因整合于染色体中已实现表达。

资料3:限制酶酶切位点

（1）如果要将HBsAg基因和pPIC9K质粒重组，应在图2中HBsAg基因两侧的A和B位置接上_______限制酶识别序列，这样可避免质粒和目的基因自身环化。

（2）为确认巴斯德毕赤酵母茵转化是否成功，在培养基中应该加入卡拉霉素以便筛选，转化后的细胞中是否含有HBsAg基因，可以用___________方法进行检测。

（3）转化的酵母菌在培养基上培养一段时间后，需要向其中加入___________以维持其生活，同时诱导HBsAg基因表达。   

（4）与大肠杆菌等细菌相比，用巴斯德毕赤酵母菌细胞作为基因工程的受体细胞，其优点是在蛋白质合成后，细胞可以对其进行___________并分泌到细胞外，便于提取。

（5）下图为HBsAg某DNA片段一条链的碱基排列顺序。其中图1的碱基排列顺序已经解读，其顺序是:GGTTATGCGT，请解读图2显示的碱基排列顺序：______________________。

治疗性克隆对解决供体器官缺乏和器官移植后免疫排斥反应具有重要意义。流程如下：

（1）过程①采用的是细胞工程中的__________技术，过程②采用的是胚胎工程中的_____技术。

（4）胚胎干细胞可以来自于囊胚中的___________。在一定条件下，胚胎干细胞可以分化形成不同的组织器官。若将图中获得的组织器官移植给个体_____（填“A”或“B”），则不会发生免疫排斥反应。

屠呦呦因发现青蒿素治疗疟疾的新疗法而获得诺贝尔奖。寄生于人体细胞内的疟原虫是疟疾的病原体。科学家通过紫外线处理大量青蒿幼苗后，偶然发现一株高产高效植株，进行基因测序发现该植株控制青蒿素合成相关的一种关键酶的基因发生了突变。

（1）如果用高产青蒿关键酶基因的mRNA反转录产生的cDNA片段与载体连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群叫做青蒿的___________；获得的cDNA与青蒿细胞中该基因碱基序列_________(填“相同”或“不同”）。在提取RNA时需要向提取液中添加RNA酶抑制剂，其目的是___________。

（2）将获得的突变基因导人普通青蒿之前，先构建基因表达载体，图1、2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答：

用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒时不能使用Sma Ⅰ切割，原因是__________。构建重组质粒时，在其目的基因前需要添加特定的启动子，启动子的作用是________________。

（3）转基因技术是否成功，需要对受体细胞进行分子水平的检测，首先是用____________方法检测受体细胞染色体DNA上是否插入目的基因，其次需要用_____________方法检测目的基因是否转录出了mRNA。最后，还要检测人乳铁蛋白是否成功表达。

(1) 过程①注射的A物质是指________________________

(2) 过程③需要用同种限制酶分别切割目的基因和载体，其目的是________。

(3) 基因工程技术引起的生物变异属于可遗传变异中的________。

(4) 过程③中构建的基因表达载体除了含有目的基因外，在组成上还需要含有            。

(5) 过程④中，受精卵一般作为动物基因工程的受体细胞，除了因为受精卵的具备全能性外，还有什么优点？         。

下图是利用基因工程技术生产人胰岛素的操作过程示意图，请根据图回答。

（1）能否利用人的皮肤细胞来完成Ⅰ过程？        。为什么？                 。

（2）若图中B物质共有a个碱基对，其中鸟嘌呤有b个，则Ⅳ、Ⅴ过程连续进行4次，至少需要提供胸腺嘧啶               个。

（3）B与C经切割产生相同的              ，再加入适量的              ，才可形成D。

（4）为使过程Ⅷ更易进行，可用                         （药剂）处理E。

(1)“剪切”所使用的酶是______________，“剪切”结果使DNA分子片段产生了________。携带“β胡萝卜素合成基因”进行转化的载体具有一个至多个___________，以供外源基因插入。

(2)在“黄金水稻”的培育中，能确定“β胡萝卜素合成基因”已成功在水稻体内表达的简 便方法是____________。

下图是利用转基因技术生产干扰素的简化流程。请分析回答：

(1)过程①使用的限制性核酸内切酶能使特定部位的两个脱氧核苷酸之间的                      （化学键）断开。运载体的黏性末端与目的基因DNA片段的黏性末端就可通过             原则结合。

(2）过程②是                ,它也是基因工程的核心。图中A上除了目的基因外,还必须有启动子、终止子和          。启动子是RNA聚合酶             的部位,以驱动干扰素基因转录。为直接检测干扰素基因是否转录，可从细胞中提取          与用放射性同位素标记的____________作探针进行分子杂交

(3) 利用PCR扩增仪大量扩增目的基因的前提是目的基因的核苷酸序列要有一段是已知的,以便根据这一序列合成引物，除了该物质和目的基因外,扩增仪中还需加入四种脱氧核苷酸和           酶，并适时调整温度，才能使目的基因数量成指数式扩增。